食品和化妝品中抗氧化功效的測(cè)定 體外角質(zhì)細(xì)胞SOD酶活法_第1頁(yè)
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3食品和化妝品中抗氧化功效的測(cè)定體外角質(zhì)細(xì)胞SOD酶活性法本文件規(guī)定了角質(zhì)細(xì)胞分泌物SOD活性測(cè)定試驗(yàn)的本文件提供了一種經(jīng)由角質(zhì)細(xì)胞分泌物SOD活性的檢測(cè)方法，可作為化妝品、食品原料關(guān)于抗氧化是構(gòu)成人體表皮的主體細(xì)胞，體內(nèi)呈分層生長(zhǎng)排列，可用于人表皮細(xì)胞5.1細(xì)胞培養(yǎng)涉及試劑及耗材胰蛋白酶/EDTA溶液（0.25%胰酶溶液與0.02mol/LEDTA溶液1:1混勻磷酸鹽緩沖液（PBS5.2檢測(cè)涉及試劑及耗材品溶液：二甲亞砜（dimethylsul46.16.2細(xì)胞培養(yǎng)板（規(guī)格24、12孔、6孔均可）。6.3細(xì)胞培養(yǎng)瓶。7.3恒溫水浴鍋7.5pH計(jì)：精度±0.1。7.6低溫離心機(jī)7.7渦旋振蕩器7.8微孔板酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)，配置450nm或560nm濾光片7.9高壓滅菌器8.1.1除非有穩(wěn)定性數(shù)據(jù)證明儲(chǔ)備液可接受，否則受試物必須在使用前新鮮配置直接使用。8.1.5在使用溶劑前，應(yīng)仔細(xì)評(píng)估它們的特殊性質(zhì)，例如：是否與受試物發(fā)生反應(yīng)，或溶液中的化學(xué)8.1.6可使用渦旋混合/或超聲處理和/或加熱到適當(dāng)溫度等方法輔助溶解，除非這些操作會(huì)影響到受8.2.2受試物濃度應(yīng)通過(guò)細(xì)胞毒性檢測(cè)確定受試物的濃度范圍。例如選擇細(xì)胞活力≥90%，且細(xì)胞形9.1每一次試驗(yàn)都應(yīng)同時(shí)使用陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行試驗(yàn)。推薦陽(yáng)性對(duì)照物，如250μg/mLT25培養(yǎng)瓶胰酶用量1mL，T75培養(yǎng)瓶胰酶用量3mL。510.2接種鋪板開展給藥操作。受試物孔中加入一定濃度受試物的培養(yǎng)基，陰性對(duì)照、空白對(duì)照和裸細(xì)胞孔10.4制備樣品溶液加液量為100μL。處理1-2s后抽打混勻，轉(zhuǎn)移到離心管中。

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