DB34/T1535—2011留量測定液相色譜-串聯質譜法安徽省質量技術監督局發布IDB34/T1535—2011本標準按照GB/T1.1-2009給出的規則起草。本標準由安徽省質量技術監督局、安徽省食品質量安全檢驗方法標準化技術委員會提出。本標準由安徽省食品質量安全檢驗方法標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：國家農副加工食品質量監督檢驗中心、安徽國家農業標準化與監測中心。本標準主要起草人：顧亮、徐彥輝、丁磊、陶運來、羅亮、王蘇紅、劉坤、彭濤。1DB34/T1535—2011乳制品中恩諾沙星、麻保沙星、二氟沙星殘留量測定液相色譜-串聯質譜法件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3原理用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖液(pH=4.0)提取乳制品中的喹諾酮類抗生素，經離心后，上清4試劑4.4檸檬酸。4.9磷酸氫二鈉溶液(0.2mol/L):稱取71.63g磷酸氫二鈉，用水溶解，定容至1000mL。4.10檸檬酸溶液(0.1mol/L):稱取20.01g檸檬酸，用水溶解，定容至1000mL。4.11Mcllvaine緩沖液：將1000mL0.1mol/L檸檬酸溶液(4.10)與625mL0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液(4.9)混合，用鹽酸或氫氧化鈉調節pH至4.0±0.05。4.12EDTA-Mcllvaine緩沖液(0.1mol/L):稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉(4.8)放入1625mLMcllvaine緩沖液(4.11)中，振搖使其溶解。4.13甲醇水溶液：5%(體積分數)。2DB34/T1535—20114.14甲酸水溶液：0.1%(體積分數)。5.2電子天平：感量0.0001g和感量0.01g。5.4高速冷凍離心機(轉速10000r/min)。稱取約5.0g(精確至0.01g)試樣于50mL聚丙烯離心管中，加入40.0mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖液(4.12),漩渦混勻，超聲提取10min,10000r/min離心5min(溫度低于5℃),取上清液(上清液若除脂不完全，可加5mL正己烷除脂，離心分層取下層清液過柱)。HLB固相萃取柱(200mg,6mL),使用前依次用6mL甲醇、6mL水活化。將6.1提取的溶液以2～3mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2mL5%甲醇水溶液(4.13)淋洗，棄去稱取與試樣基質相應的陰性樣品5.0g,按照6.1、6.2與試樣同時進行提取和凈化，用系列標準溶液3DB34/T1535—2011e)流動相：流動相A(0.1%甲酸)+流動相B(乙腈),參考梯度條件見表1。時間(min)流速(μL/min)流動相A(0.1%甲酸)流動相B(乙腈)055655a)離子源：電噴霧離子源(ESI);c)檢測方式：多反應監測(MRM);d)霧化氣(NEB)、氣簾氣(CUR)、碰撞氣(CAD)均為高純氮氣；使用前應調節各氣體流量以f)定性離子對、定量離子對、碰撞電壓和碰撞能量等參數見表2。名稱母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞電壓(V)碰撞能量(V)恩諾沙星316.1麻保沙星363.25二氟沙星400.2382.1356.1各檢測目標化合物以保留時間和兩對離子的(特征離子對/定量離子對)所對應的LC-MS/MS色譜一致(偏差±0.5%),同時要求被測試樣中目標化合物的兩對離子豐度比與標準溶液中目標化合物的豐度比一致，相對豐度>50%、20～50%、10～20%、<10%時，允許偏差分別為±20%、±25%、士30%和±50%。4按以上步驟，對同一試樣進行平行測定。8結果計算測定結果按式(1)計算：.......................................(1)式中：X——樣品中目標化合物含量，單位為微克每千克(μg/kg);C——測定濃度，單位為微克每升(μg/L);V樣品定容體積，單位為毫升(mL);W——樣品稱樣量，單位為克(g)。9方法回收率和精密度9.1回收率本方法在0.50μg/kg～100.0μg/kg添加濃度范圍內，用陰性樣品進行添加回收試驗，恩諾沙星、