義縣高中劉占江2.3.2胚胎工程技術及其應用手術法移胚胚胎分割背景資料1：1、引進一頭良種成年奶牛需3萬---5萬元2、一頭牛一胎只產一頭牛犢，一生只生育4、5次。實際問題:

牛的生育率雖然很低，但是一頭母牛一生排出的卵細胞約200個左右，卵巢中卵母細胞數量是它的1000倍（20萬）；公牛平均每次射精5ml,精子數50億。牛的自然繁殖的速度太慢，不能滿足生產需要；那如何實現良種牛快速繁殖呢?

母牛其實是有很強的生殖潛能的，只是沒有激發出來。背景資料1：1982年世界首例“試管牛”犢問世1、“試管牛”是怎么回事？2、“試管牛”是應用哪些技術生產的？背景資料2：試管動物:是指通過人工操作使卵子在體外受精，經培養發育為早期胚胎后，再進行移植產生的個體。個體精子卵子受精卵體外受精早期胚胎子宮胚胎移植早期胚胎發育胚胎工程技術（二）胚胎移植（三）胚胎分割（一）體外受精2.3.2胚胎工程技術及其應用方法場所是否培養小型動物大型動物輸卵管卵巢借助超聲波探測儀、內窺鏡或腹腔鏡否，直接與獲能的精子受精是，需培養至MⅡ中期注射促性腺激素（一）體外受精1、卵母細胞的采集和培養B超活采儀活體采集的牛卵母細胞牛卵母細胞牛卵巢2、精子的采集和獲能精子在進行體外受精前需要精子獲能處理體外精子獲能的方法：1）培養法:放入人工配制的獲能液中如：嚙齒動物、家兔和豬等2）化學誘導法:放在一定濃度的肝素或鈣離子載體A23187溶液中如：牛、羊等獲能的精子和培養成熟的卵子，在獲能溶液或專用的受精溶液中完成受精過程。卵母細胞的成熟培養：CO2培養箱哺乳動物體外受精過程示意圖注意：精子離心處理的目的是，去除精清中的抑制獲能的物質。3、體外受精1.起保溫作用，使溫度控制在合適范圍內。2.作為緩沖液，維持PH值。3.促進細胞分裂，促進呼吸作用。CO2培養箱二氧化碳培養箱（95%空氣和5%CO2

）作用：胚胎移植采集卵母細胞體外培養采集精子體外獲能體外受精早期胚胎培養受體牛（時期：）

1）超數排卵（試劑）

2）活體取卵（儀器）

3）從屠宰的卵巢取卵方法方法試劑（試劑）成熟的卵子獲能的精子MII中期方法（1）體外受精（2）胚胎的早期培養精子和卵子在體外受精后，應將受精卵移入發育培養液中繼續培養，以檢查受精狀況和受精卵的發育能力。發育培養液成分：兩鹽：無機鹽、有機鹽兩酸：氨基酸、核苷酸兩素：維生素、激素動物血清兩鹽：無機鹽、有機鹽兩酸：氨基酸、核苷酸兩素：維生素、激素動物血清葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、動物血清等

動物細胞培養液成分：發育培養液成分：（3）培養液成分比較獲能液：受精溶液：發育培養液：①用培養法使精子獲能；②在獲能溶液中完成受精作用；是專門的，精子、卵子完成受精的溶液；是進行早期胚胎培養的；（4）幾種溶液作用比較（二）胚胎移植胚胎培養發育到適宜階段時，可將其取出向受體移植或冷凍保存。不同動物胚胎移植時間不同：牛、羊：小鼠、家兔：試管嬰兒：桑椹胚或囊胚階段可在更早的階段移植8~16個細胞階段注：胚胎發育的主要場所是母體。（二）胚胎移植良種公牛良種母牛良種胚胎代孕母牛良種犢牛將通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態相同的雌性動物體內，使之繼續發育為新個體的技術。（1）概念（二）胚胎移植1、供、受體的選擇和處理2、配種或人工受精3、胚胎的收集、檢查、培養或保存4、胚胎的移植及移植后的檢查等生產胚胎的供體和孕育胚胎的受體共同繁殖后代（2）實質：（3）胚胎移植的

基本程序：沖卵質量檢查、培養胚胎移植妊娠檢查……同期發情處理……（雌性激素）超數排卵（促性腺激素）手術法非手術法優良供體公牛配種胚胎移植的犢牛牛胚胎移植過程示意圖：（4）優良供體母牛（遺傳性狀優良，生產能力強）健康受體母牛（有健康體質和正常生殖能力）【歸納】①該過程中兩次使用促性腺激素，

第一次對受、供體進行同期發情處理；

第二次用于供體的超數排卵。②該過程中的兩次檢查：第一次對收集的胚胎進行檢查；

第二次對受體母牛是否妊娠進行檢查。③產下的犢牛性狀取決于所用公牛和供體牛，

性別取決于公牛提供何種類型的精子。④沖卵的含義是從子宮中沖出胚胎，而非沖出卵子。沖卵胚胎檢查檢查胚胎的發育狀況，處于桑椹胚或囊胚時期胚胎移植或保存手術法移胚已配種母牛，在右肋部切口，找到非排卵側子宮角，再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宮角前端，注人胚胎；未配母牛在每側子宮角各注入一個胚胎；然后將子宮復位，縫合切口。非手術法移胚在發情后第六至第九天(即胚泡階段)進行，過早移植會影響受胎率。采用胚胎移植槍和0．25毫升細管移植的效果較好。將細管截去適量，吸入少許保存液，吸一個氣泡，然后吸人含胚胎的少許保存液，吸人一個氣泡，最后再吸取少許保存液。將裝有胚胎的吸管裝入移植槍內，通過子宮頸插入子宮角深部，注入胚胎。胚胎移植不受時間地域限制，節省購買種畜的費用。利用胚胎冷凍技術，建立胚胎庫，保存品種資源和瀕危物種。胚胎移植現場世界首例冷凍胚胎克隆水牛“盼盼”與“代孕媽媽”盼盼”在植入娘胎之前，在實驗罐度過了2個月的冷凍期。胚胎冷凍技術的研究成功，可以長時間保存優良品種的遺傳資源和瀕危物種；突破了時間和地域的限制，便于胚胎運輸，大量節省購買種畜的費用。（5）胚胎移植的主要生理學基礎（1）哺乳動物發情排卵后，生殖器官變化相同。（2）胚胎形成后呈游離狀態，有利于胚胎收集。（3）無免疫排斥反應。（4）供體胚胎與受體子宮可建立正常生理和組織聯系，

遺傳特性不受影響。受體產下胚胎移植的后代（6）胚胎移植的優勢：可以充分發揮雌性優良個體（胚胎供體）的繁殖潛力。供體受體職能：只產生具有優良遺傳特性的胚胎職能：擔任繁重而漫長的妊娠和育仔的任務提供胚胎的個體-----良種雌性動物接受胚胎的個體-----一般品種的雌性動物（使供體的后代數是自然繁殖的十幾倍到幾十倍）（7）胚胎移植的意義：1)加速育種工作和品種改良；2)大量節省購買種畜的費用；3)一胎多產；4)保存品種資源和瀕危物種；5)可充分發揮優秀個體的繁殖潛能縮短繁殖周期，

增加一生繁殖的后代數量。拓展：比較試管動物和克隆動物試管動物克隆動物發育起點生殖方式技術手段遺傳物質遺傳規律受精卵重組細胞有性生殖

無性生殖體外受精、胚胎移植核移植技術、胚胎移植來自2個親代主要來自核供體

遵循

不遵循1、概念:（三）胚胎分割采用機械方法將早期胚胎切割成2等份，4等份或8等份等，經移植獲得同卵雙胎或多胎的技術。2、特點：產生遺傳性狀相同的后代是進行遺傳學研究的寶貴材料，胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。（三）胚胎分割3、選