高分辨質譜法快速識別強肝膠囊中的化學成分創新實驗設計匯報人：xx組員：xx指導老師：xx目錄一、實驗背景二、實驗簡介三、實驗目的四、實驗原理五、實驗提示六、實驗步驟七、結果與討論八、優勢與特色2一、實驗背景中藥是中華民族的瑰寶，中藥復方是中藥臨床用藥的主要形式。強肝膠囊來源于中醫經典方劑“強肝湯”，處方由茵陳等16味中藥組成，歷經數年開發成膠囊劑，臨床廣泛用于治療多種肝臟疾病。然而，目前強肝膠囊的化學成分譜的研究還不夠充分。因此，本實驗以臨床療效確切的強肝膠囊為研究對象，擬采用高分辨質譜法快速識別強肝膠囊中的化學成分，將為其物質基礎、質量控制、藥理活性的研究提供實驗理論依據。316味中藥復雜成分物質基礎質量控制藥理活性二、實驗簡介實驗類型：綜合設計實驗實驗時長：8學時（分兩次進行）教學過程:4學生分組、查閱文獻、制訂方案

進行實驗分析結果、撰寫報告5

三、實驗目的52掌握運用高分辨質譜法快速識別強肝膠囊中的化學成分并建立化學成分數據庫。1掌握UHPLC-QTOF-MS/MS法的基本原理和方法。3培養學生文獻檢索，方案設計等基本科研能力，培養學生的創新意識和創新思維。四、實驗原理液質聯用（HPLC-MS)以液相色譜作為分離系統，質譜為檢測系統。樣品經液相系統分離，被離子化后，經檢測器得到未知化合物的質譜圖，再與已知的質譜圖進行對比，確定待測化合物。6五、實驗提示供選藥物：強肝膠囊及其對照品；查閱文獻：了解藥物性質和特點，學習儀器操作方法及現有研究強肝膠囊有效成分的方法；研究基礎：

摸索合適的色譜條件和質譜條件，為研究提供基礎。78儀器：超高效液相色譜四級桿飛行時間質譜儀

ACQUITYUPLC?HSSC18色譜柱（2.1×150mm,1.8μm）

LC-30A超高效液相色譜儀

試劑：甲醇、乙腈，甲酸、乙酸銨，水為娃哈哈純凈水。

樣品：強肝膠囊（批號01180659）對照品：櫟癭酸，丹參酮ⅡA，精氨酸，芍藥苷，丹酚酸B，毛蕊異黃酮葡萄糖甲苷，蒿本內酯，梓醇，熊果酸，毛蕊花糖苷，綠原酸，（R、S）-告依春，阿魏酸，甘草苷，黃芪甲苷。儀器和試劑實驗要求與組織實驗按小組進行，3-5人/組，組長負責協調各組員分工；利用各種檢索工具查閱相關文獻并做出較為詳細的摘錄；參考相關文獻,通過團隊的綜合思考，擬訂詳細的實驗方案，并按計劃實施；

對實驗結果進行詳細的歸納總結。9六、實驗步驟10制備強肝膠囊和混合對照品溶液UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析對照品化學成分數據庫，利用一級和二級質譜進行鑒定色譜保留時間和質譜信息進行匹配推斷強肝膠囊中可能存在的化學成分有targetednon-targeted無六、實驗步驟11液相條件質譜條件液相色譜儀LC-30A高效液相色譜儀色譜柱ACQUITYUPLC?HSSC18

色譜柱（2.1×150mm×3μm）流動相A：0.1%甲酸水B：乙腈洗脫梯度0-6min,2-10%B6-21min,10-30%B21-27min,30-60%B27-29min,60-100%B29-30min,100-2%B流速0.3mL/min柱溫35℃進樣量5μL質譜儀TripleTOF?5600+離子源ESI源采集模式IDA正負模式PositiveandNegativeGS150psiGS255psiCUR35psiTEM500℃ISVF4.5/-4.5kVTOFMassesHighSensitivityParametersPositiveNegativeDP(V)80V-80VCE(eV)45eV-45evCES(eV)2020TOFMasses(Da)100-1200100-1200ProductIonMasses(Da)50～120050～1200七、結果與討論圖A負離子模式下強肝膠囊樣品的總離子流圖

圖B正離子模式下強肝膠囊樣品的總離子流圖AB七、結果與討論通過與對照品信息匹配，10個化合物得到明確的鑒定。根據精確質量數以及二級碎片鑒定出37個化合物。表1UHPLC-Q-TOF-MS/MS法鑒定強肝膠囊中主要化學成分結果No.RT(min)SelectionmodeExtractionMassm/zFoundMassm/zError(ppm)ChemicalFormulaMajorfragmentsIdentificationresultPlantSourcesDatasource113.84［M-H］-479.15589479.156220.7C23H28O11327.1109165.0569121.030777.0416芍藥苷白芍對照品219.19［M-H］-493.11406493.11440.7C26H22O10295.0637185.0247135.0450109.0302丹酚酸A丹參數據庫312.06［M+H］+357.11801357.11810.3C16H20O9195.0653177.0550149.0601121.0654龍膽苦苷秦艽對照品-----------七、結果與討論14龍膽苦苷的提取離子流圖龍膽苦苷的一級質譜圖龍膽苦苷的二級質譜圖七、結果與討論建立的強肝膠囊化學成分數據庫幾乎涵蓋16味藥材中有的所有化學成分，數據庫中的信息對于之后的強肝膠囊化學成分實驗研究與鑒定有信息支持。本實驗采用UHPLC-QTOF-MS/MS法對強肝膠囊內容物進行定性分析，鑒定了強肝膠囊中的主要化學成分，為其物質基礎、藥理活性、質量控制的研究提供實驗理論依據和進一步研究的基礎。

15思考題本實驗色譜條件還可以進行哪些優化？LC-MS聯用接口的作用是什么？有幾種常用接口？液相色譜-質譜聯用技術的優點？16八、優勢與特色本實驗將