ICS65.020.01CCSB3921在提交反饋意見時，請將您知道的相關專利連同支持性文件一并附上。IDBXX/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由遼寧省農業農村廳提出。本文件由遼寧省農業農村廳歸口。本文件起草單位：遼寧省農業科學院食用菌研究所；遼寧省農業農村發展服務中心；鳳城市大業食用菌專業合作社聯合社；葫蘆島農函大玄宇食用菌野馴繁育有限公司。本文件主要起草人：李超、李宏亮、侯俊、劉國宇、郭學山、馬世宇、史明文本文件發布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復并認真處理，根據實際情況依法進行評估及復審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農業農村廳（遼寧省沈陽市和平區太原北街2號），郵編：110001，聯系電話文件起草單位通訊地址：遼寧省農業科學院食用菌研究所，郵編：110161，聯系電話：0241DBXX/TXXXX—XXXX液體菌種生產技術規程第8部分：猴頭菇本標準規定了猴頭菇（Hericiumerinaceus）液體菌種生產的術語和定義、生產條件、生產技術、質量要求、貯藏、生產記錄等要求。本標準適用于猴頭菇液體菌種的生產。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB150.1壓力容器第1部分：通用要求GB4789.28食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養基和試劑的質量要求GB5749食品安全國家標準生活飲用水衛生標準GB/T12728食品安全國家標準食用菌術語NY/T528食品安全國家標準食用菌菌種生產技術規程NY/T1731食品安全國家標準食用菌菌種良好作業規范3術語和定義GB/T12728界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1發酵罐fermentationbioreactor一種生物反應器，是指為活細胞或酶提供適宜的反應環境，讓他們進行細胞增殖或生產的裝置系統。3.2發酵罐空消emptyfermentersterilization是指在發酵罐內沒有放發酵液時，對整個空的罐體進行滅菌消毒。3.3發酵罐實消fermentersterilization是指加入培養基后消毒滅菌。4生產條件生產要求應符合NY/T528的規定。環境要求應符合NY/T1731的規定。液體種發酵罐質量應符合GB150.1的規定。生產用水標準應符合GB5749的規定。2DBXX/TXXXX—XXXX5品種選擇選用高產、優質、抗逆性強、商品性好的猴頭菇品種，從具相應資質的供種單位引種或本單位選育，并清楚地追溯菌種來源。菌種生產過程應符合NY/T528的要求。6生產技術6.1母種制備6.1.1培養基配方去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蛋白胨3g～5g，水1000ml。6.1.2菌種活化將保藏種接種到培養基中，培養溫度22℃~24℃,避光恒溫培養10d～15d，菌絲長滿試管或者培養皿檢驗合格即可使用。6.2搖瓶生產6.2.1容器采用無色專用玻璃菌甁，用棉塞、硅膠塞或專用封口透氣膜封口。6.2.2培養基配方去皮馬鈴薯200g、葡萄糖20g/L、磷酸二氫鉀1g/L、硫酸鎂0.5g/L、pH4.0。6.2.3培養基配制去皮馬鈴薯煎汁1000ml，放入葡萄糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，充分溶解均勻后，裝入搖瓶，裝液量不超過搖甁容量的3/5，搖瓶中放置磁力攪拌棒，封口后待滅菌。6.2.4滅菌將搖瓶放入高壓滅菌鍋內進行滅菌，滅菌蒸汽壓力0.11MPa，在121℃下維持20min～30min。6.2.5接種待培養基冷卻至25℃以下，在無菌條件下，用打孔器打孔（5mm孔徑）或接種鉤?。?mm～8mm×5mm~8mm）4塊～5塊活化母種塊迅速轉接于搖甁培養基內，封口。6.2.6振蕩培養將搖瓶放入搖床內，培養溫度22℃~25℃,轉速150r/min～170r/min，避光條件培養6d～8d。6.3發酵罐生產6.3.1發酵罐空消發酵罐初次使用、出現雜菌、長期放置及更換品種時，應進行空消滅菌。蒸氣壓力0.11MPa～0.14MPa、恒壓維持40min。3DBXX/TXXXX—XXXX6.3.2培養基配方去皮馬鈴薯（200g）煎汁1L、葡萄糖20g/L、磷酸二氫鉀1g/L、硫酸鎂0.5g/L、pH4.0。6.3.3投料與定容原料按比例加水后攪拌均勻，加入罐內，裝液量為罐體容量的70%～80%，加入0.01%消泡劑，擰緊上料口蓋。6.3.4發酵罐實消液體種發酵罐內蒸汽壓力控制在0.11MPa～0.12MPa，恒壓維持60min～90min。6.3.5冷卻滅菌結束，關閉空氣過濾器滅菌閥與排氣閥，緩慢打開夾套排氣閥降壓至0MPa，通入冷水降溫；同時緩慢打開發酵罐罐內排氣閥降壓，待壓力接近0.02MPa～0.04MPa時向罐內通入無菌空氣，調整排氣閥，維持罐壓0.04MPa～0.05MPa，培養液溫度降至25℃以下時，關閉夾套進水閥。6.3.6接種將搖瓶接種管和發酵罐接種口用75%酒精消毒，用95%酒精的火焰圈套在接種口上，輕微打開閥門，使發酵罐罐內壓力為0.01MPa。點燃火焰圈，在火焰保護下用鑷子去掉瓶塞，打開接種口閥門，將搖瓶菌種注入發酵罐。接種量為0.5%～1.0%。接種后迅速關閉接種閥門，去掉火焰圈，繼續通入無菌空氣。6.3.7發酵培養根據菌絲生長情況，適時調節進氣閥門，通入適量無菌空氣，通氣量一般為1：0.8V/V?min～1：1V/V?min，同時調節排氣閥，維持罐壓0.01MPa～0.02MPa，培養溫度控制在22℃~24℃,培養6d～8d。7質量要求7.1感官要求采用“看、旋、嗅”的步驟進行檢查，應符合表1的規定。表1猴頭菇液體菌種感官要求7.2生理指標7.2.1鏡檢7.2.1.1、取樣接種前，在無菌操作狀態下將液體菌種取到滅菌后的三角瓶中。7.2.1.1裝片4DBXX/TXXXX—XXXX取一滴液體菌種，帶少量菌球，滴在載玻片上，蓋上蓋玻片。7.2.1.3觀察在400倍下觀察菌絲和液體的狀態，重點觀察菌絲分枝、隔膜、粗細、鎖狀聯合等是否正常，觀察是否有酵母菌、細菌等異常微生物。7.2.1.4判斷根據觀察結果，判斷是否染菌，做出檢測報告。7.2.2取樣接種取少量猴頭菇菌液，接種于霉菌、細菌和酵母菌專用培養基中，在22℃~26℃條件下恒溫培養2d~3d，觀察菌絲生長情況。表2猴頭菇液體菌種生理指標8貯藏猴頭菇液體菌種生產后應立即使用。如不能立即使用，搖