第一頁，共61頁。制藥生產潔凈控制主要:（一）人員控制系統（二）公用工程控制系統（三）設備控制系統（四）物料控制系統（五）生產過程控制系統（六）質量檢測控制系統第二頁，共61頁。相關術語潔凈室(區)：需要對塵粒及微生物含量進行控制的房間(區域)。懸浮粒子：潔凈室內懸浮在空氣約在0.1μm至5μm之間的固體和液體粒子，用于空氣潔凈度分級。潔凈度：按單位容積空氣中某種粒子的數量來區分的潔凈程度。第三頁，共61頁。相關術語空氣凈化：去除空氣中的污染物質，使空氣潔凈的行為.靜態測試：指潔凈廠房（區）的凈化空氣調節系統已處于正常運行狀態，生產工藝設備已安裝，沒有生產活動且除了測試人員（不得超過2人）無操作人員在場的狀態，測試記錄和報告中應注明所測試的狀態。動態測試：指潔凈室已處于正常生產狀態下進行的測試。第四頁，共61頁。常見微生物的存在環境G+球菌：人G+芽胞桿菌：不正確的清潔、空氣G-桿菌：水、不良衛生、耐藥菌株酵母菌：食物、不良衛生、空氣霉菌；木料、食物第五頁，共61頁。細菌的形態●球菌φ一般在1.0um（如四鏈球菌、八聯球菌、葡萄球菌）；

●桿菌長1~3um、寬0.3~0.5um（大腸桿菌、芽孢桿菌）；●病毒個體最小，多數0.1um左右。●內毒素：革蘭氏陰性菌死亡解體后，才顯示出一系列的內毒素生物活性（耐熱、可過濾、易吸附等）第六頁，共61頁。粘質沙雷氏菌的菌落特征

沙門氏菌的菌落特征

銅綠假單孢菌的菌落特征

紅酵母的菌落第七頁，共61頁。潔凈環境監測指標及方法塵埃粒子數微生物數靜壓差溫、濕度風量照度噪聲第八頁，共61頁。潔凈環境監測指標及方法靜態測試：指潔凈廠房（區）的凈化空氣調節系統已處于正常運行狀態，生產工藝設備已安裝，沒有生產活動且除了測試人員（不得超過2人）無操作人員在場的狀態，測試記錄和報告中應注明所測試的狀態。動態測試：指潔凈廠房（區）的凈化空氣調節系統已處于正常運行狀態，生產設備按預約的工藝模式運行并有規定數量的操作人員在現場操作的狀態。

第九頁，共61頁。確定關鍵點靠近產品的地方；與產品接觸的表面；與產品接觸的物品周圍的表面；氣流流型；活動頻繁的地方；第十頁，共61頁。潔凈環境監測指標及方法測試狀態：對于單向流，測試空氣凈化系統至少運行10分鐘后進行。對于非單向流系統，至少運行30分鐘后進行第十一頁，共61頁。潔凈環境監測指標及方法塵埃粒子數測定：每次生產前及一定的生產周期后須對清潔后的潔凈室進行塵埃粒子數的檢測，以評價和掌握潔凈室塵埃粒子的含量。監測與產品接觸的壓縮空氣和其他氣體如氮氣等.第十二頁，共61頁。潔凈區塵埃粒子數標準潔凈級別測試狀態≥0.5μm粒子數測試狀態標準糾偏限警戒限標準糾偏限警戒限A級靜態352035202800000動態352035202800000B級靜態352035202800000動態352000352000280000200020001600C級靜態352000352000280000200020001600動態200002000016000D級靜態、動態200002000016000第十三頁，共61頁。塵埃粒子監測周期及采樣量潔凈度級別采樣量，L/次采樣周期取采樣次數A級5.661次/周每點取3次B級5.661次/周C級2.831次/周每點取3次D級2.831次/月每點取3次第十四頁，共61頁。潔凈區微生物監測方法微生物測定：有兩種方法，沉降菌測定和浮游菌測定。沉降菌測定：采用沉降法，即通過自然沉降的原理收集在空氣中的生物性粒子于培養基平皿上，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區）的潔凈度等級。第十五頁，共61頁。潔凈區微生物監測方法空氣微生物監測---浮游菌和沉降菌孰優孰劣？

沉降菌測試屬于被動式取樣法，對空氣環境破壞小放置時間長，可以做時間段的環境監控取樣方法并不能給出定量的數據

空氣浮游菌測試主動式采樣法，定量且對微生物無選擇性時間“點”的采樣第十六頁，共61頁。沉降菌的監測方法步驟：在皿底標記取樣點號、取樣日期、時間，在取樣點打開皿蓋，皿底放在平面上，將皿蓋斜靠在皿底邊緣，保證皿蓋不掉下來且盡可能少的覆蓋培養基表面。測試結束后，小心蓋上培養皿，傳出潔凈區。30-35℃的培養箱中培養3天。第十七頁，共61頁。沉降菌的監測方法沉降菌監測的注意點：

擺放位置和高度（抑制物質的引入）采樣本身引入的污染（外表清潔，培養基質量，擺放位置和人員）培養基的脫水問題（新鮮培養基和擺放時間）第十八頁，共61頁。沉降菌（CFU）標準潔凈度測試狀態CFU/皿.0.5h測試狀態CFU/皿.4h合格標準糾偏限警戒限合格標準糾偏限警戒限A級靜態≤1﹤1/動態﹤1﹤1/B級≤1﹤1/553C級332505030D級1010810010080第十九頁，共61頁。浮游菌的監測方法步驟：

檢測設備：浮游菌采樣器。采用計數濃度法，即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養基中，經若干時間，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，從而判斷潔凈環境內單位體積空氣中的活微生物數，以此來評定潔凈室（區）的潔凈度等級。第二十頁，共61頁。浮游菌的監測方法監測方法空氣浮游菌取樣器采樣的位置和高度培養基的脫水問題采樣操作對于生產環境的污染顆粒捕獲率的變化Feller校驗的重要性第二十一頁，共61頁。浮游菌的監測方法步驟:（同沉降菌)30-35℃的培養箱中培養3天。第二十二頁，共61頁。浮游菌標準潔凈度級別測試狀態浮游菌CFU/m3測試狀態浮游菌CFU/m3合格標準糾偏限警戒限采樣體積合格標準糾偏限警戒限采樣體積A級靜態﹤1﹤1/600L動態﹤1﹤1/1000LB級552600L101051000LC級808060400L10010080500LD級10010080100L200200160100L第二十三頁，共61頁。潔凈室環境控制當空氣潔凈度要求為C級、D級時，采用非單向流，換氣次數分別大于25次/小時和15次/小時.第二十四頁，共61頁。監測表面的微生物擦拭法：如棉簽法、擦拭面積25cm2接觸平皿法第二十五頁，共61頁。監測方法表面微生物監測和人員衛生監測接觸碟取樣適用于平整的規則性表面取樣方法屬于定量檢測方法棉簽取樣適用于不規則表面取樣方法屬于定量檢測方法監測表面的微生物第二十六頁，共61頁。潔凈區表面微生物標準潔凈級別設備、墻壁表面菌落數（CFU/皿）人員衛生（CFU/皿）潔凈服與用具菌落數（CFU/皿）糾偏限警戒限糾偏限警戒限糾偏限警戒限A級1＜11＜11＜1B級113131C級533131D級108----第二十七頁，共61頁。潔凈室環境控制壓差的控制：潔凈區與非潔凈區之間、不同級別潔凈區之間的壓差應當不低于10帕斯卡。必要時，相同潔凈度級別的不同功能區域（操作間）之間也應保持適當的壓差梯度。溫濕度的控制：無特殊要求時，生產中潔凈室內溫度應嚴格控制在18～26℃、相對濕度控制在45%～65%。第二十八頁，共61頁。潔凈室環境控制壓差測定：在不同級別相鄰的兩個房間安裝壓差表，每天進行記錄溫濕度測定：在潔凈間內放置溫濕度計，每天進行記錄。風量的測試：采用風速儀對送風口的風速進行測試，通過風速和送風口的截面積計算出風量。通過風量就可以換算出房間的換氣次數。另外潔凈室環境評價指標還包括照度、噪聲的測試。第二十九頁，共61頁。潔凈室環境控制微生物的控制：

由于細菌依附在懸浮粒子上，微粒被過濾的同時，細菌也能被很好的濾掉。

1、空氣凈化系統良好的運轉，控制潔凈室環境中的微生物。

2、采取有效的環境消毒措施。第三十頁，共61頁。潔凈環境的控制空氣過濾：潔凈度的控制靠良好的空氣凈化設施，一般采用三級過濾。初效過濾器用于新風過濾中效過濾器用于高效過濾器之前高效過濾器主要對象是﹤

1.0μm的塵埃對細菌的穿透率為0.0001%，對病毒的穿透率為0.0036%，所以，通過高效過濾器的空氣可視為無菌。第三十一頁，共61頁。潔凈室環境控制日常消毒：

每天生產結束后，用75%乙醇或1.5‰新潔爾滅溶液等消毒劑擦拭設備、桌面、門窗、墻壁等。消毒劑及更換周期：

石炭酸、75％乙醇和新潔爾滅（0.15％）。75％乙醇和新潔爾滅（0.15％），每1個月交替更換使用。第三十二頁，共61頁。潔凈區環境控制與評價原則制定和實施系統的環境監測方案?監控項目?取樣位置和計劃?現場監測方法和結果記錄?微生物鑒別?偏差調查與糾偏措施?人員培訓第三十三頁，共61頁。潔凈環境的控制減少潔凈區操作人員對環境的影響：在藥品生產過程中，人是最大的污染源，人的因素對保證產品質量至關重要重要。因此控制潔凈區人員的多少、操作動作的幅度、工作服的式樣、質地及穿戴等對微粒和細菌的含量都有明顯的影響。第三十四頁，共61頁。潔凈環境的控制維護好潔凈區的環境，是我們進入潔凈區每個人員必須要堅持的，要嚴格控制潔凈工作服的穿戴、清洗和滅菌周期；嚴格控制操作人員數量、約束人員的行為，保證潔凈區的凈化級別。養成良好的衛生習慣。不光是環境衛生還包括個人衛生和工藝衛生。第三十五頁，共61頁。進入潔凈區人員要求新進人員在崗人員患病健康檢查上崗離崗治療或限定工作崗位

每年一次合格潔凈區內個人衛生管理規程包裝區內個人衛生管理規程工作服清洗消毒管理規程所有健康檢查患病及治療史均存入健康檔案上崗前不合格第三十六頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程

藥品生產車間、工序、崗位均應按生產和空氣潔凈度級別的要求制定清潔規程，內容包括：清潔方法、清潔程序、清潔的周期、使用的清潔劑或消毒劑、清潔工具的清潔方法和存放地點。第三十七頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程除符合一般生產區要求外，還應做到每天全面擦試工作場所墻面、頂棚、照明、排風口及其他附屬裝置，定期對室內進行消毒，按SOP規定要求對環境檢測塵埃粒子、沉降菌、浮游菌數，并有相關記錄。第三十八頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程為有效地防止和避免因設備功能不正常或設備容器未經清潔、保養而對藥品生產和質量的造成污染，所有設備應建立書面的設備維護和清潔規程、與藥品直接接觸的設備表面應光滑、平整、易清洗消毒、耐腐蝕，不與藥品發生化學變化或吸附藥品。第三十九頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程人是藥品生產的最大污染源之一，進出潔凈區的人員必須嚴格按工藝要求的凈化程序進出。傳染病患者、健康的傳染病病毒攜帶者、體表有傷口者、皮膚病患者及藥物過敏者不得從事直接接觸藥品的生產操作；有呼吸道感染、腸炎和皮膚病的人員不得進入潔凈。第四十頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程進入潔凈區的人員不得不得化妝，不得涂抹手及腳指甲油，不得接種假睫毛，頭發不得留過肩。潔凈區操作人員不得佩戴飾物、手表，不得將手機、鑰匙及一切與生產無關的物品帶入到潔凈區。D級潔凈區崗位人員不得穿潔凈衣服到一般生產區。第四十一頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程潔凈區的人數應按要求控制（標示牌），操作和行動等要進行自我約束。非本崗位人員進入潔凈區（包括維修、輔助人員）應定期進行衛生和微生物學基礎知識、潔凈作業等方面的培訓及考核。非本崗位人員進入潔凈區要嚴格按規定程序進出、作業，并有登記記錄。第四十二頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程

工作服應制定清洗周期，工作服包括服裝和一切用于包裹頭、臉、手臂等的遮護用品。不同空氣潔凈度級別使用的工作服應分別清洗、整理，必要時消毒或滅菌。工作服洗滌、滅菌時不應帶入附加的顆粒物質和纖維毛。潔凈工作服的質地應光滑、不產生靜電、不脫落纖維和顆粒物質。無菌工作服必須包蓋全部頭發、胡須及腳部，并能阻留人體脫落物。第四十三頁，共61頁。潔凈區衛生管理規程

D級潔凈區工作服每兩天清洗一次；A級、B級及C級潔凈區工作服每班清洗并滅菌，超過48小時后重新滅菌；

A級、B級及萬級潔凈區的工作服只能使用一次，下次使用必須重新洗消滅菌。第四十四頁，共61頁。潔凈室清潔三原則第四十五頁，共61頁。潔凈室清潔三原則原則一：用滅菌的純化水或注射用水和新鮮過濾得清潔劑：所有過濾的清潔劑必須盛裝在清潔并滅過菌的容器中，并正確貼簽；把預先過濾的清潔劑存放在潔凈室中可減小污染的風險。第四十六頁，共61頁。潔凈室清潔三原則原則二：使用清潔的工具和物料以避免將污染物帶入潔凈室：不銹鋼表面較好，塑料表面易劃痕并滯留塵粒和微生物；不要使用帶木柄的清潔工具，因其易脫落塵粒；毛刷易斷且滯留微生物，不宜使用；拖布和抹布應用與潔凈室相適應并不易產生脫落纖維的物料制成；抹布應粘附塵土和細菌，且只使用一次；潔凈室使用的真空吸塵器應安裝HEPA過濾器并定期測試。第四十七頁，共61頁。潔凈室清潔三原則原則三：清潔過程中不得增加潔凈室的污染物：正確的清潔順序；正確的行為。第四十八頁，共61頁。潔凈區清潔頻率取決于對潔凈室塵粒和微生物監測的結果（空氣、表面）；符合GMP要求；分裝區域每一批分裝后都應及時進行清潔；所有清潔區域的地面、桌面、設備表面每天至少清潔一次.第四十九頁，共61頁。常用的滅菌方法2015版：

最終滅菌法：濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法。

非最終滅菌法：過濾除菌法、無菌生產工藝。第五十頁，共61頁。常用的滅菌方法一、濕熱滅菌法：本法系指物質在滅菌器內利用高壓蒸汽或其他熱力學滅菌手段殺滅細菌，滅菌能力甚強，為熱力學滅菌中最有效及用途最廣的方法。藥品、藥品的溶液、玻璃器械、培養基、無菌衣、敷料以及其他遇高溫與濕熱不發生變化或損壞的物質，均可用本法滅菌。用于濕熱滅菌法的生物指示劑：嗜熱脂肪芽孢桿菌、生孢梭菌,培養:56℃/48h.滅菌效果驗證應進行滿載熱分布/熱穿透、細菌挑戰性、空載試驗、熱穿透F0值。第五十一頁，共61頁。常用的滅菌方法二、干熱滅菌法：本法系指物質在干燥空氣中加熱達到殺滅細菌的方法。160～170℃2小時以上，

170～180℃1小時以上，

250℃45分鐘以上（除熱源）。用于干熱滅菌法的生物指示劑：枯草芽孢桿菌孢子

三、除菌濾過法：本法系利用細菌不能通過致密具孔濾材的原理，除去對熱不穩定的藥品溶液或液體物質中的細菌從而達到無菌要求。過濾器材通常有濾柱、濾膜等。

用于濾過滅菌法的生物指示劑：黏質沙雷菌、缺陷假單孢菌第五十二頁，共61頁。常用的滅菌方法四、輻射滅菌法：

本法系通過將最終產品的容器和包裝暴露在由適宜放射源（通常用Co60

）輻射的γ射線或適宜的電子加速器發生的射線中，達到殺滅細菌的目的。

用于輻射滅菌法的生物指示劑：短小芽孢桿菌孢子五、環氧乙烷滅菌法：本法系將產品暴露在充有環氧乙烷的環境中，使之達到滅菌的目的。本方法適用于氣體中穩定的物質。用于環氧乙烷滅菌法的生物指示劑：枯草芽孢桿菌孢子第五十三頁，共61頁。常用菌種保藏方法1、傳代培養保藏法又有斜面培養、穿刺培養、庖肉培養基培養等（后者作保藏厭氧細菌用），培養后于4~6℃冰箱內保存。2、液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。第五十四頁，共61頁。3、載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。4、冷凍保藏法可分低溫冰箱（－20~－30℃，－50~－80℃）、干冰酒精快速凍結（約－70℃）和液氮（－196℃）等保藏法。5、冷凍干燥保藏法先使微生物在極低溫度（－70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現象除去水分（真空干燥）。第五十五頁，共61頁。各類菌種保藏條件及時間菌種培養基保存溫度傳種時間細菌一般多用于營養瓊脂或根據菌種規定選用培養基4~6℃芽孢桿菌3~6個月，其它細菌每個月酵母菌一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂4~6℃一般4~6個月絲狀真菌一般用PDA瓊脂、蔡氏瓊脂或麥芽汁瓊脂等4~6℃每4個月移植一次（每2個月移植一次）第五十六頁，共61頁。菌種的傳代方法1：菌斜面菌斜面（保存）；方法2：菌斜面營養肉湯分離平板菌斜面；常用分離平板：大腸埃希菌——EMB瓊脂平板；銅綠假單胞菌——溴化十六烷三甲銨瓊脂培養基；金黃色葡萄球菌——甘露醇氯化鈉瓊脂培養基；沙門菌——SS瓊脂平板。第五十七頁，共61頁。對照用菌液制備菌種

工作菌種培養基菌懸液對照菌液大腸桿菌營養瓊脂斜面營養肉湯0.9%氯化鈉溶液沙門菌營養瓊脂斜面營養肉湯0.9%氯化鈉溶液金黃色葡萄球菌營養瓊脂斜面營養肉湯0.9%氯化鈉溶液銅綠假單胞菌營養瓊脂斜面營養肉湯0.9%氯化鈉溶液生孢梭菌硫乙醇酸鹽培養基硫乙醇酸鹽培養基0.9%氯化鈉溶液白色念珠菌真菌瓊脂斜面真菌培養基0.9%氯化鈉溶液第五十八頁，共61頁。革蘭氏染色革蘭氏染色反應