消毒與滅菌復習引入1.細菌群體生長曲線是怎樣的？3.與細菌致病性有關的細菌代謝產物有哪些？2.細菌在培養基中的生長現象？4.滅菌的指標是什么？細菌數目的對數培養時間（小時）510152025306.06.57.07.58.08.59.0活菌數總菌數教學內容和目標3.說出影響化學消毒劑作用的因素。2.闡述主要的熱力滅菌法、日光與紫外線滅菌法。

1.說出消毒、滅菌、防腐、無菌、無菌操作的概念。4.知道常用消毒劑的種類、使用濃度和用途。消毒(disinfection)：殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死細菌的芽孢，用以消毒的化學藥品稱為消毒劑。消毒劑對芽孢起作用則需要提高消毒劑的作用濃度和延長作用時間。基本概念滅菌(sterilization)：殺滅物體上所有微生物的方法，包括殺滅細菌芽胞、霉菌孢子在內的全部病原微生物和非病原微生物。經過滅菌的物品稱“無菌物品”。凡需要進人人體內部包括進入血液、組織、體腔的醫用器材,如手術器械、注射用具、一切置入體腔的引流管等,都要求絕對無菌。在實驗室,培養基和相關的試劑、器材也需要滅菌。防腐(antisepsis)：防止或抑制體外微生物生長繁殖的方法，細菌一般不死亡。無菌(asepsis)：不存在活的微生物，多是滅菌的結果。基本概念無菌操作：防止微生物進入機體或局部環境的操作技術。大家能舉例說出你們知道的消毒與滅菌的操作嗎？？？外科無菌手術消毒滅菌法化學消毒滅菌法物理消毒滅菌法(一)熱力滅菌法(二)輻射殺菌法(三)濾過殺菌法(四)干燥與低溫滅菌法高效消毒劑中效消毒劑低效消毒劑一、物理消毒滅菌法(一)熱力滅菌法?熱力滅菌法主要是利用高溫使菌體蛋白質變性或凝固，酶失去活性，而使細菌死亡。

?熱力滅菌是最可靠且普遍應用的滅菌法。

?在同樣溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱好。

1.干熱滅菌法

焚燒：直接點燃或焚燒爐內焚燒燒灼：直接火焰滅菌干烤：利用干烤箱滅菌171℃1h或160℃2h/121℃16h可滅菌，用于高溫下不變質、不損壞、不蒸發的物品，如玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器等。

干烤箱焚燒爐接種環酒精燈操作2.濕熱滅菌法煮沸消毒法?100℃、5min----殺死細菌的繁殖體100℃、1~2h----殺死細菌的芽孢?用途：飲水、食具和一般器械（刀、剪、注射器）等的消毒，水中加入2%碳酸鈉或2~5%石炭酸增強滅菌效果。流通蒸汽消毒法?又稱常壓蒸汽滅菌法，利用1個大氣壓下100℃的水蒸氣進行消毒細菌繁殖體15~30分鐘可被殺滅,常不能殺滅全部細菌芽胞。2.濕熱滅菌法間歇滅菌法?利用反復多次的流動蒸汽間歇加熱以達到滅菌的目的。將需要滅菌的物品置于流通蒸汽滅菌器內,100℃加熱15~30分鐘,殺死其中的繁殖體取出后放37℃孵箱過夜,使殘存的芽胞發育成繁殖體,次日再蒸一次。如此連續三次以上,可達到滅菌的效果。?此法適用于一些不耐高熱的含糖,牛奶等培養基。巴氏消毒法：

用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物、以保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。用于消毒牛乳酒類61.1～62.8℃30min；71.7℃15～30s。2.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法?最普遍、最有效的滅菌方法?壓力蒸汽滅菌器(autoclave)是一個密閉、耐高壓蒸鍋。滅菌的溫度取決于蒸汽的壓力,在1個標準大氣壓下,蒸汽的溫度是100℃。如果蒸汽被限制在密閉的容器中,隨著壓力升高,蒸汽的溫度也相應升高。在超過標準大氣壓103.4kPa(1.05kg/cm”)蒸汽壓下,溫度達到121.3℃，維持15-20分鐘,可殺滅包括細菌芽胞在內的所有微生物。高壓滅菌鍋?常用于一般培養基、生理鹽水、手術敷料等耐高溫、高壓、耐濕物品的滅菌。一、物理消毒滅菌法(一)輻射滅菌法紅外線?是一種0.77~1000μm波長的電磁波,尤以1~10um波長的熱效應最強。有較好的熱效應，但只能在照射到的表面產生。?殺菌作用與干熱相似，多用于醫療器械和食具的滅菌。?操作時應戴防護鏡。日光與紫外線(二)輻射滅菌法紫外線波長240~300nm的紫外線具有殺菌作用(包括日光中的紫外線),其中以265-266nm最強,這與DNA的吸收光譜范圍一致。紫外線主要作用于DNA,使一條DNA鏈上兩個相鄰的胸腺嘧啶以共價鍵結合,形成二聚體,干擾DNA的復制與轉錄,導致細菌的變異或死亡。紫外線穿透力較弱,可被普通玻璃、紙張、塵埃、水蒸氣等阻擋,故一般用于手術室、傳染病房、無菌實驗室的空氣消毒,或用于不耐熱物品的表面消毒。殺菌波長的紫外線對人體皮膚、眼睛有損傷作用,使用時應注意防護。(二)輻射滅菌法微波微波是波長為1~1000mm的電磁波,可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物。主要用于食品、非金屬器械、檢驗室用品、食品用具、藥杯等消毒。微波主要靠熱效應發揮作用,微波通過介質時,使極性分子快速運動,摩擦生熱,里外溫度同時上升。但微波的熱效應必須在有一定含水量的條件下才能顯示出來,在干燥條件下,即使再延長消毒時間也不能達到有效滅菌。金屬具有導電性，會導致微波輻射在金屬表面產生電流，從而產生火花，引起火災！！！！！！NONONO!!!電離輻射(二)輻射滅菌法?主要包括β射線、γ射線，產生游離基破壞DNA，破壞細胞膜。?電離輻射常用于大量的一次性醫用塑料制品的消毒;亦可用于食品、藥品和生物制品的消毒滅菌,而不破壞其營養成分?具有較高的能量與穿透力，對各種細菌均有致死作用。(三)濾過除菌法

濾過除菌法是用物理阻留的方法除去液體或空氣中的細菌、真菌,以達到無菌目的,但不能除去病毒和支原體。液體除菌所用的器具是濾菌器(flter),濾菌器含有微細小孔,只允許液體通過,而大于孔徑的細菌、真菌等顆粒不能通過。濾過法主要用于一些不耐高溫的血清、毒素、抗生素的除菌。濾菌器的種類很多,目前常用的有薄膜濾菌器,由硝基纖維素膜制成,依孔徑大小分為多種規格用于除菌的濾膜孔徑在0.45μm以下,最小為0.1μm。此外還有玻璃濾菌器、石棉濾菌器、素陶瓷濾菌器等。(三)干燥和低溫抑菌法?有些細菌的繁殖體在空氣中于燥時會很快死亡,例如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍亂弧菌、蒼白密螺旋體等。但有些細菌的抗干燥力較強,如溶血性鏈球菌在塵埃中可存活25天,結核分枝桿菌在干痰中數月不死。細菌芽胞的抵抗力更強,如炭疽芽胞桿菌的芽胞耐干燥20余年，干燥法常用于保存食物,濃鹽或糖漬食品可使細菌體內水分逸出,造成生理性干燥,使細菌的生命活動停止,從而防止食物變質。干燥法常用于保存食物。?多數細菌耐低溫，低溫常用作保存菌種，當溫度回升至適宜范圍時，細菌又能生長繁殖。為避免解凍時對細菌的損傷,可在低溫狀態下真空抽去水分,此方法稱為冷凍真空干燥法。該法是目前保存菌種的最好方法,一般可保存微生物數年至數十年。超低溫冰箱冷凍真空干燥器二、化學消毒滅菌法化學消毒滅菌法是使用化學消毒劑,其原理是:①促進菌體蛋白質變性或凝固;②干擾細菌的酶系統和代謝;③損傷細菌的細胞膜而影響細菌的化學組成、物理結構和生理活動,從而發揮防腐、消毒甚至滅菌的作用。化學消毒劑一般都對人體組織有害,只能外用或用于環境的消毒。需要強調的是,化學消毒劑的應用要適度、適量和消毒時間不能過長。要注意消毒劑對人類的毒副作用、對環境的污染作用和對物體的腐蝕作用。使之既達到消毒目的,又不造成對環境污染和對人類健康的損害。（一）高效消毒劑（high-leveldisinfectants）殺滅包括細菌芽胞在內的所有微生物，適用于不耐熱力滅菌，但要進入人體內部的物品，如內鏡，塑料外科器材消毒等的消毒。二、化學消毒滅菌法1.含氯消毒劑：次氯酸鈉、漂白粉等可用于物品表面、飲用水、皮膚、地面、排泄物、污水的消毒。但對金屬制品有腐蝕作用。2.過氧化物消毒劑：二氧化氯3.醛類消毒劑：戊二醛和甲醛，其殺菌機制是對細菌蛋白質和核酸的烷化作用，2%戊二醛適用于精密儀器/內鏡的消毒。4.環氧乙烷：氣體消毒劑/易燃/對人體有害。（二）中效消毒劑(intermediate-leveldisinfectants)不能殺滅細菌芽胞,但能殺滅細菌繁殖體(包括結核分枝桿菌)、真菌和大多數病毒。適用于纖維內鏡、喉鏡、陰道窺器、麻醉器材等。二、化學消毒滅菌法1.含碘消毒劑:常用為碘酊和碘伏。殺菌作用主要依靠其沉淀蛋白和強大的氧化能力。碘酊為碘的乙醇溶液;碘伏為碘與載體的結合物(常為聚維酮碘)。多用于皮膚黏膜、體溫計以及其他物品表面的消毒。碘酊對皮膚有刺激性,消毒后需以75%乙醇將其擦凈;碘伏著色易洗脫,刺激性較輕微。2.醇類消毒劑:醇類的殺菌活性隨碳鏈的長度增加而增加(最高活性見于5~8個碳原子)。乙醇(alcohols)或異丙醇最為常用,可迅速殺死細菌繁殖體、結核分枝桿菌、某些真菌和有包膜病毒。

殺菌機制在于去除細菌胞膜中的脂類,并使菌體蛋白質變性。乙醇濃度為70%~75%時殺菌力最強。異丙醇的殺菌作用比乙醇強,且揮發性低,但毒性較高。一般多用于醫療護理器材、皮膚的消毒和浸泡體溫計，二、化學消毒滅菌法（三）低效消毒劑(Low-leveldisinfectants)可殺滅多數細菌繁殖體,但不能殺滅細菌芽胞、結核分枝桿菌及某些抵抗力較強的真菌和病毒。季銨鹽類消毒劑：苯扎溴銨/新潔爾滅，可用于皮膚、黏膜、物品表面、地面消毒。氯已定/洗必泰可用于皮膚、黏膜、物品表面、地面消毒。高錳酸鉀：多用于皮膚、黏膜沖洗、浸泡消毒以及食(飲)具、蔬菜水果的消毒。1.高危器械物品

進入無菌組織的物品，所有這些物品都應該滅菌。最好用高壓蒸汽滅菌。

2.中危器械物品

接觸黏膜的器械。采用消毒即可。3.低危器械物品

只接觸未損傷皮膚一般用后清洗、消毒即可。4.快速周轉的醫療器械三、化學消毒滅菌法四、影響消毒滅菌效果的因素（一）微生物的種類（二）微生物的物理狀態（三）微生物的數量（四）消毒劑性質、濃度與作用時間（五）溫度（六）酸堿度（七）有機物（一）微生物的種類微生物對消毒滅菌的敏感性高低排序大致如下:真菌、細菌繁殖體、有包膜病毒、無包膜病毒、分枝桿菌、細菌芽胞。然而,不同種或同種不同株間微生物內在的抗性相差也很大。（二）微生物的物理狀態消毒滅菌前微生物的生長情況顯著影響它們的抵抗力。在營養缺陷下生長的微生物比在營養豐富的情況下生長的微生物具有更強的抵抗力。細菌繁殖體的抵抗力從開始直到對數期的后期通常較強,自穩定期才開始不規則地下降，（三）微生物的數量微生物最初的數量越大,所需消毒的時間就越長。消毒滅菌前嚴格的洗滌和清潔是保證消毒滅菌成功的基本步驟。如果這點不可能做到,如實驗室的培養物,就必須延長消毒滅菌時間。四、影響消毒滅菌效果的因素（四）消毒劑性質、濃度與作用時間（五）溫度（六）酸堿度（七）有機物氧化劑中的過氧乙酸和含氯化合物對環境和空氣中的病毒作用效果好。絕大多數消毒劑在高濃度時殺菌作用大,當降低至一定濃度時只有抑菌作用,如含氯消毒劑濃度增加一倍,殺菌時間減少30%。但醇類例外,70%乙醇或50%~80%異丙醇的消毒效果最好,因過高濃度的醇類使菌體蛋白質迅速脫水凝固,影響了醇類繼續向內部滲入,降低了殺菌效果。消毒劑在一定濃度下,對細菌的作用時間愈長,消毒效果也愈好。消毒劑殺菌的實質是化學反應，溫度升高能提高消毒效果。消毒劑殺菌的作用受酸堿度的影響。環境中有機物的存在,能夠顯著影響消毒劑的效果。病原菌常隨同排泄物、分泌物一起存在,這些物質如膿、痰、血液和尿可阻礙消毒劑與病原菌的接觸,并消