中藥制劑雜質檢查技術——生物堿的檢查案例導入云南賓川村民吃草烏中毒事件

2015年9月8日，云南賓川縣金牛鎮(zhèn)一村民邀約親戚朋友到家中煮食草烏燉豬腳，參加就餐的親屬先后出現(xiàn)中毒癥狀，并到醫(yī)院就診，經(jīng)醫(yī)院全力搶救，其中6人搶救無效死亡。根據(jù)檢測結果，該縣村民食用草烏中毒事件定性為烏頭堿中毒賓川縣中醫(yī)院楊鴻醫(yī)生說，草烏屬于毒性中藥材，烏頭類藥物都含有烏頭堿，烏頭堿的毒性極為強烈，常人只需服用3到4毫克就會出現(xiàn)心慌、心悸、心律不齊，甚至心跳驟停如何控制中藥制劑中的毒性雜質烏頭堿?烏頭堿屬于哪一類天然活性成分?案例導入云南賓川村民吃草烏中毒事件哪些中藥中含有烏頭堿?烏頭堿屬于一般雜質還是特殊雜質？生物堿的檢查一、概述藥物除需檢查一般雜質外，還需檢查可能存在的特殊雜質。特殊雜質是指某些藥物制劑在生產和貯藏、運輸過程中，由于自身性質、生產方式及工藝條件，可能引入的雜質

1.特殊雜質的檢查特殊雜質的檢查通常是利用藥物與雜質在理化性質方法的差異，采用物理、化學、生物等方法進行檢查。由于藥物品種不同，所含的特殊雜質不同，采用的檢查方法也不同，故特殊雜質的檢查方法收載在各品種的檢查項下一、概述

2.烏頭堿類生物堿的檢查烏頭類藥物有川烏、草烏、附子等。烏頭類藥物含有多種生物堿，其中烏頭堿型生物堿中C8、C14上的羥基分別與乙酸、苯甲酸結合生成雙酯型生物堿。雙酯型生物堿親酯性強，有麻辣味，毒性大。為保證用藥安全，《中國藥典》（2020年版）規(guī)定應對烏頭類藥物及其成方制劑進行雙酯型烏頭堿的限量檢查。常用方法為薄層色譜法（TLC），也可采用高效液相色譜法（HPLC）生物堿的檢查一、概述

3.其他生物堿的檢查除了烏頭類劇毒性生物堿的檢查外，中藥制劑中生物堿的檢查還包括總生物堿限量檢查，如風濕定片等；莨菪堿限量檢查，如復方苦參腸炎康片等；士的寧的限量檢查，如復方夏天無片、風寒雙李拐片等，還有鹽酸罌粟堿和嗎啡的限量檢查，如咳喘寧口服液等生物堿的檢查二、薄層色譜檢查法1.方法簡述將供試品和雜質對照品分別點樣于同一薄層板上，展開、顯色、檢視。觀察供試品產生的斑點的位置和大小，并與雜質對照品的斑點進行比較，從而判斷雜質是否超過限量。本法簡便、快速、靈敏、不需特殊設備，適用于有機雜質的檢查生物堿的檢查二、薄層色譜檢查法2.檢查步驟生物堿的檢查供試品溶液的配制

對照品溶液的配制薄層色譜法檢查

→根據(jù)檢查結果得到結論雜質對照品法供試品溶液自身稀釋對照法對照藥物法1法＋2法↓二、薄層色譜檢查法3.應用實例生物堿的檢查（1）三七傷藥片中烏頭堿的限量檢查處方：三七、制草烏、紅花、骨碎補、接骨木、雪上一枝蒿供試品溶液的配制：取本品30片，除去包衣，研細，加氨試液10ml使?jié)櫇瘢右颐?50ml，振搖30分鐘，放置2小時，分取乙醚液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇溶解并加至2.0ml，作為供試品溶液對照品溶液的配制：另取烏頭堿對照品，加無水乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對照品溶液二、薄層色譜檢查法3.應用實例生物堿的檢查（1）三七傷藥片中烏頭堿的限量檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）操作，吸取供試品溶液10μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-二乙胺（4:3:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點，或不出現(xiàn)斑點二、薄層色譜檢查法3.應用實例生物堿的檢查（2）咳喘寧口服液中罌粟堿和嗎啡的限量檢查處方：麻黃、石膏、苦杏仁、桔梗、百部、罌粟殼、甘草供試品溶液的配制：取本品25.0ml，加濃氨試液調節(jié)pH值至9～10，用三氯甲烷振搖提取3次，每次40ml合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣用甲醇溶解使成10.0ml，作為供試品溶液對照品溶液的配制：另取鹽酸罌粟堿對照品和嗎啡對照品，分別加甲醇制成每1ml各含5.0mg和2.0mg的溶液，作為對照品溶液二、薄層色譜檢查法3.應用實例生物堿的檢查薄層色譜檢查：照薄層色譜法（《中國藥典》2020年版通則0502）操作，吸取供試品溶液4μl、鹽酸罌粟堿對照品溶液10μl與嗎啡對照品溶液6μl，分別點于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（20：20：3：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，置日光下檢視檢查要求：供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，出現(xiàn)的斑點應小于對照品斑點（2）咳喘寧口服液中罌粟堿和嗎啡的限量檢查三、高效液相色譜檢查法1.方法簡述采用高壓輸液泵將流動相泵入裝有填充劑的色譜柱中，通過進樣器注入的供試品被流動相帶入色譜柱內進行分離，各成分先后進入檢測器完成定量測定。可以直接測出雜質的限量（限度），并與藥典要求比較，判斷是否合格生物堿的檢查2.檢查步驟生物堿的檢查三、高效液相色譜檢查法色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗高效液相色譜法檢查外標法：雜質對照品法內標法：雜質對照品，內標物加校正因子的主成分自身稀釋對照法不加校正因子的主成分自身稀釋對照法面積歸一化法↓↓根據(jù)檢查結果，得到結論對照品溶液的配制&供試品溶液的配制↓3.應用實例生物堿的檢查制川烏中雙酯型生物堿的檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：填充劑、流動相、梯度洗脫、檢測波長；理論板數(shù)對照品溶液的配制三、高效液相色譜檢查法供試品溶液的配制藥品粉末過篩、稱量→加入溶劑溶解→超聲處理30分鐘續(xù)濾液→40℃以下減壓回收溶劑→殘渣加溶劑溶解過濾，取續(xù)濾液，即得苯甲酰烏頭原堿對照品苯甲酰次烏頭原堿對照品苯甲酰新烏頭原堿對照品加異丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液進行配制3.應用實例生物堿的檢查制川烏中雙酯型生物堿的檢查高效液相色譜法測定：精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，測定，即得三、高效液相色譜檢查法檢查要求：本品按干燥品計算，含苯甲酰烏頭原堿（C32H45NO10）、苯甲酰次烏頭原堿（C31H43NO9）及苯甲酰新烏頭原堿（C31H43NO10）的總量應為0.070%～0.15%鏈接未來崗位藥物的雜質檢查不僅包括一般雜質檢查，也涵蓋了特殊雜質檢查。雙酯型生物類特殊雜質具有毒性，嚴重危害人民身體健康，嚴格控制其限量，對于保證藥品安全性和純度有著重要意義作為一名藥品檢驗人員，須牢固樹立“質量第一、安全操作”的意識，牢