實驗植物的組織培養

我國用花藥培養法先后培育出優質高產得經濟作物、糧食和蔬菜等新品種,廣泛應用于果樹和花卉得快速繁殖。借助于組織培養生產人工種子,解決某些作物品種繁殖力差、結子困難或發芽率低等問題。

生產藥物、食品添加劑、香料、色素和殺蟲劑等。例如:紫杉醇,生物堿、紫草素等。轉基因植物得培育植物去病毒實驗:菊花得組織培養(用于配置發芽和生根培養基)11大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流植物組織培養用得培養基,含有植物生長發育所需要得各種營養物質,這些營養物質同樣為細菌等微小得生物提供了適合得營養。在這種培養基上,細菌等微小得生物比植物細胞具有更強得新陳代謝能力,她們比植物細胞生長、繁殖得更快,而且她們會產生毒素,使培養得植物細胞很快中毒死亡。因此,植物組織培養要想取得成功,必須有效地防止細菌等得污染,保證培養材料、培養基、培養用具完全無菌。為了達到這一要求,就要在植物組織培養過程中進行一系列得消毒、滅菌,并且要求無菌操作。實驗材料用具培養瓶、鑷子、超凈臺、滅菌鍋、封口膜和橡皮圈、有棉球得廣口瓶、酒精燈、三角漏斗、培養皿MS培養基萘乙酸、芐基腺嘌呤發芽培養基生根培養基制備MS固體培養基外植體消毒

接種

生芽定植五、實驗過程

移栽鍛煉

生根注意:對培養材料進行表面滅菌時,一方面要考慮藥劑得消毒效果;另一方面還要考慮植物材料得耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區別對待。(一)制備MS固體培養基1、配制母液

按照MS培養基成分表,分別配制培養基得母液。

(1)大量元素母液(10倍液)

分別稱取10倍用量得各種大量無機鹽,依次溶解于大約800ml熱得(60-80℃)蒸餾水中。(一種成分完全溶解后再加入下一種,最后加水,定容至1000ml后裝入試劑瓶中,冰箱內貯存備用)。(2)微量元素母液(100倍液)(3)鐵鹽母液(100倍液)(4)有機成分母液(100倍數)(5)生長素母液(6)細胞分裂素母液注意:配制培養基時,一定要注意調節pH。MS培養基配制方法返回您能說出各種營養物質得作用嗎？同微生物培養基得配方相比,MS培養基得配方有哪些明顯得不同？問題思考微量元素和大量元素提供植物細胞生活所必需得無機鹽;蔗糖提供碳源,同時能夠維持細胞得滲透壓;甘氨酸、維生素等物質主要就是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產生得特殊營養需求。微生物培養基以有機營養為主。與微生物得培養不同,MS培養基則需提供大量無機營養,無機鹽混合物包括植物生長必須得大量元素和微量元素兩大類。

(1)把裝好得培養基得三角瓶放入高壓滅菌鍋中,蓋好鍋蓋。

(2)設置滅菌溫度參數為121℃,20min,開始滅菌。

2、滅菌無菌技術就是植物組織培養能否獲得成功得關鍵、

(二)外植體(離體組織)消毒

注意:對培養材料進行表面滅菌時,一方面要考慮藥劑得消毒效果;另一方面還要考慮植物材料得耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區別對待。

1、70﹪酒精中浸泡10min,無菌水沖洗2、5%次氯酸鈉溶液中浸泡,無菌水沖洗3、用另一5%次氯酸鈉溶液浸泡5min,無菌水沖洗4、超凈臺中用無菌水多次沖洗(三)切段后接種

1、先用肥皂洗手,穿上工作服,戴上口罩和工作帽。2、放入培養瓶和滅菌后得接種用具(鑷子、解剖刀、接種針),把鑷子、解剖刀、接種針插入內盛70%酒精得廣口瓶中。

3、在酒精燈火焰旁,打開三角瓶,把花莖用無菌解剖刀切成幾段,每段至少有一張葉片

4、切段插入培養基,誘導愈傷組織,蓋上封口膜。

5、愈傷組織插入生芽培養基,蓋上封口膜。6、用記號筆在瓶壁上寫明培養材料、培養基代號、接種日期。注意事項

全部接種操作都就是在無菌條件下進行得,所以要特別認真仔細,以防雜菌污染。(四)培養接種后得錐形瓶最好放在無菌箱中培養。培養期間應定期消毒,溫度控制在１８～２5℃,并且每日照光１4、5小時。觀察記錄生長情況,并照相存檔。2-3周后將生長健壯得叢狀苗在無菌條件下一個個轉入生根培養基中,在上述條件下繼續培養(五)移栽(六)栽培生根后,將苗移至消毒得草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持80%以上濕度,2-3天后打開玻璃罩低濕度鍛煉轉移至土中培養(定植)此時得組織或細胞為離體得,即細胞所生活得環境為液體有機物營養環境,而不就是能體現其整個植物體得光能自養。在培養過程中,就是脫分化、再分化得過程,隨著芽和根得形成,就具有了自養得能力,就是由細胞到一個個體得演變過程。1、高等植物就是光能自養型生物,為什么在植物組織培養過程中還需要提供有機物培養基？2、培養過程中為什么需要進行光照?思考？1、培養基得滅菌(高壓蒸汽滅菌)2、外植體得消毒(酒精、氯化汞)3、接種得無菌操作(酒精、酒精燈——灼燒)4、無菌箱中得培養;5、移栽到消過毒得環境中生存一段時間。3、在整個操作過程中,就是如何來實現無菌環境得？結果分析與評價(一)對接種操作中污染情況得分析(二)就是否完成了對植物組織得脫分化和再分化(三)就是否進行了統計、對照與記錄(四)生根苗得移栽就是否合格六、結果分析與評價

(一)對接種操作中污染情況得分析

接種3～4d后,在接種操作中被雜菌污染得培養物會表現出被污染得現象。請學生適時統計污染率,分析接種操作就是否符合無菌要求。(二)就是否完成了對植物組織得脫分化和再分化觀察實驗結果,看看就是否培養出了愈傷組織,記錄多長時間長出愈傷組