22Operationproceduresforinvivoembryoproductionofconventionalexperimentalcat2024-12-31發(fā)布DB22/T3679—2024I本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)請注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的DB22/T3679—20242普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓?bào)w內(nèi)胚胎生產(chǎn)操作規(guī)程本文件確立了普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓?bào)w內(nèi)胚胎生產(chǎn)技術(shù)流程，規(guī)定了普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓?bào)w內(nèi)胚胎生產(chǎn)過程DB22/T2591普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓病原微生物4技術(shù)流程采集與胚胎質(zhì)量鑒定。貓?bào)w內(nèi)胚胎生產(chǎn)技術(shù)流程2供體的超數(shù)排卵與配種（見第2供體的超數(shù)排卵與配種（見第6章）1供體的選擇與飼養(yǎng)管理（見第5章）3采胚及胚胎（見第7質(zhì)量鑒定44記錄與檔案（見第8章）3供體的飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)滿足GB14925要求；超數(shù)排卵前3周~5周應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，可適量補(bǔ)充維促卵泡激素(FSH)、人絨毛膜促性腺激素(hCG)、生理鹽水供體貓每隔12h,分三天遞減注射，15U、15射6次，第四天注射200U的人絨毛膜促性腺激素。注射促人絨毛膜促性腺激素后立即放入種公貓進(jìn)行交配，公貓和母貓交配時(shí)應(yīng)提供精子活力70%以上，畸形率少于20%。利用發(fā)情母貓做臺(tái)畜采集種公貓精液，符合6.2.3.2要求的精液濃度調(diào)至每毫升2000萬個(gè)精子。4術(shù)前12h禁食，全身麻醉后仰臥在手術(shù)架上，手術(shù)部位備皮消毒。在距離最后一對(duì)乳房前1cm、腹中線2cm~3cm的左側(cè)和右側(cè)位置，分別用手術(shù)刀切開2mm小口，用腹腔鏡觀察卵巢排卵情況，發(fā)現(xiàn)排卵后用輸精槍每側(cè)子宮腔輸入不少于0.5×10?個(gè)精子。器械：貓手術(shù)臺(tái)、保定繩、獸用電動(dòng)剃毛刀、手術(shù)器械、沖胚管、平浴鍋等。藥品：75%酒精、碘伏、生理鹽水、抗生素、麻醉藥、沖胚液等。配種或人工授精24h~72h從輸卵管采集1細(xì)胞期～8細(xì)胞期胚胎，配種或人工授精5d~67.1.3.1術(shù)前12h禁食，全身麻醉后仰臥在手術(shù)架上，手術(shù)部位備皮消毒。7.1.3.2手術(shù)部位在距離最后一對(duì)乳房前端2cm、腹中線0.5cm的一側(cè)位置，盡量避開血管，縱向切開1cm~2cm的刀口，將子宮角和卵巢引出體外，記錄兩側(cè)卵巢排卵點(diǎn)或黃體數(shù)，并填寫附錄A。a)輸卵管沖胚法：將貓用胚胎移植細(xì)管從輸卵管傘部插入0.5cm,用拇指與食指扭住，另一端放入60mm平皿中。用事先抽取10mL沖胚液的注射器從子宮角端向輸卵管方向把沖胚液b)子宮角沖胚法：用針頭在子宮角后端(靠近子宮頸)扎1個(gè)小孔，將貓用胚胎移植管從孔導(dǎo)入到子宮腔內(nèi)，用拇指與食指扭住，另一端放入100mm平皿中，用事先抽取10mL沖胚液的7.1.3.4采集完畢后將子宮復(fù)位，常規(guī)縫合腹腔，術(shù)后注射抗生素預(yù)防感染，注意保暖。體式顯微鏡下用吸卵管在35℃下?lián)斐雠咛ィ瑯?biāo)記供體名稱或編號(hào)、胚胎數(shù)量及等級(jí)等。采胚記錄7.2.2.1輸卵管采集的胚胎，胚胎處于1細(xì)胞期~8細(xì)胞期，可用胚標(biāo)準(zhǔn)為卵裂球輪廓清晰、球體飽7.2.2.2子宮角采集的胚胎，A級(jí)和B級(jí)為可用胚胎，C級(jí)和D級(jí)不可用。胚胎分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如下：a)A級(jí)：胚齡與胚胎發(fā)育階段吻合，形態(tài)完整：結(jié)構(gòu)緊湊，卵裂球輪廓清晰、均勻、致密，邊緣整齊；很少或沒有游離細(xì)胞，變性細(xì)胞比例少于10%。b)B級(jí)：胚齡與胚胎發(fā)育階段基本吻合，卵裂球輪廓清晰，邊緣整齊，卵裂球較均勻，細(xì)胞密度