《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》標準項目編制說明1工作簡況1.1任務來源根據國家煙草專賣局國煙科[2011]165號計劃下達的工作計劃，制訂《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》行業檢測標準。1.2項目承擔單位、協作單位及主要分工根據國家煙草專賣局標準項目專項合同（合同號：2011B060），該項工作由云南煙草科學研究院牽頭和湖南中煙工業有限責任公司共同承擔，主要負責本標準的研究、組織以及起草工作。云南省煙草質量監督檢測站、上海煙草集團有限責任公司、紅塔煙草（集團）有限責任公司、紅云紅河煙草（集團）有限責任公司等四家單位作為共同實驗方也參與了該標準的共同實驗相關工作。1.3主要工作過程該項工作主要分四個階段。第一階段前期調研階段項目組成立后，首先進行了國內外相關標準資料調研。調研結果表明：國際標準化組織未制定煙用添加劑中硫脲的檢測標準，有關硫脲的檢測技術的報道也較少。目前能檢索到的飲料中硫脲測定的權威相關文獻主要有：1999年，AOAC公布了一系列關于硫脲的官方檢測方法，這些方法包括：AOAC948.18（橙汁中的硫脲定性測試程序）、AOAC948.19（橙汁中硫脲的迅速氧化方法）、AOAC948.20（冰凍桃子中硫脲的測定分光光度法）、AOAC961.10（桔子皮中硫脲的測定比色法）。1981年，HKobayashi等采用反相高效液相色譜和紫外檢測器(RP-HPLC-UV)建立了血漿中硫脲的檢測方法，該方法采用甲醇和水作為流動相，檢測波長設置為240nm,田鼠血漿樣品經過乙醇提取、蒸發富集、硅膠純化等步驟，最后采用反相液相色譜檢測樣品中的硫脲。1995年，BUA等采用HPLC建立了測定水中硫脲的高效液相色譜方法，方法檢出限為0.1μg/ml，方法回收率100-112%。1997年，AndreaRaffaelli等采用大氣壓化學電離源選擇反應監測模式建立了水中硫脲的液相色譜質譜（LC-MS）快速檢測方法。2009年，黃曉蘭等建立了測定面條和米粉中硫脲的液相色譜-質譜/質譜（LC-MS/MS）檢測方法，方法的檢出限0.5μg/g，平均回收率83-90%。所報道的色譜方法主要是液相色譜法，涉及到的檢測器有紫外檢測器、質譜檢測器等。從以上列舉的方法可以看出，現有硫脲的分析檢測方法主要是針對工業生產產品、環境樣品和飲料等而建立的。其中AOAC方法針對固定對象—橙汁、柑桔皮，采用比色法和分光光度法分別對樣品中的硫脲進行了定性和定量測定，這些方法對于煙草類添加劑中硫脲的測定具有借鑒意義。在梳理種類龐雜檢測方法的基礎上，項目組從本標準制訂的適用范圍（香精及料液）、普適性（煙草行業內儀器配置情況）出發，根據上述文獻，對煙用添加劑中硫脲進行高效液相色譜法的研究，以此法作為煙用添加劑中硫脲的檢測標準方法，力求使標準既具有科學性、先進性，又具有適用性和可操作性。同時也充分考慮到在實際工作中，如果需要對色譜峰進行定性確認時，可以將所建立的高效液相色譜法移置到高效液相色譜-質譜/質譜（HPLC-MS/MS）檢測方法中，解決實際樣品中硫脲定性判斷問題。第二階段試驗研究階段項目組根據選定的檢測方法，按預定實驗方案，對檢測方法中涉及的煙用添加劑樣品稱樣量、萃取溶劑選擇、溶劑用量、萃取條件和體積的選擇、高效液相色譜條件選擇等方面進行了嚴謹細致的試驗和優化，確定了檢測方法的相關實驗條件，并對方法回收率、精密度、檢出限等指標進行了方法評價實驗。第三階段補充實驗階段2011年9月，項目組召開了《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》標準研討會，與會的有關專家對項目組初期建立《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》標準草案進行了初步研討，根據研討意見，項目組于2011年10月-2011年12月期間進行了補充實驗，基本完成檢測方法標準相關研究。第四階段方法比對實驗階段為了考察方法在不同實驗室之間的再現性，取3個煙用添加劑樣品（表香、料液、浸膏），于2011年11月，分別在云南煙草科學研究院、湖南中煙工業有限責任公司、云南省煙草質量監督檢測站、紅塔煙草（集團）有限責任公司、紅云紅河煙草（集團）有限責任公司、上海煙草集團有限責任公司等6家實驗室，采用項目組確定方法對選定樣本進行了重復檢測，驗證結果表明：相同樣品在不同實驗室的測試結果具有良好的再現性。1.4標準主要起草人及其所做的工作張承明、庹蘇行：方法文獻查閱、試驗方案設計與研究、方法比對實驗；陳永寬、楊華武、繆明明：試驗方案設計與技術指導；譚建林、李勁竹、孫文梁、朱麗、王素娟、李雪梅、王璐、賀兵：方法研究與比對實驗。2相關領域的國、內外標準研究和制修訂情況2.1相關領域的國、內外標準研究情況國際標準化組織（ISO）未制定煙用添加劑中硫脲的檢測標準。2.2標準編制原則及主要內容確定的依據2.2本標準規定了煙用添加劑中硫脲的高效液相色譜測定方法。本標準適用于煙用香精及料液中硫脲的測定。2.2根據國家煙草專賣局國煙科[2011]165下達的工作計劃，進行《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》行業標準的制訂。項目組充分考慮行業內各卷煙企業的現有設備以及文獻檢測方法所涉及的儀器設備兩方面情況的前提下，采用高效液相色譜法作為煙用添加劑中硫脲的檢測標準方法。并遵照科學性、先進性、適用性和可操作性標準制訂常規原則，進行了本檢測標準的研究制訂工作。2.2項目組根據選定的檢測方法，按預定實驗方案，對檢測方法中涉及的相關條件實驗及方法回收率、精密度、檢出限等指標進行了嚴謹細致的試驗，主要內容如下：稱取1g（精確至0.1mg）試樣于50mL具塞的錐形瓶中，加入15mL水（4.2.1），在150r/min條件下振蕩萃取10min，將振蕩萃取液移入25mL具塞容量瓶中，用5mL水（4.2.1）清洗錐形瓶，將清洗溶液注入容量瓶中，并用水（4.2.1）定容至刻度，搖勻。移取10mL定容萃取液于10mL帶塞的離心試管中，在5000r/min條件下離心10min，準確移取3mL上清液至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2.2）定容，搖勻。取適量溶液過0.45μm濾膜（4.1.5），濾液用高效液相色譜儀分析。對于水不能分散的試樣，按照以下方法處理。稱取1g（精確至0.1mg）試樣于50mL具塞的錐形瓶中，加入5mL二氯甲烷（4.2.4）將試樣分散均勻，再準確加入25mL水（4.2.1），在150r/min條件下振蕩萃取10min，靜置分層，準確移取3mL上層水萃取溶液至10mL容量瓶中，用甲醇（4.2.2）定容，搖勻。取適量溶液過0.45μm濾膜（4.1.5），濾液用高效液相色譜儀分析。本方法中硫脲的檢出限為0.43mg/kg，定量限為1.42mg/kg，回收率在90.85%～94.78%之間（具體內容見試驗報告）。3標準預期產生的社會、經濟效益硫脲（thiourea），別名：硫代尿素，主要用于有機合成，醫藥上用作生產藥物的中間體,橡膠工業上用作硫化促進劑,采礦上用作浮選劑，還用作紡織品化學漂白劑、紙張處理劑，印染助劑，石油化工助劑,在冶金、電鍍、農藥等行業也有應用。早期曾一度作為防腐劑，廣泛用于各類需要漂白、保鮮防腐的食品。向食品中加入硫脲可阻止褐變，表觀光亮，略帶半透明。據報導，國內東南沿海有用硫脲增白、增筋面條，這種面條表觀光亮、略帶半透明，煮熟后爽滑有彈性，口感不錯。但是，硫脲一旦被人體攝入后，會導致多種危害，這些危害包括：抑制甲狀腺和造血器官的機能，引起中樞神經麻痹及呼吸和心臟功能降低等，甚至導致死亡。IARC致癌性評價：動物陽性反應?；谏鲜鰧θ梭w的危害性，我國已不允許其作為食品添加劑使用。2008年國家局為了加強產品質量安全監控體系建設，擬定了煙用添加劑中16種禁用成分名單，硫脲是十六種成分之一。對于我國煙草行業，建立準確可靠的煙用添加劑中硫脲的定量檢測方法是非常有必要的。由于煙用添加劑種類繁多，成分復雜，因此建立一種能夠準確測定煙用添加劑中的硫脲含量的方法，都是一項十分困難的工作。本標準的目標是建立煙用添加劑中硫脲的檢測標準，為卷煙產品安全監控體系的構建提供技術支持,為低危害成分卷煙產品開發奠定技術基礎，具有一定的社會效益及潛在經濟效益。4采用國際標準和國外先進標準的情況目前沒有關于煙用添加劑中硫脲測定的相關國際標準和國外先進標準，因此沒有進行采用。5與有關的現行法律、法規和強制性標準的關系本標準按照有關的現行法律、法規和強制性標準的相關規定，無任何違背。6作為強制性標準或推薦性標準的建議及主要依據介于目前煙草行業內煙用添加劑中硫脲的定量檢測手段、儀器設備以及相關技術的現實情況，建議將《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》可作為推薦性檢測標準，提供給各卷煙企業、質檢中心以及相關研究中心等檢測部門。7標準宣貫的要求和措施建議《煙用添加劑中硫脲的測定高效液相色譜法》行業標準發布后，由國家煙草專賣局