ICS11.120.10CCSS23T/QCSA團準青海省冬蟲夏草協(xié)會發(fā)布IT/QCSA5—2024前言 12規(guī)范性應用文件 13術(shù)語和定義 14采收要求 15保存要求 26活性檢測 2附錄A（規(guī)范性）冬蟲夏草真菌分離后的培養(yǎng) 3附錄B（規(guī)范性）活性成分的檢測 4T/QCSA5—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)則起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由青海省冬蟲夏草行業(yè)協(xié)會歸口。本文件起草單位：青海省畜牧獸醫(yī)科學院、青海省冬蟲夏草協(xié)會、青海省藥品檢驗檢測院、青海保惠堂生物科技有限公司。本文件主要起草人：李秀璋、李玉玲、姚孝寶、楊鳳梅、劉俊慶。1T/QCSA5—2024青海天然冬蟲夏草保存技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了青海天然冬蟲夏草保存的術(shù)語和定義、采收要求、保存要求及活性檢驗。本文件適用于青海天然冬蟲夏草的保存技術(shù)。2規(guī)范性應用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB63/T701冬蟲夏草采挖技術(shù)規(guī)程DB63/T862實驗室冬蟲夏草真菌－中國被毛孢真菌分離技術(shù)規(guī)程DB63/T890-2010地理標志產(chǎn)品青海冬蟲夏草3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1冬蟲夏草冬蟲夏草俗稱蟲草，為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌(Cordycepssinensis(BerK.)Sacc).寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲后發(fā)育成的子座和充滿菌絲的僵蟲的復合體。3.2青海冬蟲夏草產(chǎn)于青海地區(qū)的天然冬蟲夏草。3.3密封防止流體或固體微粒從相鄰結(jié)合面間泄漏以及防止外界雜質(zhì)如灰塵與水分等侵入內(nèi)部的措施。4采收要求4.1冬蟲夏草的采挖符合DB63/T701。4.2采收時選擇個大、飽滿、子座短小的新鮮冬蟲夏草，冬蟲夏草外包裹的土（菌）鞘應完好。2T/QCSA5—20244.3采收的冬蟲夏草應立即進行獨立包裝，并當天應密封和冷凍。5保存要求5.1將采收到的已經(jīng)獨立包裝、密封冬蟲夏草于低溫下帶回室內(nèi)，并將其迅速放入-20℃的冷凍室內(nèi)。5.2冷凍室應潔凈，且除冬蟲夏草外無其它保存物品。5.3保存時濕度含水量不大于15%。5.4保存時間為36個月。6活性檢測6.1每6個月隨機從保存的冬蟲夏草取出1%進行真菌分離培養(yǎng)試驗，具體按附錄A。6.2根據(jù)DB63/T862的方法進行活性檢測，冬蟲夏草真菌有活性的表明冬蟲夏草保存成功。檢測方法按附錄A進行。3T/QCSA5—2024（規(guī)范性）冬蟲夏草真菌分離后的培養(yǎng)A.1準備工作A.1.1升汞消毒液的配制：準確稱取0.1g升汞（HgCl2）加少許蒸餾水溶解后用蒸餾水定容至100mL。A.1.2消毒滅菌步驟如下：a)分菌工作前用有效氯含量為1.11.3％的84消毒液將分菌環(huán)境噴霧消毒；b)將分菌用的醫(yī)用手術(shù)刀、小剪刀、接種鏟、接種針、9mm培養(yǎng)皿包扎好后至于121℃、壓力條件下滅菌30min后取出，放入超凈工作臺內(nèi)備用；c)將已制備消毒好培養(yǎng)基的試管放入超凈工作臺內(nèi)，打開超凈工作臺內(nèi)的紫外燈，照射30min后關(guān)閉紫外燈的電源。A.1.3將冬蟲夏草從﹣20℃的冷凍室內(nèi)迅速取出，同時將其外包裹的土（菌）鞘剝離，然后用毛刷洗凈表面的泥土，用流水清洗干凈。A.1.4將已洗凈的冬蟲夏草放入升汞消毒液滅菌5min后取出，用無菌蒸餾水沖冼三次，然后放入超凈工作臺內(nèi)備用。A.1.5在超凈工作臺內(nèi)取一根冬蟲夏草放置在無菌的培養(yǎng)皿中，用醫(yī)用手術(shù)刀切去冬蟲夏草的外表皮，選取內(nèi)部的白色菌絲組織塊，放入另一個滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)切至0.5mm～1.0mm。A.1.6在酒精燈下，用接種鏟將碎粒狀組織塊接種至試管中，蓋上棉塞后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。A.2分離后的培養(yǎng)A.2.1將接種好的試管放入低溫培養(yǎng)箱中，在18℃條件下培養(yǎng)3～6個月。A.2.2應關(guān)注菌種的活性，必要時進行菌種復活。即需在無菌條件下打開保存的試管，取部分菌種于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長出菌落后再轉(zhuǎn)接一次，或者接種到適宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面。4T/QCSA5—2024（規(guī)范性）活性成分的檢測B.1準備工作B.1.1升汞消毒液的配制：準確稱取0.1g升汞（HgCl2）加少許蒸餾水溶解后用蒸餾水定容至100mL。B.1.2消毒滅菌步驟如下：d)分菌工作前用有效氯含量為1.11.3％的84消毒液將分菌環(huán)境噴霧消毒；e)將分菌用的醫(yī)用手術(shù)刀、小剪刀、接種鏟、接種針、9mm培養(yǎng)皿包扎好后至于121℃、壓力條件下滅菌30min后取出，放入超凈工作臺內(nèi)備用；f)將已制備消毒好培養(yǎng)基的試管放入超凈工作臺內(nèi)，打開超凈工作臺內(nèi)的紫外燈，照射30min后關(guān)閉紫外燈的電源。B.1.3將冬蟲夏草從﹣20℃的冷凍室內(nèi)迅速取出，同時將其外包裹的土（菌）鞘剝離，然后用毛刷洗凈表面的泥土，用流水清洗干凈。B.1.4將已洗凈的冬蟲夏草放入升汞消毒液滅菌5min后取出，用無菌蒸餾水沖冼三次，然后放入超凈工作臺內(nèi)備用。B.1.5在超凈工作臺內(nèi)取一根冬蟲夏草放置在無菌的培養(yǎng)皿中，用醫(yī)用手術(shù)刀切去冬蟲夏草的外表皮，選取內(nèi)部的白色菌絲組織塊，放入另一個滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)切至0.5mm～1.0mm。B.1.6在酒精燈下，用接種鏟將碎粒狀組織塊接種至試管中，蓋上棉塞后放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。B.2分離后的培養(yǎng)B.2.1