ICS13.020.01CCSD00/09GRM程TechnicalSpecificationforApplicationofDarkSeptateEndophytesExtracellularIT/GRM102—2024前言 2規范性引用文件 3術語和定義 3.1深色有隔內生真菌darkseptateendophytes 3.2胞外代謝物extracellularmetabolite 3.3植物生長刺激素plantbiostimulants 3.4生態修復ecologicalremediation 3.5水劑aqueousagent 3.6粉劑powder 4技術要求 24.1產品規格 24.2技術原理 24.3施用方式 24.4施用要求 24.5生物性能 35檢驗方法 35.1植物根系發育 35.2植物光合作用 35.3植物生長能力 35.4微生物檢測 35.5土壤養分檢測 36安全與環保要求 37包裝、標識、運輸和貯存 37.1包裝 47.2標識 47.3運輸 47.4貯存 4T/GRM102—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。為使我國礦區生態修復菌劑的應用技術走上科學化，規范化軌道，指導礦區微生物復墾工程建設，促進礦區生態環境的恢復與可持續發展，特制定《深色有隔內生真菌胞外代謝物應用技術規程》標準。本標準主要規定了深色有隔內生真菌胞外代謝物的范圍、術語和定義、技術要求、檢驗方法、安全與環保要求和包裝、標識、運輸和貯存。本文件由中關村綠色礦山產業聯盟提出并歸口。本文件起草單位：中國礦業大學（北京）礦山生態修復研究院、西安科技大學西部礦山生態環境修復研究院、天山實驗室、北京合生元生態環境工程技術有限公司。本文件主要起草人：畢銀麗、彭蘇萍、王淑惠、解琳琳、張延旭、王坤、全文智、肖禮、武超、柯增鳴、白雪蕊1T/GRM102—2024深色有隔內生真菌胞外代謝物應用技術規程本標準規定了由深色有隔內生胞外代謝物的范圍、術語和定義、技術要求、檢驗方法、安全與環保要求和包裝、標識、運輸和貯存。本標準適用于礦山廢棄地改良、礦區復墾與生態恢復、低產田提質、鹽堿地改良及其他土壤改良用途。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/Z41358-2022土壤健康綜合表征的生物測試方法GB/Z41359-2022土壤質量呼吸曲線法測定土壤微生物區系的豐度和活性GB/T42363-2023土壤質量土壤理化分析樣品的預處理GB/T42487-2023土壤質量土壤硝態氮、亞硝態氮和銨態氮的測定氯化鉀溶液浸提流動分析法GB/T42490-2023土壤質量土壤與生物樣品中有機碳含量與碳同位素比值、全氮含量與氮同位素比值的測定穩定同位素比值質譜法GB36600-2018土壤環境質量建設用地土壤污染風險管控標準（試行）GB/T40226-2021環境微生物宏基因組檢測高通量測序法GB/T41727-2022農用微生物菌劑功能評價技術規程GB/T41728-2022微生物肥料質量安全評價通用準則3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1深色有隔內生真菌darkseptateendophytes一類定殖于宿主植物根表皮、皮層，甚至維管束組織細胞內和細胞間隙，形成深色有隔菌絲和微菌核特征結構的內生真菌。3.2胞外代謝物extracellularmetabolite活菌在代謝過程中產生并分泌到細胞外的低分子量物質。3.3植物生長刺激素plantbiostimulants一種生物來源的配制產品，它可以提高植物生產力，這是由于成分復合物的新穎或新興特性，而不是作為已知必需植物營養素存在的唯一結果、植物生長調節劑或植物保護化合物。3.4生態修復ecologicalremediation在生態學原理指導下，以生物修復為基礎，結合各種物理修復、化學修復以及工程技術措施，通過優化組合，使之達到最佳效果和最低耗費的一種綜合的修復方法。3.5水劑aqueousagent深色有隔內生真菌胞外代謝物與培養液或水均勻混合在一起制成的一種劑型。3.6粉劑powder2T/GRM102—2024深色有隔內生真菌胞外代謝物凍干后粉碎制成的一種劑型。4技術要求4.1產品規格該產品來自于深色有隔內生真菌生長指數期的胞外代謝物，濃度為10-20g/L，pH值為4.5-7.0，粘度為100-500cp，生長素含量10-25mg/L。4.2技術原理深色有隔內生真菌胞外代謝物以氨基酸，肽和類似物為主，還包括有機氧化合物、脂質和類脂質分子、有機雜環化合物、苯丙烷和聚酮化合物等11種化合物。深色有隔內生真菌產生具有生物活性的代謝物有利于提高宿主植物的營養有效性。深色有隔內生真菌胞外代謝物作為植物生物刺激素，改善植物生理代謝過程和根系形態，增強植物養分吸收和養分利用率，促進植物生長。深色有隔內生真菌胞外代謝物主要影響植物碳水化合物代謝，脂類代謝，還有包括苯丙素類合成、玉米素合成等次級代謝途徑。在礦區生態修復過程中，利用深色有隔內生真菌胞外代謝物促進植物生長發育具有很大開發潛力。4.3施用方式4.3.1粉劑拌種將代謝物粉劑和種子充分混勻，必要時將種子噴濕后混合，即拌即播，拌種后的種子當天用完，適用于條播、撒播或大面積機播。4.3.2水劑拌種將胞外代謝物溶液和種子充分混勻，至種子相互間不粘連為宜，拌種后的種子當天用完，適用于條播、撒播或大面積機播。4.3.3灌根法將胞外代謝物溶液或粉劑直接施于植物根部，促進植物根系發育。這種方法適用于低產田提質、灌溉條件較好的礦區。4.3.4葉面涂抹法將胞外代謝物用刷子，均勻涂抹在植物葉片表面，宜少量多次涂抹，有利于促進養分快速吸收。4.3.5葉面噴施法噴施胞外聚合霧滴宜細小、噴施應均勻，,噴灑在植物生長旺盛的上部葉片和葉的背面，有利于吸收。這種方法適用于地勢不平地區，利用無人機進行噴施。4.3.6與內生真菌混施法將胞外代謝物與菌根真菌/深色有隔內生真菌混拌勻后施入植物根部，為內生真菌提供良好生存環境，便于內生真菌與植物根系更好共生，加速生態快速穩定建植與穩定生長發育。4.3.7與肥料混施法將胞外代謝物與有機肥或無機肥混合后施用，利用其保水保肥特性，提高養分利用率和土壤結構的穩定性。該方法適用于需同步提高肥力的低產田提質和礦山廢棄地改良。4.4施用要求4.4.1應根據需要確定深色有隔內生真菌胞外代謝物的施用時期、次數及數量參考當地物候期，可應用于植被種植前的基肥，也可應用于植物生長期的追肥。根據不同適合的施用方式確定用量。4.4.2應避免在高溫或強降雨天施用3T/GRM102—20244.5生物性能4.5.1促進植物根系發育胞外代謝物能夠提高植物根體積和根系活力，改善根系結構和促進養分吸收。4.5.2提高植物養分吸收胞外代謝物中的肽類、黃酮類化合物等可以作為化學信號調節植物的養分吸收過，提高植物養分吸收能力和養分利用效率。4.5.3提高植物光合作用效率胞外代謝物作為葉面肥，有利于提高植物葉片蒸騰速率、凈光合速率、胞間二氧化碳濃度和氣孔導度。4.5.4改善土壤養分循環胞外代謝物可以作為有機碳源，提高土壤酶活性，促進土壤中營養元素的轉化與循環，增加土壤養分的有效性。4.5.5促進土壤微生物活性胞外代謝物提供了豐富的碳源，作為微生物的營養來源，能夠促進土壤中微生物群落的生長和活性，從而有助于提高土壤的生物學活性，提升土壤肥力，增加菌群的生物多樣性。5檢驗方法5.1植物根系發育埋設根管監測植物根系發育情況，測定指標包括根直徑、根尖數、細根長。5.2植物光合作用測定植物葉綠素含量，參照GB/T41727-2022農用微生物菌劑功能評價技術規程執行；通過植物光合儀監測植物光合作用參數，包括蒸騰速率、凈光合速率、胞間CO2濃度和氣孔導度。5.3植物生長能力測定植物蓋度、植株干重、根干重和根冠比，參照GB/T41727-2022農用微生物菌劑功能評價技術規程執行。5.4微生物檢測測定土壤有益微生物種群結構與數量，參照GB/T40226-2021環境微生物宏基因組檢測高通量測序法的規定執行。參照GB/Z41358-2022土壤健康綜合表征的生物測試方法、GB/Z41359-2022土壤質量呼吸曲線法測定土壤微生物區系的豐度和活性。5.5土壤養分檢測參照GB/T42363-2023土壤質量土壤理化分析樣品的預處理，GB/T42487-2023土壤質量土壤硝態氮、亞硝態氮和銨態氮的測定氯化鉀溶液浸提流動分析法和GB/T42490-2023土壤質量土壤與生物樣品中有機碳含量與碳同位素比值、全氮含量與氮同位素比值的測定穩定同位素比值質譜法。6安全與環保要求符合環境保護相關法規要，不含有害病原微生物或重金屬，符合土壤安全標準，參考GB/T41728-2022微生物肥料質量安全評價通用準則。7包裝、標識、運輸和貯存4T/GRM102—20247.1包裝根據不同產品劑型選擇適當的包裝材料、容器、形式和方法，以滿足菌劑產品包裝的基本要求。產品包裝中應有產品使用說明書，在使用說明書中標明使用范圍、方法，用量及注意事項等內容。液態菌劑可使用無菌塑料瓶灌裝；粉劑產