動物細胞培養年級：高中二年級

學科：生物學（人教版）主講人：楊思杰

學校：四川省洪雅中學校1簡述動物細胞培養的過程學習目標2簡述動物細胞培養的條件動物細胞培養動物細胞核移植動物細胞融合動物細胞工程是最基礎的技術問題:什么是動物細胞培養？1.概念：一、動物細胞培養從動物體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適當的培養條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術。動物體組織單個細胞細胞生長和增殖取出分散適宜條件問題：動物組織的選擇：

幼齡動物or老齡動物幼齡個體的細胞分化程度低、分裂能力強，易培養。原理地位對象目的細胞增殖（有絲分裂）動物細胞工程的基礎獲得細胞或者細胞產物胚胎或幼齡動物的細胞動物體內的細胞之所以能夠維持正常的生命活動，是因為機體給這些細胞提供了適宜的條件。你還記得有哪些條件嗎？充足的營養穩定的內環境體外培養動物細胞需要滿足什么條件？動物細胞培養所需的基本條件營養物質其他條件<<糖類氨基酸無機鹽維生素無菌、無毒的環境適宜的溫度、pH和滲透壓適宜的氣體環境2.培養條件：①營養條件：葡萄糖氨基酸無機鹽維生素問題：培養基的類型：

固體培養基or液體培養基合成培養基or天然培養基將細胞所需的營養物質按種類和所需量嚴格配制的培養基液體培養基，也稱培養液由于人們對細胞所需的營養物質尚未全部研究清楚。血清可以補充合成培養基中缺乏的物質，如蛋白質、氨基酸、未知的促生長因子等。？動物血清培養基的構成：合成培養基+血清等天然成分2.培養條件：②無菌無毒的環境：①對培養液和所有培養用具進行滅菌處理②在無菌環境下進行操作定期更換培養液無菌無毒③添加一定量的抗生素防止培養過程中的微生物污染思考：在細胞培養液中添加適量的抗生素的目的是什么？思考：為什么要定期更換培養液？以便清除代謝物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害2.培養條件：③溫度、PH、滲透壓：一般與動物體內相同①適宜的溫度：哺乳動物細胞培養的溫度多以______________為宜；②適宜的pH：多數動物細胞生存的適宜pH為___________③維持適宜的滲透壓的目的：36.5±0.5℃7.2-7.4維持細胞正常的形態和功能用培養皿或松蓋培養瓶,在含有_______________和__________的混合氣體的__________2.培養條件：④氣體環境：動物細胞培養所需氣體主要有_____和______O2CO2細胞代謝所必需的維持培養液的pH95%空氣5%CO2CO2培養箱①組成不同氣體的作用是什么？②培養儀器（95%）空氣:（5%）CO2：CO2培養箱二、動物細胞培養過程閱讀教材P44-45,思考并回答下列問題：1.為何動物細胞培養過程要將組織分散成單個細胞呢？可用什么方法？2.體外培養動物細胞有哪些類型？3.什么是細胞貼壁？什么是接觸抑制？4.什么是原代培養和傳代培養？5.為什么要進行分瓶培養？怎么處理？6.動物細胞培養與植物組織培養有什么相同之處與不同之處？取動物組織分散成單個細胞傳代培養用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理細胞懸液原代培養分瓶培養加培養液在培養皿或培養瓶內1.取動物組織：部位原因動物胚胎或幼齡動物的組織、器官分化程度低，分裂能力強，易培養2.分散成單個細胞：原因①從動物體取出的成塊組織中，細胞與細胞靠在一起，彼此限制了生長和增殖②利于細胞與培養液充分接觸，更易進行物質交換問題1:常用胰蛋白酶分散細胞，這說明細胞間的物質主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？說明細胞間的物質主要是蛋白質。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當pH大于6時，胃蛋白酶就失去活性，多數動物細胞培養的適宜pH為7.2~7.4，胃蛋白酶在此環境中沒有活性，所以用胃蛋白酶不行。問題2:胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎，為什么？細胞膜的成分中含有蛋白質，而胰蛋白酶能夠水解蛋白質，因此，胰蛋白酶會把細胞消化掉。因此，胰蛋白酶處理的時間不能太長。取動物組織分散成單個細胞傳代培養用機械法或用胰蛋白酶、膠原蛋白酶等處理細胞懸液原代培養分瓶培養加培養液在培養皿或培養瓶內解決懸浮生長貼壁生長(大多數）細胞密度過大、有害代謝物積累、營養物質缺乏等接觸抑制細胞分裂受阻②制成細胞懸液，分瓶培養①收集細胞①原代培養：指動物組織經處理后的初次培養。②傳代培養：分瓶后的細胞培養。③接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞停止分裂增殖的現象。由于細胞之間有接觸抑制的特性，一般的正常細胞并不重疊于其他細胞之上生長，而是單層生長。癌細胞由于無接觸抑制而能夠繼續移動和增殖，導致細胞向三維空間擴展，發生堆積。是否接觸抑制可作為區別正常細胞與癌細胞的標志之一。動物細胞培養動物細胞培養的概念和原理動物細胞培養的條