1DB43/TXXXXX—2022多花黃精組織培養育苗技術規程本文件規定了多花黃精組織培養育苗過程中組培室消毒處理、外植體采集、外植體處理、培養基制備、組織培養、煉苗與移栽、出苗、包裝運輸、檔案管理等技術要求。本文件適用于湖南省多花黃精組織培養育苗。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4285農藥安全使用標準GB/T8321農藥合理使用準則（所有部分）LY/T1882林木組織培養育苗技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua百合科黃精屬的多年生草本植物，中藥材黃精基源植物。根狀莖肥厚，少有近圓柱形，莖高可達100cm，葉互生，橢圓形、卵狀披針形至矩圓狀披針形，傘形花序，花被黃綠色，漿果黑色，5月-6月開花，8月-10月結果。4組培室消毒處理組培室用84消毒液稀釋至1000倍或75%乙醇噴灑洗滌組培室地面，保持室內清潔。超凈工作臺用紫外燈照射30min，隨后關閉紫外燈通風20min以上，用濕拖把輕輕打掃超凈工作臺四周，降低塵埃，接著用75％乙醇擦拭臺面操作區域。5外植體采集5.1取種子萌發形成的幼芽，用解剖刀從芽的萌發的基部切下；5.2取無病害，無腐爛，根系發達的多花黃精根狀莖健壯芽頭，在芽點以下2cm-3cm處，用解剖刀切下。6外植體處理2DB43/TXXXXX—20226.1清洗放入器皿中用洗衣粉等清潔劑沖洗20min。6.2滅菌清洗好的外植體轉入超凈工作臺進行操作，將芽塊放入滅菌后的燒杯內，用75%酒精清洗30s，無菌水沖洗3-5次，0.1%HgCl溶液浸泡10min-15min，最后用無菌水沖洗5次-6次。7培養基制備7.1培養基配方誘導培養基、增殖培養基、生根培養基的配方見附錄A。7.2培養基配置、滅菌與保存參照LY/T1882執行。8組織培養8.1培養條件培養溫度25℃±2℃培養室中，光照時間12h/d，光照強度1500lx-2000lx。8.2誘導培養黃精芽塊滅菌后在接種盤中切掉芽塊下部，只留取0.5cm-1cm大小的芽點，迅速接種到誘導培養基中，培養30d-50d，分化產生5個左右叢生芽時，轉入增殖培養基中進行培養。8.3增殖培養切取其叢生芽轉入增殖培養基中進行增殖培養，反復接種繼代培養4-5次后，轉入生根培養基中進行生根培養。增殖培養的周期以30d-45d為宜，增殖率為4-7，可繼代4-5次。8.4生根培養將誘導形成的大小相近的繼代苗，在超凈工作臺上切割為單株，接種到生根培養基中培養，培養25d-30d根系鋪滿培養瓶底部即進行煉苗移栽。8.5煉苗8.5.1煉苗標準當組培苗擁有1個以上的健壯芽點，生長4條-5條根以上時，可進行煉苗處理。8.5.2馴化將裝組培苗的培養瓶從培養架上取下，轉移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在20℃-25℃,封口煉苗3d-5d，開瓶煉苗1d-2d后即可移栽。9移栽9.1容器3DB43/TXXXXX—2022選用穴盤或底部有空的育苗盤。9.2基質按照體積比珍珠巖:蛭石:泥炭土=1:2:3。9.3方法取出生根苗，自來水沖洗干凈根部培養基，用1000倍甲基托布津或多菌靈溶液浸泡根部5min~8min，放置于通風陰涼處晾干水分至根系發白變軟，再移栽入已準備好的基質中。移栽前將基質澆~透水，移栽完成后用花灑進行澆水定根。9.4管理9.4.1環境條件將移栽的組培苗置于有自動噴霧設備和遮陽網的大棚中，保持棚內光照強度在1000～2000lx，空氣濕度在75%～85%之間，定期澆水，保持基質濕度為30%-50%。9.4.2追肥每隔15d～20d用氮磷鉀（N20-P20-K20）或（N25-P10-K20）水溶性肥600倍～800倍溶液澆苗1次。9.4.3病害管理對苗期病蟲害以預防為主，綜合防治。施用農藥應符合GB4285和GB/T8321（所有部分）的規定。當組培苗根狀莖長3cm以上，重15g以上時可以出苗。11包裝、標志、運輸11.1包裝包裝應用干燥、清潔、無異味、不影響質量、容易回收和降解的材料，外包裝應用紙箱。11.2標志每箱應貼上標簽，注明品種、數量、產地、出苗日期等。11.3運輸裝車時切勿倒置，用有蓬車輛運輸以避免日曬、雨淋，高溫和嚴寒季節裝運的車廂應該有控溫設施，溫度調節至25℃,不低于5℃,到目的地后應立即進行種植或假植。12檔案管理多花黃精組織培養育苗培育過程中外植體采集、外植體處理、培養基制備、組織培養、煉苗與移栽、出苗、包裝等內容，應逐項如實記載，記載表格見附錄B。4DB43/TXXXXX—202212.2保存檔案采用紙質檔案和電子檔案2種方式保存，保存時間3年。5DB43/TXXXXX—2022（資料性）組織培養配方表A.1多花黃精組織培養育苗培養基配方培養基成分類別培養基成分誘導培養基mg/L增殖培養基mg/L生根培養基mg/L大量元素NH4N03825825950950MgS04?7H20370KH2PO4CaCl2?2H20440220220鐵鹽FeS03?7H2027.827.827.8Na2-EDTA37.337.337.3微量元素MnS04?4H2022.322.322.3ZnS04?7H208.68.68.6CuS04?5H200.0250.0250.025Na2Mo04?2H200.250.250.25CoC12?6H200.0250.0250.025KI0.830.830.83H3BO36.26.26.2有機營養成分煙酸0.50.50.5鹽酸硫胺素0.10.10.1鹽酸吡哆醇0.50.50.5甘氨酸2.02.02.0肌醇防褐變劑抗壞血酸植物生長調節劑6-芐氨基嘌呤（6-BA）2.04.0/2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）/0.2/吲哚丁酸(IBA)//0.8萘乙酸（NAA）0.5/0.5糖蔗糖300003000030000凝固劑瓊脂500050005000pH值5.85.85.86DB43/TXXXXX—2022（資料性）生產檔案表B.1