附件：達肝素鈉公示稿

達肝素鈉

Dagansuna

DalteparinSodium

本品系達肝素的鈉鹽，是以豬小腸黏膜來源的肝素為原料，采用亞硝酸解聚的方法制得。本

品由未被完全定性的一系列復雜寡糖組成，非還原端主要由2-O-硫-α-L-艾杜糖醛酸構成，還原

端主要由6-O-硫-2,5-脫水-D-甘露醇構成。本品的重均分子量為5600～6400，峰位分子量約為

6000。每雙糖單位的硫酸化程度為2.0～2.5。按干燥品計算，本品每1mg的抗Ⅹa因子效價應為

110～210IU，抗Ⅱa因子效價應為35～100IU，抗Ⅹa因子效價與抗Ⅱa因子效價之比應為1.9～

3.2。

【生產要求】本品在生產過程中應使用經過驗證的生產和純化工藝，以降低N-亞硝基化合

物在成品中的水平。必要時應采用適宜的經過驗證的分析方法，對成品中N-亞硝基化合物的含

量進行測定，以確認符合我國藥品監管部門相關指導原則或ICHM7指導原則的限度要求。

【性狀】本品為白色或類白色的粉末；極具引濕性。

本品在水中易溶，在乙醇中不溶。

【鑒別】（1）照核磁共振氫譜法（中國藥典2020年版四部通則0441）測定。

供試品溶液取本品約40mg，加含有0.05%的2,2,3,3-d4-3-三甲基硅基丙酸鈉（TSP-d4）

的重水0.7ml溶解。

對照品溶液取達肝素鈉對照品約40mg，加含有0.05%的2,2,3,3-d4-3-三甲基硅基丙酸

鈉（TSP-d4）的重水0.7ml溶解。

核磁共振波譜儀參數脈沖傅里葉變換核磁共振波譜儀兆周數不低于500MHz（以1H主

磁場頻率計），90°激發脈沖，溫度為30℃，譜寬（SW）12ppm，中心頻率（O1P）4.0ppm，弛

豫延遲時間（D1）和采集時間（AQ）均不少于2秒，線展寬因子（LB）0.3Hz，TSP-d4甲基的

化學位移設為0.00ppm。

系統適用性要求供試品溶液和對照品溶液1HNMR圖譜TSP-d4甲基信號的半峰寬不得

大于1.5，2.02ppm到2.08ppm區域信號的信噪比不得低于1000。

測定法分別將對照品溶液和供試品溶液轉移至5mm核磁管中，核磁共振波譜儀采集1H

NMR譜圖。

結果判定供試品溶液的1HNMR圖譜與對照品溶液的圖譜一致，并且在2.05ppm、3.28ppm、

3.40ppm、5.01ppm、5.18ppm、5.22ppm和5.52ppm處出現信號，其化學位移值與規定值不超過

±0.03ppm。

（2）取本品，照效價測定項下的方法試驗，抗Xa因子效價與抗IIa因子效價之比應為1.9～

3.2。

（3）本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應（中國藥典2020年版四部通則0301）。

【檢查】酸堿度取本品0.10g，加水10ml溶解后，依法測定（中國藥典2020年版四部

通則0631），pH值應為5.5～8.0。

溶液的澄清度與顏色取本品1.0g，加水10ml溶解后，依法檢查，溶液應澄清無色；如顯

色，與黃色1號標準比色液（中國藥典2020年版四部通則通則0901第一法）比較，不得更深。

硫酸根與羧酸根摩爾比取本品約0.1g，加新沸放冷的去離子水20ml溶解后，取2ml通過

預冷的陽離子交換樹脂柱（約10cm×1cm），用10～15ml上述去離子水緩緩將其洗入置于冰浴中

的燒杯內。洗脫完畢后用電導率儀立即進行電導滴定，以鉑黑電極或其它能滿足測定需求的電極

為測定電極，在磁力攪拌條件下，每次加氫氧化鈉滴定液（0.05mol/L）約50μl，直至終點。以

電導率為縱坐標，以滴定液體積為橫坐標，繪制曲線。分別對突然下降，稍微爬升，急劇上升的

三個線性部分擬合最佳線性方程。在第一條直線和第二條直線，第二條直線和第三條直線的交點，

分別對橫坐標作垂直線，第一條和第二條直線交點的垂足是硫酸根消耗氫氧化鈉滴定液

（0.05mol/L）的毫升數（V1），第二條和第三條直線交點的垂足是硫酸根和羧酸根共同消耗氫氧

化鈉滴定液（0.05mol/L）的毫升數（V2），V2與V1之差為羧酸根消耗氫氧化鈉滴定液的毫升數，

2--

按下式計算供試品中硫酸根（SO4）與羧酸根（COOH）的摩爾比，應不小于1.8。

硫酸根與羧酸根摩爾比=V1/（V2-V1）

氮取本品，照氮測定法（中國藥典2020年版四部通則0704第二法或第三法）測定，按干

燥品計算，本品中總氮（N）含量應為1.5％～2.5％。

鈉照原子吸收分光光度法（中國藥典2020年版四部通則0406第一法）測定。

溶劑氯化銫-鹽酸溶液（每1ml0.1mol/L鹽酸溶液中含氯化銫1.27mg）。

供試品溶液取本品適量，精密稱定，加溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.5mg的

溶液。

對照品溶液精密量取鈉單元素標準溶液（每1ml中含鈉200μg），用溶劑分別定量稀釋制

成每1ml中含鈉離子25μg、50μg和75μg的溶液。

測定法在330.3nm的波長處分別測定各對照品溶液和供試品溶液的吸光度。

限度按干燥品計算，含鈉（Na）應為10.5％～13.5％。

分子量與分子量分布照分子排阻色譜法（中國藥典2020年版四部通則0514）測定。

供試品溶液取本品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含10mg的溶液。

對照品溶液取低分子肝素分子量對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含

10mg的溶液。

系統適用性溶液取達肝素鈉對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含10mg的

溶液。

色譜條件以適合分離分子量為15000～100000蛋白的親水性鍵合硅膠為填充劑；以

0.1mol/L醋酸銨溶液為流動相；流速為每分鐘0.5ml；柱溫30℃；示差折光檢測器。進樣體積25μl。

系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中，主峰與溶劑峰能夠完全洗脫；重均分子量應在

標示值的±200范圍內；對照品溶液色譜圖中，準確計算低分子肝素峰的總面積（不包括鹽峰）

及每個點的累積峰面積百分比，確定與低分子肝素分子量對照品附帶的寬分布標樣表中累積峰面

積百分比最接近點的保留時間及對應的分子量，以保留時間為橫坐標，分子量的對數值為縱坐標，

使用GPC軟件，擬合三次方程，建立校正曲線，相關系數應不小于0.990。

測定法取供試品溶液與對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按下式計算本品

的重均分子量：

Mw=∑(RIiMi)/∑RIi

式中RIi為洗脫的i級分的物質量，即示差色譜圖的峰高；

Mi由校正曲線計算得出的i級分的分子量。

限度重均分子量應為5600～6400，分子量小于3000的級分不得過總量的13.0％，分子量

大于8000的級分應為總量的15.0%～25.0％。

游離硫酸鹽照離子色譜法（中國藥典2020年版四部通則0513）測定。

供試品溶液取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的

溶液。

對照品溶液精密量取硫酸根標準液（100μg/ml）適量，用流動相定量稀釋制成每1ml中分

別約含硫酸根0.1μg、0.5μg、1μg、2μg、5μg、10μg和20μg的溶液。

系統適用性溶液取草酸鈉適量，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液，取

1ml與每1ml中含硫酸根10μg的對照品溶液3ml，置同一10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，

搖勻。

色譜條件以烷醇季銨的乙基乙烯基苯-二乙烯基苯樹脂為填充劑（如AS11陰離子交換柱，

4mm×250mm，或效能相當的色譜柱），連接與分析柱填料相同的保護柱（4mm×50mm）；以

3.0mmol/L碳酸鈉溶液為流動相；流速為每分鐘2.0ml；采用配備有陰離子自動再生抑制器或適

宜的化學抑制器的電導檢測器。進樣體積25μl。

系統適用性要求系統適用性溶液色譜圖中，硫酸根峰與草酸根峰的分離度應不小于1.0；

以對照品溶液的濃度與相應對照品溶液色譜圖中的峰面積計算線性回歸方程，相關系數（r）應

不小于0.995。

測定法精密量取供試品溶液與系列對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用線

2-

性回歸方程計算供試品溶液中含硫酸根離子（SO4）的量。

2-

限度含硫酸根離子（SO4）的量不得過0.5％。

亞硝酸鹽照離子色譜法（中國藥典2020年版四部通則0513）測定。

供試品溶液取本品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含8mg的溶液

（放置30分鐘后使用）。

對照品溶液精密量取亞硝酸根標準溶液（100μg/ml）適量，加水定量稀釋制成每1ml中約

含亞硝酸根0.8μg的溶液，作為對照品貯備溶液；精密量取適量，分別用水定量稀釋制成每1ml

中約含亞硝酸根8ng、24ng和40ng的溶液，作為對照品溶液（1）、（2）和（3）。

色譜條件以強陰離子交換樹脂為填充劑；以1.361%醋酸鈉溶液（用磷酸調節pH值至

4.3）為流動相；流速為每分鐘1.0ml；采用安培檢測器，工作電極為玻碳電極，參比電極為銀-

氯化銀電極，工作電位為+1.00V。進樣體積25μl。

系統適用性要求對照品溶液（2）色譜圖中，理論板數以亞硝酸根峰計算應不低于1000；

亞硝酸根峰的拖尾因子應在0.8～1.2之間；重復進樣6次，亞硝酸根峰面積相對標準偏差應小于

3.0％；以對照品溶液（1）、（2）和（3）的濃度與相應的峰面積計算線性回歸方程，相關系數

（r）應大于0.995；對照品溶液（1）色譜圖中亞硝酸根峰的信噪比應不小于5。

測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液（1）、（2）和（3），分別注入液相色譜儀，記錄

-

色譜圖，用線性回歸方程計算供試品溶液中含亞硝酸根（NO2）的量。

-

限度含亞硝酸根（NO2）的量不得過0.0005%。

注：達肝素鈉容易阻塞固定相的結合位點，從而縮短保留時間和降低柱效，可用5.8%氯化

鈉溶液，以每分鐘1ml的流速淋洗1小時，再用200~400ml水淋洗，使柱效得到部分恢復。

殘留溶劑照殘留溶劑測定法（中國藥典2020年版四部通則0861）測定，應符合規定。

干燥失重取本品，以五氧化二磷為干燥劑，60℃減壓干燥3小時（壓力不超過670Pa），

減失重量不得過5.0％（中國藥典2020年版四部通則0831）。

重金屬取本品，依法檢查（中國藥典2020年版四部通則0821第二法），含重金屬不得過

百萬分之二十。

細菌內毒素取本品，依法檢查（中國藥典2020年版四部通則1143），以抗Xa因子效價計

算，每1IU中含內毒素的量應小于0.010EU。

【效價測定】照生物檢定統計法（中國藥典2020年版四部通則1431）中的量反應平行線

測定法，采用4×4法進行實驗設計與統計計算。

抗Xa因子效價三羥甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000緩沖液（pH8.4）取三羥甲基氨基甲烷

6.06g，氯化鈉10.23g，乙二胺四醋酸二鈉2.8g，聚乙二醇60001.0g，加水800ml使溶解，用鹽

酸調節pH值至8.4，加水稀釋至1000ml，搖勻。

標準品溶液（S）取低分子肝素標準品，復溶后，用上述緩沖液（pH8.4）分別定量稀釋

制成4種濃度的溶液，溶液的濃度應在log劑量-反應的線性范圍內（一般為每1ml中約含0.01～

0.1IU）。

供試品溶液（T）取本品適量，精密稱定，按標準品溶液相同方法溶解并用上述緩沖液

（pH8.4）分別定量稀釋制成與4種標準品溶液濃度相當的溶液。

抗凝血酶溶液取抗凝血酶適量，加上述緩沖液（pH8.4）制成每1ml中約含抗凝血酶1IU

的溶液。

Xa因子溶液取Xa因子適量，加上述緩沖液（pH8.4）溶解并稀釋制成每1ml中約含0.4IU

（7.1nkat）的溶液，必要時可調整其濃度，使按下述測定法測定時，空白管（B1、B2）在405nm

波長處的吸光度值在0.6～1.0范圍內。

發色底物溶液取發色底物S-2765，加水溶解并稀釋制成濃度為3mmol/L的溶液，臨用前

用水稀釋至1mmol/L。

測定法取不同濃度的標準品溶液（S）或供試品溶液（T）及上述緩沖液（B），按B1、S1、

S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、B2的順序依次向小管中分別精

密加入20～50μl相同體積（V）的上述溶液，再向每管精密加入相同體積的抗凝血酶溶液，混勻，

37℃平衡2分鐘，然后再精密加入Xa因子溶液40～100μl（2V），混勻，37℃平衡2分鐘，再精

密加入發色底物溶液適量（2V），混勻，37℃準確保溫2分鐘后，各精密加入50％醋酸溶液適量

（2V）終止反應。用適宜設備在405nm的波長處測定各管的吸光度?？瞻拙彌_液B1、B2兩管的

吸光度相差不得過0.05。以吸光度為縱坐標，標準品溶液（或供試品溶液）濃度的對數值為橫坐

標分別作線性回歸，計算效價及實驗誤差。平均可信限率（FL%）不得大于10％。

抗IIa因子效價三羥甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000緩沖液（pH8.4）照抗Xa因子效價項

下的方法制備。

標準品溶液（S）與供試品溶液（T）照抗Xa因子效價項下的方法制備，溶液的濃度一般

為每1ml中約含0.005～0.05IU。

抗凝血酶溶液照抗Xa因子效價項下的方法制備，溶液的濃度為每1ml中約含抗凝血酶

0.25IU。

凝血酶溶液取凝血酶適量，加上述緩沖液（pH8.4）溶解并稀釋成每1ml中約含5IU的溶

液，必要時可調整其濃度，使按下述測定法測定時，空白管（B1、B2）在405nm波長處的吸光

度值在0.6～1.0范圍內。

發色底物溶液取發色底物S-2238，加水溶解并稀釋制成濃度為3mmol/L的溶液，臨用前

用水稀釋至0.625mmol/L。

測定法取不同濃度的標準品溶液（S）或供試品溶液（T）及上述緩沖液（B），按B1、S1、

S2、S3、S4、T1、T2、T3、T4、T1、T2、T3、T4、S1、S2、S3、S4、B2的順序依次向小管中分別精

密加入20～50μl相同體積（V）的上述溶液，再向每管中精密加入相同體積的抗凝血酶溶液，混

勻，37℃平衡2分鐘，然后每管再精密加入凝血酶溶液40～100μl（2V），混勻，37℃平衡2分

鐘，再精密加入發色底物溶液適量（2V），混勻，37℃準確保溫2分鐘后，各精密加入50％醋酸

溶液適量（2V）終止反應。用適宜設備在405nm的波長處測定各管吸光度?？瞻拙彌_液B1、B2

兩管的吸光度相差不得過0.05。以吸光度為縱坐標，標準品溶液（或供試品溶液）濃度的對數值

為橫坐標分別作線性回歸，計算效價及實驗誤差。平均可信限率（FL%）不得大于10％。

【類別】抗凝血藥。

【貯藏】密封，在干燥處保存。

【制劑】達肝素鈉注射液

起草單位：中國食品藥品檢定研究院

復核單位：廣東省藥品檢驗所

浙江省食品藥品檢驗研究院

江蘇省食品藥品監督檢驗研究院

北京市藥品檢驗研究院

中國醫學科學院藥物研究所

武漢工程大學

標準修訂說明

我國在1999年批準低分子量肝素及注射液上市。截至2012年，審評時未按

低分子量肝素工藝進行分類，僅依據歐洲藥典Lowmolecularweightheparins的

通則，將它們簡單歸于“低分子量肝素”，分為低分子量肝素鈉或低分子量肝素鈣。

本品系達肝素的鈉鹽，達肝素是以豬小腸黏膜來源的肝素為原料，采用亞硝酸解

聚的方法制得。國內目前有3個企業持有達肝素鈉原料藥的生產文號，執行標準

為各企業的注冊標準。本次擬定的達肝素鈉國家標準草案由中檢院起草，廣東所

和浙江院復核。與低分子量肝素鈉的國家標準WS1-(X-149)-2005Z相比，有較多

的增訂或修訂項。與2017年公示稿相比，主要修改內容如下：

一.化學結構式：達肝素鈉結構式中的R，修改為R1，與那屈肝素鈣一致。

二.生產要求：2017年公示稿中的【制法要求】修訂為【生產要求】本品在

生產過程中應使用經過驗證的生產和純化工藝，以降低N-亞硝基化合物在成品

中的水平。必要時應采用適宜的經過驗證的分析方法，對成品中