骨碎補在骨科方面具有大醫療研究意義，產品與制劑的開發一直在不斷開展，有較高的開發前景。所以開發這種骨碎補茶膏可以增加骨密度的保健產品，有著很重要的意義[5]。1.3壯骨茶膏產品的開發研究隨著現代科技飛速變化，我們的中藥文化也要緊跟著發展的步伐，改變傳統的劑型，將中藥配方利用現代提取技術，將主藥的功能活性成分提取出來，制備出新的劑型[17]。在某種意義上可以改變人們對中藥的傳統看法，還可以推廣我們中藥文化，從而得到更多人的支持。本實驗將骨碎補作為研究內容，用超聲波輔助醇提取出柚皮苷，然后把骨碎補提取液和桑寄生茶煎煮液經過濃縮工序，最后加進輔料：蜂蜜、桂花，制備出茶膏。超聲輔助醇提取法的使用簡單、高效環保、節約溶劑損耗，提取率比傳統的煎煮、索氏回流、浸提等要高。開發骨碎補壯骨茶膏產品，研究一種具有自己獨特風味的半固態速溶茶，茶膏無論從口感上、便捷上、形態上和色澤上都能給人帶來一種美感沖擊14]，加上茶膏具有一定的養生功效和營養價值高，老少幼皆適宜。未來喝茶也將成為社會上的一股潮流，為推動中國茶文化的進展，也出現了一些年輕人注重養生，喝各種養生茶，但是從根本上始終沒有那么便利，效果也并不理想。目前市場上，很少有將中藥茶制作成劑型的，也是保健茶市場的一個空缺，目前研究開發將骨碎補做成壯骨茶膏產品比較少見。為解決大眾的需求，研一款攜帶輕巧方便有品質的茶飲品，因此對中藥骨碎補開發研究做成壯骨茶膏產品，填補了壯骨茶膏產品在市場上的缺失，骨碎補壯骨茶膏的制備給保健茶市場增加了新的品種，開辟了保健茶膏市場。通過對骨碎補壯骨茶膏的生產工藝實驗，開拓了骨碎補在保健品和食品方面的應用范圍，為骨碎補的新藥研究奠定了基礎。圖1-1柚皮苷化學分子式第二章骨碎補柚皮苷的提取2.1實驗儀器材料和試藥2.1.1實驗儀器材料表2-1實驗儀器Table

2-1

Experimental

instruments實驗儀器材料型號廠家759系列紫外分光光度計UV-1800上海菁華儀器有限公司超聲清洗機KQ-500DE廣州星朔儀器有限公司循環水式真空抽濾泵SHZ-Ⅲ河南予華儀器有限公司中藥打粉機FW-135天津泰司特儀器有限公司電子分析天平AL2004P上海海特勒儀器有限公司電子天平YP1002N上海菁海儀器有限公司四號藥典篩孔徑0.25mm上虞市瑞志儀器廠2.1.2試劑表2-2試劑材料Table

2-2

Reagents

materials試劑批號廠家骨碎補20200902廣西仙茅中藥科技有限公司梧州桑寄生茶200413梧州云峰藥業有限公司蜂蜜（食品級）20210219安徽省百合食品有限公司桂花（食品級）20211008蕪湖溢香醇茶葉公司柚皮苷對照品（≥98%）10236-47-2成都麥德生物科技公司無水乙醇分析純2021年6月28日天津富宇化工科技有限公司甲醇（CH3OH)分析純2019年1月8日天津科密試劑有限公司蒸餾水2.2骨碎補藥材的預處理先將骨碎補放置烘箱，烘箱內的溫度為75℃，烘干半小時，待水分烘干取出，放到中藥打粉機器里粉碎，將得到的粗粉過四號藥典篩。貼上標簽，密封保存、備用。2.3方法2.3.1對照品溶液的制備精密稱定柚皮苷的標準品6.00mg裝到100ml量瓶內，用少量CH3OH溶解定容到刻度。配得溶液濃度為0.6mg/ml。貼上標簽，備用。2.3.2柚皮苷標準曲線的繪制 準備6個10ML容量瓶，貼好標簽序號，用精密移液管的按順序移1ML、2ML、3ML、4ml、5ml和6ML對照品溶液；分裝到標簽序號10ml量瓶內，用CH3OH溶液定容，CH3OH作空白溶液組分調零，放在紫外分光度計下進行測量吸光度。查找閱讀文獻得知，柚皮苷在283nm處時最容易被檢測出來，所以接下來實驗測定柚皮苷物質均采用283nm測定其吸光度。將定容好的6瓶柚皮苷對照品溶液進行平行測定三次、取平均值，并記錄好數據見表2-3。數據整理得用柚皮苷濃度X(mg/ml)作橫坐標，吸收值（A）作縱坐標，得到回歸方程：y=22.014x+0.0065,系數R2=0.9983，數據說明柚皮苷0.06-0.036mg/ml這個范圍之內，有較好的線性關系[6]，結果見圖2-1。表2-3柚皮苷標準曲線吸光度Table

2-3

Standard

curve

of

naringin

absorbance序號123456濃度mg/ml0.0060.0120.0180.0240.0300.036吸光度A0.1510.2660.3900.5360.6600.810圖2-1柚皮苷標準曲線FIG.2-1

Standard

curve

of

naringin2.3.3超聲波提取和得率的計算在電子天平稱取9份2.00g骨碎補粉（按2.2處理后得到）放到錐形瓶里，加入選定的料液比乙醇溶液，在超聲清洗機設置溫度、時間，進行超聲輔助醇提取出柚皮苷。馬上趁熱抽濾出提取液，貼蓋上標簽、備用。用一支精密的移液管吸柚皮苷提取液2ml到50ml的量瓶內，用少量H3OH溶解定容刻度上，充分搖勻后、備用。檢測方法按2.3.3操作，將檢測得到的吸光度結合標準曲線計算柚皮苷的質量濃度，結合2-1公式計算出得率[7]。（公式2-1）柚皮苷得率：Y=公式中Y:代表柚皮苷提取量、單位mg/gC:表示柚皮苷質量濃度、單位mg/mlV:提取溶液的體積/mlK:稀釋倍數M:稱取藥粉質量/g2.3.4單因素試驗考察在天平上稱2.00g骨碎補粉，設定料液比（1：10、1：15、1：20、1：25、1：30）；提取溫度（30℃、40℃、50℃、60℃、70℃）；提取時間（10min、20min、30min、40min、50min）；乙醇濃度（45%、50%、55%、60%、65%）這四個因素進行考察[7]對柚皮苷提取量的影響，具體操作按2.3.5。2.3.5正交試驗單因素預試驗得到骨碎補柚皮苷的提取量作為正交考察指標。選出料液比、提取溫度、時間和乙醇的濃度含量這四個響比較大的條件因素，對柚皮苷提取量按照L9(34)的正交表，見表2-4設置的進行正交,優選出超聲輔助醇提取對柚皮苷提取量的提取工藝。表2-4柚皮苷正交試驗提取工藝設計Table.2-4.Orthogonalexperimentaldesignofnaringinextractionprocess水平A料液比B超聲時間/minC超聲溫度/℃D乙醇濃度/%11：202040℃5021：253050℃5531：304060℃602.4結果分析2.4.1單因素考察結果分析[8]圖2-2時間對柚皮苷提取量的影響由圖2-2得知，由于提取時間過短,需要得到溶出的有效物質不夠,提出的有效物質少。柚皮苷的提取量隨著提取時間加長，呈現出先升高后再緩慢下降，說明了柚皮苷在進行超聲時間30分鐘的時候，柚皮苷的溶出達到了頂峰。圖2-3溫度對柚皮苷提取量的影響由圖2-3可知，柚皮苷的提取量在30℃-50℃時，伴隨溫度變化而升高，原因在于提取溫度的上升使柚皮苷的溶出速度加快，讓活性成分容易滲出。在60℃時，明顯下降很多，原因是溫度高會加快有效成分遭到破壞，使溶出速度慢；乙醇成分的充分揮發，導致產生了料液比的降低。則說明了在50℃時，柚皮苷提取量到達了高點。圖2-4乙醇濃度對柚皮苷提取量的影響由圖2-4得知，乙醇濃度含量對提取量影響顯著，按照極性相似的原則，乙醇濃度分數越大，柚皮苷的有效成分溶解度也增大。濃度為55%的乙醇時，提取量達到了最高，濃度為60%-65%的乙醇時會使提取的量有所下降。這是因為柚皮苷的極性本身最大，溶解度也大，高濃度的乙醇會使溶液的揮發速度加快，從而導致料液比的減低，溶解度就會變小。則應該選擇極性相似的，濃度為55%的乙醇最為合適。圖2-5料液比對柚皮苷提取量的影響由圖2-5得知，隨著料液比的比例增大會使得柚皮苷的溶出快，提取量也會增多；當料液比在1∶25時，使柚皮苷的溶出加快、浸出量上升到最大，料液比增大到1：30時柚皮苷提取量緩慢下降，原因是隨著溶劑體積的擴大使柚皮苷浸出沒有發生改變。表2-5正交試驗結果L9(34)Table.2-5.OrthogonaltestresultsL9(34)編號料液比A超聲時間B超聲溫度C乙醇濃度D提取量mg/g111115.02212329.85313233.42421339.84522219.06623127.53731228.26832135.019333111.27k16.097.715.858.45k28.817.976.918.55k38.187.4110.326.09R2.720.564.472.46表2-5由極差r分析得出，將提取量作為考察和指標，在進行對骨碎補提取柚皮苷的四個條件中選出影響提取量主次順序結果為：C>A>D>B；得到最佳的提取工藝為：A2B2C3D2，該提取量得到了最大值。該實驗是在總結前面單因素正交實驗研究基礎上,通過三因素三水平L9(34)正交設計，探討了超聲波輔助醇提取柚皮苷的工藝條件下優化[9]，用提取溫度60℃、濃度為55%的乙醇、料液比1：25、提取30min的條件下進行驗證試驗[5],得到柚皮苷的提取量11.27mg。2.5柚皮苷的含量測定將正交實驗中得到的優選醇提取的工藝進行超聲波輔助醇的提取，稱取5g骨碎補粉放于250ml錐形瓶體。根據溫度60℃，乙醇濃度含量55%，提取持續時間30min，料液比1：25的條件進行操作。將提取得到的柚皮苷待測液，放到紫外分光光度儀器里檢測，其它的條件都不變，將波長設置283nm，測出骨碎補中的柚皮苷吸光度是2.378，測得空白組甲醇溶液吸光度0.065。數據可以看出，超過了標準曲線最大吸光度0.810，因此無法用骨碎補柚皮苷的數據，需要將骨碎補的提取溶液進行稀釋到一定的濃度。查閱了有關的藥學文獻和研究資料得知[10]，稀釋溶液的條件也可按柚皮苷標準品條件的操作原則一致。用一支精密的移液管吸取柚皮苷提取液2ml到50ML的量瓶內，用少量CH3OH溶解定容刻度上，充分搖勻后、備用。CH3OH可作為空白溶液備用，把數據記錄下來見表2-6，代入回歸線性方程式，并計算出骨碎補柚皮苷的含量。表2-6含量測定結果數據（波長283nm）Table.2-6

content

determination

data

(wavelength

283nm)名稱吸光度柚皮苷的含量mg/ml骨碎補提取液0.5730.6425CH3OH0.0650由表2-6可得知，檢測得柚皮苷的吸光度為0.573，符合柚皮苷對照品的標準曲線。第三章骨碎補壯骨茶膏的制備和質量檢測通過閱讀大量藥學相關的研究文獻得知，研究中藥骨碎補提取柚皮苷占比多部分，關于骨碎補壯骨茶膏的產品研究少，研究茶膏產品的相關文獻也相少。在我們的日常生活中，所看到的茶大多是以泡茶的形式來呈現出來，本次研究課題主要結合臨床上所了解的劑型和理論知識，以及本次實驗室的條件可以滿足制備出一款功能性茶膏。茶膏，茶之精華；茶膏的主要特點是：攜帶輕巧方便、沖泡溶解快；在口感方面，入口醇厚，普遍接受度高。茶膏在骨科方面有著較好的療效，存在很高營養價值[19]，所以對骨碎補壯骨茶膏產品開發研究非常有必要的，產品的開發前景十分可觀。3.1骨碎補壯骨茶膏的制備流程：骨碎補提取液液骨碎補提取液液清膏濃縮原料藥處理 清膏濃縮原料藥處理桑寄生煎煮液液 桑寄生煎煮液液投入桂花、蜂蜜投入桂花、蜂蜜冰箱冷藏：定型質量檢測包裝冰箱冷藏：定型質量檢測包裝圖3-1骨碎補壯骨茶膏制備流程圖3.2實驗步驟：(1)骨碎補原料處理：將骨碎補藥材挑選，60℃低溫干燥4h,粉碎成粗粉過四號藥典篩，貼上標簽、密封保存備用。（2）骨碎補柚皮苷的提取：將稱取的骨碎補粉放于大燒杯中,按料液比為1：25，加入濃度為55%的乙醇混勻，溫度在60℃，提取時間在30min的條件下提取。馬上趁熱抽濾提取溶液。冷藏保存、備用。（3）梧州桑寄生茶原料處理：水溫90℃，茶和水的比例是1：15，在電陶爐分兩次煮，煮半個小時。得到煎煮液，貼上標簽、備用。（4）濃縮：將骨碎補提取液和梧州桑寄生茶煎煮液混合，放置在電陶爐上進行蒸發濃縮。茶膏在熬制過程需要控制火候大小，防止燒焦。（5）茶膏的制作[14]：待骨碎補提取液和桑寄生茶煎煮液濃縮成清膏狀時，開始投入輔料蜂蜜、桂花，并不斷攪拌均勻，改成文火慢慢熬成稠膏狀。（6）定型：待熬成的半流體稠狀膏，倒入干凈的模具內，放在冰箱里冷凍1h、定型，制成茶膏最終成品。（6）最后對茶膏產品進行質量檢查：使用紫外法來檢測茶膏中柚皮苷的含量，感官指標評價和不溶物檢查，并及時記錄好數據。（7）包裝儲存，入庫。3.3骨碎補壯骨茶膏配方單因素考察參照《中國藥典》里的二冬膏中的處方得知原料按1：1配比，每100g的清膏中加入蜂蜜50g,研究骨碎補壯骨茶膏的配方比例。具體看表3-1。表3-1茶膏配方藥材比例研究序號骨碎補/g桑寄生茶/g蜂蜜/g桂花/g110102522151520231051524510202 3.3.1骨碎補壯骨茶膏輔料的藥理作用：表3-2茶膏輔料的藥理作用和應用輔料藥理作用應用梧州桑寄生茶祛風濕、強壯筋骨、安胎、利尿降壓常用作泡茶養生和藥品方面，有著較好的強筋骨作用，對人體骨骼方面有較大的用處蜂蜜具有殺菌作用、滋陰潤肺止咳、止痛是常用的食品甜味劑，桂花提神、行氣活血散瘀、溫補陽氣是藥食兩用的常用之品，也常常作為食品中香料3.3.2骨碎補壯骨茶膏的含量測定[11]茶膏制作按3.2實驗方法進行操作，將制得的茶膏，進行一次定量稱重，用保鮮膜包裹密封，密封后備用。分別取樣對四組茶膏進行質量檢測，稱取1g茶膏裝于100ml容量瓶內，加入少量的CH3OH溶液溶解，需要用玻璃棒攪拌使茶膏完全溶解。定容，充分搖勻、備用。用一支精密的移液管吸取2ml到25ml的量瓶內，用少量CH3OH溶解定容刻度上，充分搖勻。CH3OH可作為空白溶液備用，放到紫外分光光度儀器進行檢測，將波長設計為283nm,根據吸光度，并計算出其茶膏中含柚皮苷的含量。具體結果見表3-3所示。表3-3茶膏含量測定結果序號茶膏重量/g茶膏吸光度柚皮苷含量mg/mlA茶膏28.960.6140.6875B茶膏33.120.7260.8175C茶膏24.560.4740.5300D茶膏18.370.4120.4605由表3-3可以看出，B茶膏的吸光度測得是最大，并且算出來的含量也是最大的，結果證明溶液中含有柚皮苷含量最大。3.3.3四種茶膏類別評價[16]：在四個250ml燒杯內壁依次貼上對應的標簽序號，從四組茶膏中分別在準確稱取3g,放到四個對應的燒杯內，加入80℃100ml的熱水，5min內溶解。觀察茶膏溶液的溶解速度、香氣、湯色，滿分是100分，請三位同學對其進行打分評價見表3-4。表3-4茶膏配方比例溶解度打分評價序號溶解速度茶膏茶香茶膏湯色A茶膏818686B茶膏858790C茶膏788583D茶膏758482由表3-4可以看出，四種茶膏均可以溶解，但是D茶膏和C茶膏，需要進行玻璃棒的攪拌才能溶解完全。茶膏的湯色透亮呈淡黃棕色，加之桂花本身散發出的茶芳香。圖3-1四種茶膏類別評價打分茶膏加入桂花可以增加茶的香氣，改善原有藥材的氣味，使茶膏沖泡出來的茶湯具有一股令人愉悅的芳香；配方加入蜂蜜可以改善原本骨碎補和桑寄生茶身上的一些苦澀味道，讓茶膏的口感能入口醇厚，味道適宜，符合人的口感，使桑寄生茶和骨碎補營養成分互補，提升其壯骨功能。根據以上實驗結果得知，四類茶膏比例的茶香影響不明顯，在整組配方的茶膏產品中比較和諧，所以確定加入2g的桂花。綜合評分由圖3-1得知：B茶膏>A茶膏>C茶膏>D茶膏。3.4茶膏質量檢查3.4.1茶膏的整體感官指標評價[16]通過對茶膏產品的整體感官指標評價綜合骨碎補壯骨茶膏的各項性能。該實驗感官指標選取外觀形狀、口感、色澤、茶膏溶解的速度、茶膏粘稠度等5個方面作為綜合感官評價的參考指標。審評結果見表3-5。表3-5感官評價指標感官評價指標評價外觀形狀膏體的顏色為黃棕色、有較好的流動性、膏體外觀具有光澤口感味微甜，清香；入口滋潤醇厚，具有淡淡的桂花香色澤澄清透亮呈淡黃棕色，湯感順滑稠厚茶膏溶解的速度溶解快速，無渣、無焦屑等異物茶膏粘稠度呈半流體的稠厚狀態，類似于浸膏3.4.2茶膏的質量要求茶膏制劑的質量要求參考煎膏劑的質量相關要求[12-13]，茶膏制劑的質地應細膩、不能有焦黃臭異昧和白色無糖的晶體顆粒析出，不得出現有霉敗。結果：把茶膏放在干燥空氣條件中觀察，未觀察到有霉變，焦臭異味和淡黃色晶體析出，符合要求。3.4.3茶膏的性狀茶膏呈黃棕色稠膏狀的半流體，膏體的外觀呈現光澤、口感微甜、發散清香；入口醇厚、具有淡淡的桂花香。符合要求。3.4.4茶膏不溶物檢查不溶物檢查參照《中國藥典》四部[18]：準確的稱取茶膏5g放到250的燒杯內,倒入80℃200ml熱水,攪拌至均勻使其完全溶化，放置5分鐘內溶解，觀察茶膏中不得含有焦屑性的異物。結果：稱取5g茶膏,倒入80℃200ml熱水,茶膏溶解完全，未觀察有焦屑等異物，符合規定。第四章總結與展望4.1總結與分析本次課題在相關文獻支持下，該實驗利用骨碎補藥材的活性成分，確定配方的組成，采用超聲波輔助萃取法將有效成分提取出來，制成一款天然的、具有養生保健的壯骨茶膏。現將總結工作匯報如下：4.1.1結果討論骨碎補柚皮苷優選提取條件為料液比1：25，乙醇濃度含量55%，溫度60℃，提取持續時間為30min,得到柚皮苷的提取量11.27mg/g。骨碎補壯骨茶膏處方比例為骨碎補15g:梧州桑寄生茶15g：蜂蜜20g=1：1：5,然后加入桂花2g。對骨碎補壯骨茶膏的含量測定、整體感官指標評價、質量要求、性狀、不溶物進行質量檢查，結果均符合要求。4.1.2實驗研究過程分析通過閱讀文獻后得知，目前對于骨碎補柚皮苷的提取方法大多使用醇提取法，試驗用醇提效果比水提的好，水提濃縮過濾麻煩，因此該實驗使用醇提輔助超聲波提取骨碎補中的柚皮苷。目前柚皮苷含量測定方法多采用紫外法和高效液相法。其中紫外法的設備便宜、具有操作簡單準確、費用低、應用廣泛的特點；而高效液相法設備靈敏度高，檢測出的實驗數據更準群，但是操作復雜，使用成本高。綜合諸多因素的考慮該實驗室本身條件和自身條件的不足，只有采用紫外法比較適合該實驗的順利開展，確定骨碎補中柚皮苷的含量在分光光度計下測量。4.1.3課題的研究創新點通過查閱相關文獻得知，中藥骨碎補常以炮制入藥，將骨碎補茶做成單味劑型在臨床上更為少見。骨碎補茶雖然在歷代藥學典籍和文獻有記載，目前國內研究骨碎補壯骨茶膏的少之又少，或者沒有。茶膏這一劑型已發展成為市場上的亮點，又稱為“速溶茶”，目前市場上已開發較好的制劑有著名的普洱茶膏質量安全可控、茶膏的多樣性和便捷性元素起到了很好的市場效果。在研究骨密度方面，古方今用，采用中藥配方結合現代先進的提取方法將活性成分提取出來。骨碎補在強筋骨功效應該有更好的劑型出現，所以制成茶膏，不僅改變了原有的傳統劑型湯劑、酒劑等；