文件號：AA第1版頁數(shù)PAGE5共5頁試劑標準操作規(guī)程項目總膽汁酸（TBA）方法第五代循環(huán)酶法，速率法儀器H7600系列編寫人日期審核人日期批準人日期文件分發(fā)部門和/或個人本規(guī)程自年月日起實施 目錄檢測原理標本采集與處理2.1受檢者的準備2.2靜脈采血2.3抗凝劑2.4標本處理3.試劑3.1試劑3.2校準血清3.3試劑與校準血清的穩(wěn)定性4.儀器5.操作6.計算7.操作性能7.1精密度7.2準確度7.3靈敏度7.4可報告范圍7.5特異性7.6干擾8.參考值9.臨床意義附錄A:參數(shù)1.檢測原理膽汁酸與3a-羥基類固醇脫氫酶（3a-HSDH）及氧化型b-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）發(fā)生反應，生成3-酮類固醇以及還原型b-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。3-酮類固醇在3a-HSDH和Thio-NADH作用下，生成膽汁酸及Thio-NAD。通過循環(huán)酶而使微量的膽汁酸量得到放大。通過測定生成物Thio-NADH在405nm吸光度的變化，可測量樣品中膽汁酸的濃度。2．標本采集與處理2.1受檢者的準備：病人空腹12h，不飲酒24h后采集血樣。體檢對象抽血前應有兩周的的正常狀況記錄。注意有無應用影響測試項目的藥物。此外，對于體檢者，采血的季節(jié)都應做相關記錄，因為樣本中各項目的含量有季節(jié)性變動，為了前后比較應在每年同一季節(jié)檢驗。應囑體檢對象在抽血前24小時內不做劇烈運動。2.2靜脈采血：除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內外的分布，會影響測試項目的濃度。在采血前至少應靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶。2.3抗凝劑：血漿使用肝素作為抗凝劑。2.4標本處理：血標本室溫放置30min～45min后離心分離血清或血漿，置潔凈試管加蓋低溫保存。3．試劑3.1試劑：本科使用上海華臣生化技術有限公司TBA試劑盒，為液體雙試劑，各組分如下：試劑包裝規(guī)格見試劑說明書。試劑1β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核酸磷酸2.2mmol/LGOOD'S緩沖液pH7.10.66mmol/L試劑2NADH2.9mmol/L3α-HSD3α-羥類固醇去氫酶≥5000U/LGOOD'S緩沖液pH7.00.65mmol/L3.2：校準血清使用上海華臣生化技術有限公司提供的復合校準血清或使用TBA的專用標準液。校準頻次：空白定標：每日需做試劑空白定標。全點定標：試劑換批號使用時或質控結果超過規(guī)定的2SD范圍，需要全點定標。3.3試劑與校準血清的穩(wěn)定性：原包裝試劑儲存在2-8℃至標簽所示失效日期。試劑開瓶后，在儀器中至少可保存20天。試劑儲存在18-22℃穩(wěn)定15天，試劑應避免污染。試劑R1顏色為無色，試劑R2顏色為無色至淺黃色，當試劑變色，按照試劑失效處理。多項校準血清在2-8℃儲存至標簽所示失效日期，復溶后-20℃保存，可穩(wěn)定一個月，只可凍融一次，避免反復凍融。參見校準血清說明書。4．儀器H7600系列型號儀器。5．操作樣品為血清或肝素/EDTA抗凝血漿。本法為終點法。參數(shù)見后附，附錄A。試劑參數(shù)設置、定標操作以及樣本檢測常規(guī)操作，見儀器操作規(guī)程。ΔAΔA測定ΔA標準c＝ΧCΔA標準式中：c——測定總膽汁酸濃度，μmol/L；ΔA測定——標本管吸光度變化；ΔA標準——標準管吸光度變化；CO——校準血清總膽汁酸濃度，μmol/L；ΔA＝A2－A17．操作性能7.1精密度：批內CV<5%，批間CV<7%。7.2準確度：測量結果在上海華臣質控血清靶值±2SD范圍內。不同方法學試劑的質控結果之間會存在差異，使用時請確保質控選擇與試劑的方法學保持一致。7.3靈敏度：總膽汁酸濃度為：100μmol/L時，顯色吸光度為0.235～0.256。7.4可報告范圍：血清與試劑用量之比為4:240：80時，測定上限為180μmol/L。7.5特異性：測量值在給定值的90%-110％范圍內。7.6干擾：內源性干擾物溶血為1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黃疸30mg/ml、抗壞血酸300mg/ml對測試結果無明顯影響。8．參考值0～12μmol/L。9．臨床意義本試劑盒用于體外測定血清中的總膽汁酸含量。TBA是由肝臟分解代謝，能反映肝實質損傷。一旦肝細胞發(fā)生病變，血中膽汁酸濃度極易升高。急性肝炎、慢性活肝、肝硬化、肝癌TBA結果明顯升高。與ALT進行比較，急性肝炎、慢性活肝