臨床微生物標本處理及操作流程臨床微生物檢驗流程示意臨床標本留取環節一運送實驗室環節二分析前分析中標本合格？環節三接種培養檢測門診病房診所不合格合格環節四

環節五分析后報告環節六SOP

QCIQ培養基、冰箱溫箱、氣體直截了當檢測儀器設備、試劑EQA標本標本合格判定SOP對每個環節進行控制,構成質量保證體系+內容微生物鑒定標本處理藥敏試驗標本處理血培養腦脊液培養呼吸道標本(痰標本、咽部標本)尿培養生殖道標本培養抽吸物和組織標本的培養(需氧、厭氧培養)糞便培養血培養

BloodCulture腦脊液

CEREBROSPINALFLUID嚴格無菌操作soap腦脊液

CEREBROSPINALFLUID無菌操作,腰椎穿刺采樣最少1mL,最好>5mL打入3個小管中,以第二根小管送檢培養分枝桿菌培養標本需要2mL以上,置于4℃保存即時送檢絕對不能冷藏！呼吸道標本

RespiratoryCultures上呼吸道標本

UpperRespiratoryTractSpecimens下呼吸道標本

LowerRespiratoryTractSpecimens

下呼吸道感染

LowerRespiratoryTractInfections

急性支氣管炎

社區獲得性肺炎

院內獲得性肺炎

免疫妥協患者肺炎下呼吸道標本

LowerRespiratoryTractSpecimen自然咳痰誘導痰

氣管內吸取物支氣管肺泡灌洗液保護性毛刷支氣管灌洗液

肺部組織標本質量帶血痰唾液or誘導痰(?)膿痰粘液樣痰用革蘭氏染色來評估呼吸道標本是否合格痰標本>10鱗狀上皮細胞/每低倍視野=拒收有PMN的痰標本,中性粒細胞多,且鱗狀上皮細胞特別少=接受,進行培養粘液絲細胞內細菌胞內細菌——提示感染柱狀纖毛上皮細胞肺泡巨噬細胞滑石顆粒淀粉樣小體見于遷延長時間的呼吸道疾病彈性纖維庫什曼螺旋體呈鏈排列的革蘭陽性球菌和革蘭陰性球桿菌。缺乏鱗狀上皮細胞提示混合厭氧菌感染您看見多少種形態？幾種細菌的混合形態,缺乏鱗狀上皮細胞=混合厭氧菌感染。假如是呼吸道標本估計是吸入性肺炎。報告臨床醫生“提示吸入性肺炎”

呼吸道標本中未被染色的,有折射的桿菌=抗酸桿菌呈鏈排列的革蘭陽性球菌？或革蘭陽性分枝桿菌？肺中的結節吸出物,不規則“球菌”,分叉,無短鏈,鏈的末端的呈尖狀,都證明是分枝狀的革蘭陽性桿菌,估計是放線菌或諾卡菌(通常來自腦或肺組織的標本)肺炎-可接受的不合格標本評述特別少的鱗狀上皮細胞<10個每低倍視野許多鱗狀上皮>10個/低倍視野能夠在玻片上看到許多鱗狀上皮細胞,說明在采集時受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的污染。特別多的中性粒細胞特別少有或沒有中性粒細胞免疫抑制的病人也會出現中性粒細胞減少中性粒細胞和上皮細胞都特別少的標本需要培養特別多中性粒細胞混合有形態多樣的細菌(革蘭氏陰性桿菌,紡錘形,革蘭氏陽性球菌)吸入性肺炎標本革蘭氏染色的典型形式,培養只會培養出正常菌群,因此革蘭氏染色是用于診斷的方法。許多或中等量的中性粒細胞,以一種形態的細菌為主酵母菌樣,酵母菌是一種特別少引起肺炎的細菌,常由口腔污染成雙革蘭氏陽性球菌,短鏈=肺炎鏈球菌革蘭氏陽性菌成群排列=金黃色葡萄球菌革蘭氏陰性球桿菌(小)=流感嗜血桿菌革蘭氏陰性桿菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他腸道菌革蘭氏陰性雙球菌=卡他莫拉菌許多不著色的有折射的桿狀細菌估計是肺結核,抗酸桿菌不能被革蘭氏染色所染色。呼吸道標本的涂片評估模式尿培養標本

UrineCulture尿道感染每年850萬例尿路感染,90%為女性1/2、5個婦女在一生中會得UTI下行性感染:血流腎臟膀胱(金黃色葡萄球菌,酵母菌,結核分枝桿菌)上行性感染:尿道膀胱腎盂血流用于尿液培養的標本

腎活檢或腎抽吸物(外科)

恥骨上膀胱抽吸物(孕婦,嬰兒,全膀胱)

微導管尿(內部導管和外部導管)-老年人

中段尿,清潔留取——急診成年人

留置導尿管中采集的標本(經常被三種以上細菌污染)尿液標本

采集中段尿時要先用肥皂清洗女性的外陰和男性的外生殖器包括包皮內,然后用清水沖洗

長期留置導尿管的患者應在更換新管時留取尿標本。

做厭氧培養時應恥骨上膀胱穿刺采集尿。尿液運輸方法如不能及時送檢,需冷藏。4小時延遲送檢,須廢棄標本。

過夜培養否自然排尿是接著培養;隨后觀察;發送初步的培養陰性報告24小時后仍不生長則發出最終的生長陰性報告>105CFU/ml1organism一種以上細菌生長多種腸道細菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標本純培養的機會致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的注釋)ID&Suscept、鑒定&藥敏<105CFU/ml)1-2種機會致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的注釋)進行鑒定和藥敏,若數量<105CFU/ml,仍然對估計的致病菌進行操作三種或以上的機會致病菌包括酵母菌多種腸道細菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標本若為腐生葡萄球菌,則處理與其他致病菌相同;其他的凝固酶陰性葡萄球菌則視為污染過夜培養否導管尿是接著培養;隨后觀察;發送初步的培養陰性報告24小時后仍不生長則發出最終的生長陰性報告>104CFU/ml一種以上細菌生長多種腸道細菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標本

純培養的機會致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的注釋)鑒定&藥敏<104CFU/ml1-2種機會致病菌(查閱凝固酶陰性葡萄球菌的以上相同注釋進行鑒定和藥敏,若數量<104CFU/ml,仍然對估計的致病菌進行操作檢出三種或以上的機會致病菌包括酵母菌(病人的首份尿標本顯示如此的培養結果,若重復的尿標本仍然培養出相同的細菌,則需要對菌株進行操作)多種腸道細菌或混雜的皮膚菌叢;重新采集清潔標本、若為腐生葡萄球菌,則處理與其他致病菌相同;其他的凝固酶陰性葡萄球菌則視為污染評價尿培養的標準病人標本特征有意義菌落形成單位/ml(非皮膚污染)無癥狀者清潔留取100,000有癥狀者,不固定的清潔留取10,0001-2種機會致病菌。若多于2種則認為尿液被污染有癥狀,性活躍女性清潔留取100個純菌落腸桿菌科菌男性清潔留取1000個,機會致病菌任何人內置導尿管100,000任意數量機會致病菌任何人通過直截了當導管獲得100任意數量機會致病菌任何人外科手術從腎臟獲得任意數量(肉湯增菌,厭氧菌)任何人經皮穿刺膀胱吸取任意數量(肉湯增菌,厭氧菌)任何人任意標本任何數量金黃色葡萄球菌不同人有爭議任何數量的酵母菌出現如下情況時,如何判斷？尿常規結果尿培養結果估計原因WBC－PRO－計數<105無泌尿系統感染WBC>+PRO>+計數<105重復送檢,檢查取樣和保存條件是否符合要求,通知實驗室為重復檢查。WBC>+PRO>+計數>105培養出一種致病菌預示患者泌尿系統感染。按藥敏結果選擇性用藥。WBC>+PRO>+計數>105培養出大于兩種致病菌患者泌尿系統估計感染,但標本估計被污染,應重復送檢。WBC<++*/－PRO－計數>105培養出大于兩種致病菌標本污染生殖道標本

LowerGenitalTractSpecimens女性生殖道標本送檢宮頸或宮頸內部:淋病奈瑟菌,沙眼衣原體,人乳頭瘤病毒陰道高位拭子:酵母菌,陰道毛滴蟲,細菌性陰道感染肛門或直腸拭子:淋病奈瑟菌,B群鏈球菌(+陰道拭子)女性下生殖道標本采集早發B群鏈球菌病

1%的新生兒因母親定植(10-30%的孕婦)發展為EOD50%病死率

25%的美國女性在L&D期間得到IV預防長期病癥包括:在30%以上的新生兒中產生嚴重精神運動發展障礙Adriaanseetal、NeonatalearlyonsetgroupBstreptococcalinfection:anine-yearretrospectivestudyinatertiarycarehospital、JPerinatMed、1996;24:531–538在孕期35～37周時的普查培養陰道和直腸拭子肉湯過夜增菌接種于血平板上再孵育過夜和鑒定可疑菌落任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好預防分娩時快速檢測敏感性不夠男性生殖道標本送檢

男性的生殖道致病菌與女性絕大部分一致;

尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非淋病奈瑟氏菌引起;

估計并發于生殖器潰瘍;淋病奈瑟氏菌感染

擠壓尿道或直截了當獲取尿道口分泌物;

直截了當涂片

假如培養,須直截了當接種溫暖的篩選性平板,保溫并即刻送微生物室培養。任何不能及時送檢的生殖道標本,都應采納運送培養基采樣保存。禁止冷藏傷口、皮膚、組織

Wound、Skin、Tissue標本采樣和送檢

臨床常常送檢膿液和滲出液的拭子給實驗室做檢查。風險標本不足量拭子干燥拭子吸附細菌,難于釋放到平板培養

盡估計抽吸或將拭子深入傷口,緊貼傷口前沿取樣深部傷口和特別原因造成的傷口,如動物咬傷,應考慮厭氧培養;

發現評述出現鱗狀上皮細胞提示標本采集技術只是關;培養出來的估計是皮膚正常菌群大量的中性粒細胞假如查見細胞內的細菌,則更有意義。大量的中性粒細胞染色多樣染色陽性和陰性,小的細菌混合有厭氧或兼性厭氧菌感染出現少量破碎的中性粒細胞和比較大的面包車樣的染色不定的桿菌估計是梭菌引起的組織壞死,緊急外科手術,產氣莢膜梭菌引起的氣性壞疽特別少有中性粒細胞,然而有其他體細胞患者不能產生足夠的免疫反應或微生物不能趨化中性粒細胞(如球菌)。仍然高度懷疑細菌病因。細胞內微生物細菌感染成塊的小的灰白的染色不規則的陽性成鏈的球菌假如分離自膿腫,提示咽峽炎鏈球菌(米勒鏈球菌)感染。特別細小的革蘭氏陰性桿菌特別是從淋巴結或組織中分離的,估計是生物恐怖試劑(布魯氏桿菌,耶爾森,弗朗西斯)要在風廚中操作。平板用膠條密封在生物安全柜中操作,不能夠嗅標本。組織和抽吸物涂片檢查胃腸道標本(略)微生物鑒定微生物鑒定(1)血平皿上的菌落形態革蘭陽性細菌所有的鏈球菌β-溶血鏈球菌α-溶血鏈球菌與肺炎鏈球菌葡萄球菌屬腸道革蘭陰性桿菌沙門菌屬,志賀菌屬假單胞菌屬嗜血桿菌屬微生物鑒定(2)奈瑟菌屬、莫拉菌屬不動桿菌屬布氏桿菌屬、巴斯德菌屬芽胞桿菌屬產單核李斯特菌酵母菌屬藥敏試驗紙片擴散法藥敏試驗特別藥敏試驗

MRSA

克林霉素耐藥的葡萄球菌

VISA或VRSA

青霉素耐藥的葡萄球菌超廣譜β-內酰胺酶

紙片擴散法-測量抑菌圈(1)使用透射光觀察

:

Staphylococcusspp、葡萄球菌屬

linezolid利奈唑烷

oxacillin苯唑西林

vanycin萬古