




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
InventedbyK.Mullisinthe1980s
(NobelPrize)PolymeraseChainReaction,PCR聚合酶連鎖反應(yīng),PCR12/30/2024PCRallowsyoutoamplifyDNACanamplifyspecificgeneCanamplifyuptoabillion-fold!PartofthenucleotidesequencemustbeknownPCR:Purpose12/30/2024DNAtemplate(doublestranded)primers(singlestrandedDNA)DNApolymerasenucleotides(A,C,G,T)thermocyclerPCR:Requirements12/30/2024Thermocycler-controlledtemperature
-controlledrateoftemperaturechangePCR:Requirements12/30/2024Step1:SeparatethetwostrandsofDNAtemplateusuallyaround95CStep2:Cooltolettheprimersbindtothetemplatestrandsusuallyaround40to60CStep3:DNApolymeraseextendstheprimerstwonewcomplementaryDNAstrandssynthesized
usuallyaround72CPCR:3steps12/30/2024Taqpolymerase
Needheat-stableDNApolymerase:
Taqpolymerase
fromathermophilic(heat-loving)bacterianotinactivatedbyrepeatedheattreatmentsofPCRstep112/30/2024CyclesofPCR:12/30/2024◎Avoidcontamination◎Component dH2O 10XPCRbuffer dNTP senseprimer antisenseprimer TaqDNApolymerasePolymeraseChainReaction,PCR12/30/2024◎Negativecontrol/Positivecontrol/Exp.◎DetectPCRproducts EtBrstainedagarosegelelectrophoresis Southernblot◎Optimization enzyme dNTP Mg2+ Temp.ofannealing,extensionanddenaturation cycleno. primersPolymeraseChainReaction,PCR12/30/202412/30/202412/30/202412/30/2024Ifeachcycletakesabout5minutes,howmanycopiescanyoumakeinanhour?Answer:212PCR:Amplification12/30/2024MedicaldiagnosticsviralRNAorDNADNAfingerprintingForensics(legalscience)crimespaternitytestingEvolutionarystudiesHumanGenomeProjectPCR:Applications12/30/2024PCR:ApplicationsInfectiousdiseasesHepatitisvirus(HBV,HCV)Humanimmunodeficiencyvirus(HIV)12/30/2024PCR:Viraldetection12/30/2024DNA指紋親子/刑事鑑定12/30/2024前言12/30/2024衛(wèi)星DNA重複序列DNA微衛(wèi)星體迷你衛(wèi)星體巨衛(wèi)星體12/30/2024圖11-112/30/2024重複序列DNA二種主要重複序列DNA已被鑑定:1縱排重複序列的衛(wèi)星DNA約佔(zhàn)人類基因體的10%2散佈性重複序列DNA約佔(zhàn)人類基因體的5~20%衛(wèi)星DNA只存於真核生物,功能是在減數(shù)分裂時(shí),染色體可經(jīng)由這些同源互補(bǔ)的序列,配對(duì)在一起以及造成DNA重組的位置。變數(shù)縱排重複序列依長度分為:微衛(wèi)星體(microsatellite)、迷你衛(wèi)星體(minisatellites)、巨衛(wèi)星體(macrosatellite)。12/30/2024表11-112/30/2024微衛(wèi)星體12/30/2024迷你衛(wèi)星體12/30/2024巨衛(wèi)星體這些DNA序列是非常大的,長度約百萬氮鹼基,其長度使這些DNAs易被破壞或斷裂,因?yàn)榇蟛糠址ㄡt(yī)學(xué)檢體之DNA都有斷裂的現(xiàn)象,因些巨衛(wèi)星體不能在法醫(yī)工作中使用。12/30/2024圖11-212/30/2024圖11-312/30/2024圖11-412/30/202412/30/2024圖11-512/30/2024圖11-612/30/2024表11-112/30/2024限制片段長度多形性若對(duì)偶基因?yàn)楫悤r(shí),稱該基因?yàn)楫愋秃献?heterozygous)。有時(shí)變異會(huì)影響限制酶切割的部位,即原有的切割序列,因?yàn)樽儺惗В蛐碌南拗泼盖懈钗恢每赡墚a(chǎn)生。因此基於序列上的不同而導(dǎo)致有不同的切割點(diǎn),造成不同大小的限制酶切割片斷,即稱限制片段長度多形性RFLPs(restrictionfragmentlengthpolymorphisms)。12/30/2024限制酶片段長度多形性RFLPMethodofRFLPAnalysis1.DNAExtraction2.DigestionofDNAwitharestrictionendonuclease12/30/2024RFLP(續(xù))3.AgaroseGelElectrophoresis4.PreparationofaSouthernBlot12/30/20245.HybridizationwithaSingle-LocusProbe6.DetectionofRFLPsviaautoradiographyRFLP(續(xù))12/30/20247.Re-probesouthernblotwithadditionalprobesThesetofAutoradssoobtainedisknownasa"DNAProfile."RFLP(續(xù))12/30/2024圖11-712/30/2024圖11-812/30/2024圖11-912/30/2024聚合酶連鎖反應(yīng)PCR的極端靈敏度使交叉污染成為一個(gè)非常嚴(yán)重的問題。極微小量的污染DNA,可能來自組織、液體、細(xì)菌和實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。在某些條件下,法院收集樣品時(shí)易造成交叉污染。污染的附加條帶將會(huì)是可見且可能混淆、毀壞結(jié)果的。因此小心選擇適當(dāng)?shù)牟僮鳁l件及步驟、使用污染防治控制,將使報(bào)告書中的交叉污染被識(shí)別出來。12/30/2024圖11-1012/30/202412/30/2024粒線體DNA及Y染色體12/30/2024PCR-RFLP12/30/2024PCR-RFLP之應(yīng)用12/30/2024親子鑑定RFLP12/30/2024ChildMolestationEvidenceInthiscasethedefendantwaschargedwithassaultinghisgirlfriend'syoungson.Theevidencewasasemenstainonthechild'sperson.Comparisonsweremadewith5differentRFLPprobes.Twoareshownbelow.Thedefendant'sreferenceprofilematchedtheevidenceforeachprobe.Thedefendantcouldnotbeexcludedasasourceoftheevidence,andeventuallyagreedtoapleabargain.12/30/2024Inthisstudy,10victimsofsexualassaultwhobecamepregnantshortlythereaftertookpartinacontrolledstudy(Hammondetal,JAMA273,1774,(1995).Priortotesting,theywereinterviewedaboutcontinuingthepregnancy.Allwomenhadaconsensualpartnerwhowasalsoapotentialfatheroftheunbornchild.
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 初中數(shù)學(xué)第5章 圖形的軸對(duì)稱同步單元達(dá)標(biāo)測(cè)試題+2024-2025學(xué)年北師大版七年級(jí)數(shù)學(xué)下冊(cè)
- 全方位解析裝液氮的容器原理、操作、維護(hù)與應(yīng)用拓展
- 2《我向國旗敬個(gè)禮》公開課一等獎(jiǎng)創(chuàng)新教學(xué)設(shè)計(jì)(表格式)-2
- 標(biāo)準(zhǔn)自行車零件采購合同
- 簡易不銹鋼材料采購合同版本
- 房屋買賣合同修訂協(xié)議
- 三方合同:資源共享與互惠互利
- 會(huì)員卡轉(zhuǎn)讓合同模板
- 2025年醫(yī)療器械購銷合同樣本
- 事業(yè)單位勞動(dòng)合同中的勞動(dòng)權(quán)益保護(hù)
- 中職高教版(2023)語文職業(yè)模塊-第五單元:走近大國工匠(一)展示國家工程-了解工匠貢獻(xiàn)【課件】
- 2025年湖南懷化市城市管理和綜合執(zhí)法局局屬事業(yè)單位招聘歷年高頻重點(diǎn)提升(共500題)附帶答案詳解
- 福建省能源石化集團(tuán)有限責(zé)任公司招聘筆試沖刺題2024
- 2018NFPA10便攜式滅火器標(biāo)準(zhǔn)
- 光伏低壓并網(wǎng)試驗(yàn)施工方案
- 中老年常見病及預(yù)防路徑
- 道路橋梁工程考試題庫單選題100道及答案解析
- 【MOOC】數(shù)據(jù)庫原理及應(yīng)用-西南石油大學(xué) 中國大學(xué)慕課MOOC答案
- 教職工消防知識(shí)培訓(xùn)
- DB11 854-2012 占道作業(yè)交通安全設(shè)施設(shè)置技術(shù)要求
- 解讀2024年《學(xué)紀(jì)、知紀(jì)、明紀(jì)、守紀(jì)》全文課件
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論