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地下水水質6種酚類化合物的測定

高效液相色譜法

警示：使用本部分的人員應具有高效液相色譜使用經驗或在有高效液相色譜使用經驗的分析人員指

導下操作；分析中使用的部分溶劑有毒、易燃、易爆，請注意通風、防爆，防中毒，確保安全，并按規

定佩戴防護器具、避免觸及皮膚和衣物、妥善處置樣品殘液。本警示并未指出所有可能的安全問題，使

用者有責任采取適當措施，確保安全，并保證符合國家相關法規和標準。

1范圍

本文件規定了高效液相色譜法測定地下水樣品中苯酚、對硝基酚、間甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-

三氯酚、五氯酚等6種酚類化合物的方法。

本文件適用于地下水樣品中苯酚、對硝基酚、間甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚等6

種酚類化合物的測定。本方法經驗證后也可用于飲用水、地表水中酚類的測定。

當取樣體積為1.0L，定容體積為1.0mL，進樣體積為20μL時，本方法檢出限、定量限見表1。

表1方法檢出限及定量限單位：μg/L

序號化合物檢出限定量限

1苯酚0.10.4

2對硝基酚0.10.4

3間甲酚0.10.4

42,4-二氯苯酚0.10.4

52,4,6-三氯苯酚0.050.2

6五氯酚0.050.2

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用文件構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅該日期對應的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適

用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6379.2-2004測量方法與結果的準確度（正確度與精密度）第2部分：確定標準測量方法的

重復性和再現性的基本方法

3原理

樣品經固相萃取柱富集和凈化后進樣，用高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，以保留時間定性，

外標法定量。

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4試劑和材料

4.1HLB固相萃取柱

填料為HLB吸附劑，500mg/6mL，或其他等效萃取柱。

4.2濾膜

0.45μm聚四氟乙烯濾膜。

4.3純水(H2O)

符合GB/T6682規定的一級水。

4.4甲醇（CH3OH）

液相色譜純。

4.5乙腈（C2H3N）

液相色譜純。

4.6乙酸（CH3COOH）

ρ（CH3COOH）=1.05g/mL，優級純。

4.7鹽酸

ρ（HCl）=1.19g/mL，優級純，36%~38%。

4.8硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O)

優級純。

4.9乙酸溶液

φ（CH3COOH）=1%。

取10.0ml乙酸（4.6）于1000ml容量瓶中，用水稀釋定容至標線，混勻。

4.10乙酸-乙腈溶液

φ（CH3COOH）=1%。

取10.0ml乙酸（4.6）于1000ml容量瓶中，用乙腈（4.5）稀釋定容至標線，混勻。

4.11酚類化合物標準貯備液

ρ=1000mg/L。

購買有證標準溶液或自配標準溶液均可。自配標準溶液所用的標準物質/標準樣品的

純度大于99.0%，用甲醇（4.4）溶解，在-10℃以下冷凍、避光保存。也可直接購買有證標準溶液，

參照制造商的產品說明書保存。

4.12酚類化合物混合標準使用液

ρ=100.0mg/L。

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取適量酚類化合物標準貯備液（4.10），用甲醇（4.4）稀釋，配制濃度為100mg/L的混合標準使

用液，在-10℃以下冷凍、避光保存，可保存1個月。

4.13氮氣

純度≥99.99%。

注1：購買的有證標準溶液的保存和使用應按標準生產廠商推薦的條件保存和使用。自配標準應在-18℃下避光、密

閉保存。

注2：標準溶液應定期檢查，若發現濃度與新購標準偏差大于15%或超過標準供應商推薦的保存期應及時更換標準。

5儀器和設備

5.1高效液相色譜儀

具有梯度洗脫功能，柱溫箱溫度可控，配備紫外檢測器或二極管陣列檢測器。

5.2色譜柱

填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，粒徑5μm，柱長250mm，內徑4.6mm的色譜柱或其他等效色

譜柱。

5.3濃縮裝置

氮吹濃縮儀或其他性能相當的設備。

5.4固相萃取裝置

自動或手動（帶真空泵），流速可調節。

5.5樣品瓶

1L和2mL帶聚四氟乙烯內襯墊螺旋蓋的棕色玻璃瓶。

5.6微量注射器或移液器

規格10μL、50μL、100μL、500μL、1.0mL。

6樣品采集與保存

地下水樣品采集在1L棕色預清洗玻璃樣品瓶中（5.5），一般采集正副樣各一瓶。若水中有殘余

氯存在，要在每升水中加入80mg硫代硫酸鈉（4.6）除氯。采集后的樣品應及時貼上采樣信息標簽并

盡快送實驗室檢測，未及時分析的樣品應在4℃以下冷藏、避光保存，保存期為7d。樣品提取液應在

4℃以下冷藏、避光保存，保存期為40d。

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7分析步驟

7.1樣品制備

使用溶劑過濾器選取濾膜（4.2）對水樣進行過濾。將HLB固相萃取柱（4.1）固定在固相萃取裝置

（5.4）上，依次用10mL甲醇（4.4）和10mL純水（4.3）活化，保證柱頭浸潤。量取1000mL過濾

后樣品，用鹽酸（4.5）調至pH=2，以不大于10mL/min的流速通過小柱。用10mL純水（4.3）淋洗

小柱。用氮氣（4.13）吹掃或用固相萃取裝置的真空泵干燥小柱10min，去除小柱中的殘留水分。用

15mL含1%乙酸（4.6）的乙腈（4.5）洗脫小柱，洗脫液接收于收集管中。洗脫液經濃縮裝置（5.3）

濃縮至1mL，用乙腈（4.5）定容至1.0mL待測。用純水（4.3）代替樣品，按照與試樣制備相同步驟

進行實驗室空白試樣的制備。

注1：對于清潔度較好的水樣，可不經濾膜（4.2）過濾，直接進行固相萃取。

7.2推薦儀器條件

流動相A：乙酸溶液（4.9），流動相B：乙酸-乙腈溶液（4.10），梯度洗脫程序見表2；流速：1.0

mL/min；柱溫：30℃；進樣體積：20μL。

各酚類化合物檢測波長：苯酚270nm；對硝基酚275nm；間甲酚275nm；2,4-二氯酚285nm；2,4,6-

三氯酚290nm；五氯酚300nm。

表2梯度洗脫程序

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）

0.07030

157030

202080

30.02080

32.07030

按照7.2分析條件分析6種酚類得到的標準樣品參考色譜圖見附錄A圖1。

7.3校準

7.3.1標準曲線

移取適量的酚類化合物混合標準使用液（4.12），用乙腈（4.5）稀釋，配制至少5個濃度點的標準

系列溶液，標準溶液中目標化合物的質量濃度分別為0.20mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.00mg/L、5.00

mg/L和10.0mg/L（此為參考濃度），移取1.0mL標準系列溶液于棕色進樣瓶中，待測。

7.3.2初始校準

將7.3.1標準系列作為初始校準標準。定義標準曲線中中等濃度的標準樣品為校準標準。依據檢測

組分，選定分析條件，用校準標準標定儀器，連續測定3~5次，相對誤差小于10%，且儀器靈敏度、

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分辨率，峰形等參數正常，即儀器達到穩定。儀器穩定后，進行標準曲線分析，進樣量為20μL。由低

濃度到高濃度依次對標準系列溶液進樣，以標準系列溶液中目標組分的濃度為橫坐標，以其對應的峰面

積（或峰高）為縱坐標，建立標準曲線線性回歸方程。初始校準應滿足質量保證和質量控制要求11.7。

7.3.3持續校準

配制標準系列中間濃度的標準溶液作為持續校準標準。當分析超過12h或每分析一批樣品后應用

持續校準標準檢查儀器是否偏離初始標準，確證結果應滿足質量保證和質量控制要求11.8。

8測定

8.1分析前將樣品和標準樣品恢復到室溫。室溫溫度保持在20℃左右。

8.2初始校準合格后開始樣品分析。

8.3試樣應與標準樣品同條件測定。

8.4檢查各目標物色譜圖和分析靈敏度是否正常，要求色譜峰峰形對稱、峰銳、無明顯拖尾現象。

8.5定性分析

以目標化合物的保留時間定性，必要時可采用標準樣品加入法、不同波長下的吸收比、紫外光譜

圖掃描等方法輔助定性。

8.6定量分析

采用校準曲線、外標法定量分析。對檢出質量濃度接近檢出限濃度的樣品，宜采用接近檢出限濃度

的標準單點校正。

9結果計算

樣品中酚類化合物的質量濃度（μg/L），按照公式（1）進行計算：

ρi=ρ1i×V1/V（1）

式中：

ρi—樣品中第i種酚類化合物的質量濃度，μg/L；

ρ1i—由標準曲線得到的試樣中第i種酚類化合物的質量濃度，μg/L；

V1—試樣體積，mL；

V—取樣體積，mL；

標準曲線法應滿足質量控制11.7要求。

測定結果小數點后位數的保留與方法檢出限一致，最多保留三位有效數字。

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10準確度

依據GB/T6379計算方法正確度和精密度，結果見附錄B。

10.1正確度

按照GB/T6379開展共同精密度實驗。7家實驗室使用不同設備、按照相同測試方法、在較短時間

內分別測定5個質量濃度水平、每個質量濃度水平3份基體加標平行試樣，檢測目標物正確度。

10.2精密度

按照GB/T6379.2-2004開展共同精密度實驗。7家實驗室使用不同設備、按照相同測試方法、在較

短時間內分別測定5個質量濃度水平、每個水平3份地下水基體加標平行樣品，評價方法精密度，其重

復性、再現性以95%的置信度計算。

10.2.1重復性

同一實驗室、同一操作者使用相同設備按相同測試方法并在短時間內對同一組分進行獨立檢測，獲

得的兩次質量濃度絕對差值不超過重復性限r。如果兩次測試結果差值超過了r，應舍去檢測結果并重

新完成兩次獨立檢測。

10.2.2再現性

不同實驗室、不同操作者使用不同設備按相同測試方法對同一組分進行獨立檢測，獲得的兩次質量

濃度絕對差值不超過再現性R。如果兩次測試結果差值超過了R，應舍去檢測結果并重新完成兩次獨立

檢測。

11質量保證和質量控制

11.1實驗室初始試劑與材料空白確認

在分析任何試樣之前，均應確認所使用的試劑、材料和玻璃器皿引起的干擾處于誤差允許范圍之內。

每次試劑、材料等改變時，應重新分析試劑空白。

11.2實驗室初始檢測能力確認

開展空白加標平行樣分析（加標質量濃度約為10倍檢出限）3份~5份，空白樣品加標回收率應在

60%~130%、相對標準偏差（RSD）≤20%；同時獲得方法檢出限應滿足表1。。

11.3實驗室全流程空白樣分析

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應至少進行一個全流程實驗室空白樣分析，測定結果

應低于方法檢出限。

11.4實驗室空白加標樣分析

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應進行一個實驗室空白加標樣分析，組分回收率在

60%~130%。

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11.5實驗室基體加標樣分析

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應進行一個基體加標樣分析，該基體可隨機抽取本批次樣

品為作為基體樣品，組分回收率應在60%~130%。

11.6實驗室平行樣分析

每20個樣品或每批次（少于20個樣品/批）應進行一個實驗室平行樣分析，平行樣的相對偏差應

≤20%。

11.7初始校準

儀器調試正常后測定校準系列,對儀器初始校正。利用色譜工作站對標準、樣品等色譜峰峰面積（峰

高）自動積分，并逐個檢查各峰基線、分離度，對不合理基線、分離度進行手動修正。利用色譜工作站

建立校準曲線，校準曲線線性相關系數應滿足R2≥0.995。如果R2＜0.995應檢查標準系列、儀器是否

存在問題，并恢復正常。如果儀器沒有問題應重配標準曲線重新測定使R2≥0.995，對于在R2＜0.995

下測定樣品應在新校準系列下測定。對樣品含量超過標準曲線的樣品應稀釋樣品或增加標準曲線濃度范

圍，使樣品峰面積保持在標準曲線范圍內，但不超過方法的線性范圍；或減小取樣重量重新提取、測定。

11.8持續校準

當分析超過12h或每分析一批樣品后，應用確證標準持續校準、評價儀器工作狀態，當確證標準

與初始標準的相對偏差超過±20%時，應重新建立校準曲線，重新測定超差樣品。

12特殊情況處理

注意試樣分析時高濃度與低濃度間的交叉污染。

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附錄A

（資料性附錄）

高效液相色譜測定6種酚類得到的標準樣品參考色譜圖見圖A.1

圖A.16種酚類化合物標準樣品參考色譜圖

1——苯酚；2——對硝基酚；3——間甲酚；4——2,4-二氯酚；5——2,4,6-三氯酚；6——五氯酚。

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附錄B

（資料性附錄）

表B.1.重復性限和再現性限與目標物含量關系方程

R、r與m的關系

質量濃度范圍

目標物

/μg/L

r和m的關系R和m的關系

苯酚0.50~10.0y=0.0339xy=0.1589x0.43633

4-硝基酚0.50~10.0y=0.0353xy=0.0812x

3-甲酚0.50~10.0y=0.0304xy=0.0724x

2,4-二氯酚0.50~10.0y=0.0628xy=0.0724x

2,4,6-三氯

0.50~10.0y=0.0525xy=0.0599x

酚

五氯酚0.50~10.0y=0.0601xy=0.0817x

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ICS

DZ

中華人民共和國地質礦產行業標準

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地下水水質6種酚類化合物的測定

高效液相色譜法

Groundwaterquality—Determinationof6phenolscompounds—Highperformance

liquidchromatography

（征求意見稿）

20XX-XX-XX發布20XX-XX-XX實施

中華人民共和國自然資源部發布

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地下水水質6種酚類化合物的測定

高效液相色譜法

警示：使用本部分的人員應具有高效液相色譜使用經驗或在有高效液相色譜使用經驗的分析人員指

導下操作；分析中使用的部分溶劑有毒、易燃、易爆，請注意通風、防爆，防中毒，確保安全，并按規

定佩戴防護器具、避免觸及皮膚和衣物、妥善處置樣品殘液。本警示并未指出所有可能的安全問題，使

用者有責任采取適當措施，確保安全，并保證符合國家相關法規和標準。

1范圍

本文件規定了高效液相色譜法測定地下水樣品中苯酚、對硝基酚、間甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-

三氯酚、五氯酚等6種酚類化合物的方法。

本文件適用于地下水樣品中苯酚、對硝基酚、間甲酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚、五氯酚等6

種酚類化合物的測定。本方法經驗證后也可用于飲用水、地表水中酚類的測定。

當取樣體積為1.0L，定容體積為1.0mL，進樣體積為20μL時，本方法檢出限、定量限見表1。

表1方法檢出限及定量限單位：μg/L

序號化合物檢出限定量限

1苯酚0.10.4

2對硝基酚0.10.4

3間甲酚0.10.4

42,4-二氯苯酚0.10.4