ICS65.020.30

CCSB41

41

河南省地方標準

DB41/T2067—2020

奶牛場布魯氏菌病凈化技術規范

2020-12-30發布2021-03-30實施

河南省市場監督管理局發布

DB41/T2067—2020

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定

起草。

本文件由河南省農業農村廳提出并歸口。

本文件起草單位：新鄉市動物疫病預防控制中心、河南科技學院、河南省動物疫病預防控制中心。

本文件主要起草人：荊汝頂、秦保亮、李春艷、杜海燕、王英華、馮春花、朱方兵、馬健、牛可可、

孫照霞、王超、胡元春、郝曉鵬、姜金慶、劉長忠、常衛波、趙智燦、李磊。

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奶牛場布魯氏菌病凈化技術規范

1范圍

本文件規定了奶牛場布魯氏菌病的診斷、凈化、維持、生物安全與防護等要求。

本文件適用于獨立封閉飼養規模100頭以上奶牛場布魯氏菌病的凈化。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T18646—2018動物布魯氏菌病診斷技術

中華人民共和國農業部.布魯氏菌病防治技術規范.2007

中華人民共和國農業農村部.跨省調運乳用種用動物產地檢疫規程.2019

中華人民共和國農業部.病死及病害動物無害化處理技術規范.2017

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

布魯氏菌病

由布魯氏菌屬細菌引起的人獸共患傳染病。

3.2

布魯氏菌病凈化

對奶牛場采取一系列防控措施，用血清學檢測血清均為陰性，奶牛場連續2年無個體發病和無感染

狀態，即達到布魯氏菌凈化標準。

4診斷

4.1臨床診斷

4.1.1流行特點

布魯氏菌病（以下簡稱“布病”）是由布魯氏菌引起的一種細胞內寄生疾病，主要侵害動物的淋巴

系統和生殖系統。病畜主要通過流產物、精液和乳汁排菌，污染環境。母畜比公畜，成年畜比幼年畜發

病多。在母畜中，第一次妊娠母畜發病較多。帶菌動物，尤其是病畜的流產胎兒、胎衣是主要傳染源。

消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途徑，也可通過損傷的皮膚、黏膜等感染。常呈地方性流行。

4.1.2臨床癥狀

潛伏期一般為14d～180d。最顯著癥狀是懷孕母畜發生流產，流產后可能發生胎衣滯留和子宮內

膜炎，從陰道流出污穢不潔、惡臭的分泌物。新發病的畜群流產較多；老疫區畜群發生流產的較少，但

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發生子宮內膜炎、乳房炎、關節炎、胎衣滯留、久配不孕的較多。公畜往往發生睪丸炎、附睪炎或關節

炎。

4.1.3剖檢病變

警示——對本病疑似病例剖檢采樣過程中應當嚴格按照相關生物安全要求，防止病原微生物擴散及

人員感染。

主要病變為生殖器官的炎性壞死，脾、淋巴結、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫（布病結節）。有

的可見關節炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點和出血斑，皮下結締組織發生漿液性、出

血性炎癥。

4.2實驗室診斷

4.2.1血清學診斷

4.2.1.1虎紅平板凝集試驗（RBT）（按GB/T18646—2018規定）

4.2.1.2乳牛全乳環狀試驗(MRT)（按GB/T18646—2018規定）

4.2.1.3試管凝集試驗(SAT)（按GB/T18646—2018規定）

4.2.1.4補體結合試驗(CFT)（按GB/T18646—2018規定）

4.2.1.5間接酶聯免疫吸附試驗（iELISA）（按GB/T18646—2018規定）

4.2.1.6競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）（按GB/T18646—2018規定）

4.2.2病原學診斷

警示——以下病原學操作包括但不僅限于涂片染色鏡檢、分離培養、聚合酶鏈式反應（PCR）檢測

中涉及細菌活菌操作等，均應在BSL-3級生物安全實驗室內進行，操作人員應采取針對性防護措施。

4.2.2.1涂片染色鏡檢按《布魯氏菌病防治技術規范》要求采集流產胎衣、絨毛膜水腫液、肝、脾、

淋巴結、胎兒胃內容物等組織，按GB/T18646—2018規定制成抹片，布魯氏菌體染成紅色球桿狀小桿

菌，而其它菌為藍色。

4.2.2.2分離培養按《布魯氏菌病防治技術規范》要求，新鮮病料可用胰蛋白瓊脂面或血液瓊脂斜

面、肝湯瓊脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝湯瓊脂斜面等培養基培養；若為陳舊病料或污染病料，可用

選擇性培養基培養。組織樣品、陰道沖洗液、精液、關節液、胃內容物、乳樣按GB/T18646—2018規

定處理，每份樣品均一式兩份，分別置于普通培養箱和5%～10%二氧化碳培養箱中，37℃培養3d～10d。

4.2.2.3聚合酶鏈式反應（PCR）檢測主要包括普通PCR和熒光定量PCR，普通PCR操作方法按GB/T

18646—2018第4章13節布魯氏菌Bruce-Ladder檢測方法操作，熒光定量PCR可按商品化試劑盒操作。

4.3結果判定

4.3.1具有4.1時，判定為疑似病例。

4.3.2符合4.1，且4.2.1.1或4.2.1.2陽性時，判定為患病奶牛。

4.3.3未免疫場奶牛的結果判定如下：

a)4.2.1.1或4.2.1.2或4.2.1.5陽性時，判定為疑似患病奶牛；

b)4.2.1.3或4.2.1.4或4.2.1.6或4.2.2診斷陽性時，判定為患病奶牛；

c)符合疑似患病奶牛但4.2.1.3或4.2.1.4或4.2.1.6陰性時，30d后應重新采樣檢測，4.2.1.1

或4.2.1.3或4.2.1.4或4.2.1.6陽性的判定為患病奶牛。

4.3.4免疫場動物的結果判定如下：

a)開展奶牛場布魯氏菌病凈化應連續兩年以上未進行布病疫苗免疫；

b)免疫場奶牛最后一次布病疫苗免疫后間隔二年后，按照4.3.3進行判定；

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c)對免疫背景不清的奶牛場，具有4.1時，按照4.2.2.3普通PCR進行毒株鑒別，田間流行毒

株檢測陽性的按患病動物處置。

5凈化

5.1凈化要求

以奶牛場為單位，連續2年無臨床病例，且按4.2.1血清學監測結果連續1年以上無陽性。

5.2技術路線

按照檢測、隔離、撲殺相結合的策略，對奶牛場進行凈化；疑似病例一旦確診為布病陽性牛，直接

撲殺；同欄疑似病例及陰性牛群分別進行隔離觀察，間隔3個月后按4.2.1進行血清學檢測，檢測結果仍

為陽性者進行撲殺，同時加強消毒和提高綜合飼養管理水平等措施，提高布病凈化工作效果。

5.3凈化過程

5.3.1犢牛檢測、隔離、撲殺

犢牛于20日齡時采用4.2.1.1琥紅平板凝集試驗（RBT）或4.2.1.5間接酶聯免疫吸附試驗（iELISA）

進行第一次普檢，100～120日齡時，進行第二次普檢。對檢出陽性牛隔離并采用4.2.1.3試管凝集試驗

(SAT)或4.2.1.6競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）進行復核，對確診陽性畜進行撲殺；間隔3個月再次

普檢，撲殺確診陽性牛。陰性牛參照假定健康牛群管理。

5.3.2布病疑似牛群檢測、隔離、撲殺

采用4.2.1.1琥紅平板凝集試驗（RBT）或4.2.1.5間接酶聯免疫吸附試驗（iELISA）對污染牛群進

行普檢，以后每間隔3個月進行1次普檢，對檢出陽性牛隔離并采用4.2.1.3試管凝集試驗(SAT)或4.2.1.6

競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）進行復核，對確診陽性牛進行撲殺，直至全部陰性。

5.3.3假定健康牛群檢測

每年春、秋兩季各進行一次普檢，采用4.2.1.1琥紅平板凝集試驗（RBT）或4.2.1.5間接酶聯免疫

吸附試驗（iELISA）初篩，疑似陽性牛按5.3.2進行處置管理。

5.3.4持續監測

5.3.4.1連續2次以上試管凝集試驗(SAT)或競爭酶聯免疫吸附試驗（cELISA）檢測結果均陰性的畜群

為布病凈化畜群，否則按照凈化步驟循環進行。

5.3.4.2每次樣品的采集、檢測、陽性牛的處理均應在10天內完成。

5.3.4.3凈化畜群建立后，每6個月按全群20%的比例采集血清樣品進行1次抗體監測，以持續維持

凈化畜群的健康狀態。

5.3.4.4按照《跨省調運乳用種用動物產地檢疫規程》進行檢疫，奶牛引入必須來自于非疫區，調入

后應隔離飼養45d，經當地動物防疫監督機構檢疫合格后，方可混群飼養。

6生物安全與防護

6.1人員防護

6.1.1采樣人員防護

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采樣前，采樣人員需佩戴一次性醫用乳膠手套、口罩、帽子、鞋套，著工作服，必要時佩戴護目鏡。

對采樣器械進行消毒。采樣結束后，收集采樣物品進行消毒處理，并更換衣服清洗消毒。

6.1.2檢測人員防護

應在符合相應級別生物安全實驗室中操作，病原分離培養需在BSL-3級實驗室操作，未經培養的感

染性材料和滅活性實驗在BSL-2級實驗室操作。檢測人員需佩戴一次性醫用乳膠手套、口罩、帽子、鞋

套，著工作服、護目鏡。

6.1.3飼養人員防護

進入圈舍佩戴口罩、穿工作服、膠鞋等必備的防護用品，避免破損皮膚接觸牲畜的排泄物、分泌物。

犢牛助產和處理流產胎兒、死胎兒時，除備有工作服、橡皮圍裙、帽子、口罩和膠鞋外，還應戴乳膠手

套和長袖橡膠手套，備有接羔袋和消毒液，禁止赤手接觸流產胎兒，接產后進行自身清洗消毒。

6.2環境消毒

6.2.1地面消毒

采用氫氧化鈉和生石灰等堿類消毒劑。用2%氫氧化鈉水溶液，噴灑6h～12h后用清水沖洗干凈，

生石灰應加等重量的水，均勻灑布于需消毒場所。

6.2.2圈舍消毒

可選用2%燒堿等有效消毒藥進行噴灑消毒。

6.2.3設施工具消毒

對金屬設施、設備采取火焰、熏蒸等方式消毒。

對運輸病畜的車輛和其它工具選用過氧乙酸、次氯酸、二氧化氯等消毒劑進行噴灑消毒。

6.3病死動物處理

6.3.1家畜的流產胎兒、胎盤、胎衣或死胎等，采取深埋或焚燒等方法進行無害化處理；流產死胎落

下和被羊水污染的場地，用2%氫氧化鈉浸透墊草和地面。

6.3.2從畜群中檢出并剔除布魯氏菌病畜后，應對畜舍、用具及運動場所等進行緊急消毒；按照《病

死及病害動物無害化處理技術規范》的要求，對病死和撲殺的病畜進行無害化處理。

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定

起草。

本文件由河南省農業農村廳提出并歸口。

本文件起草單位：新鄉市動物疫病預防控制中心、河南科技學院、河南省動物疫病預防控制中心。

本文件主要起草人：荊汝頂、秦保亮、李春艷、杜海燕、王英華、馮春花、朱方兵、馬健、牛可可、

孫照霞、王超、胡元春、郝曉鵬、姜金慶、劉長忠、常衛波、趙智燦、李磊。

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奶牛場布魯氏菌病凈化技術規范

1范圍

本文件規定了奶牛場布魯氏菌病的診斷、凈化、維持、生物安全與防護等要求。

本文件適用于獨立封閉飼養規模100頭以上奶牛場布魯氏菌病的凈化。

2規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期