關于紫外可見光譜和熒光光譜2.1紫外-可見光譜的基本原理13.6nm200nm380nm780nm

遠紫外區（真空紫外區）近紫外區可見光區2.1.1紫外-可見（UV-Vis）光譜

紫外光譜(Ultravioletspectroscopy,UV)是吸收光譜.通常說的紫外光譜的波長范圍是200-380nm,常用的紫外光譜儀的測試范圍可擴展到可見光區域,包括400-780nm的波長區域.低于200nm的吸收光譜屬真空紫外光譜,要用專門的真空紫外光譜儀測試.第2頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

當紫外光照射分子時，分子吸收光子能量后受激發而從一個能級躍遷到另一個能級，由于分子的能量是量子化的，所以只能吸收等于分子內兩個能級差的光子。△E=E2-E1=hγ=hc/λ

（E2,E1-–始態和終態的能量h-–普朗克常數γ–-頻率c–-光速λ–-波長）紫外光的波長以300nm代入上式，求出紫外光的能量為：

E=4（ev）分子的能量電子能量1-20ev分子振動能量0.05-1ev轉動能量0.05-1ev

形成較寬的譜帶第3頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.1.2紫外光譜圖的組成

橫坐標表示吸收光的波長,用nm為單位。縱坐標表示吸收光的吸收強度，可以用A(吸光度),T(透射比或透光率或透過率),1-T(吸收率)、ε(吸收系數)中的任何一個來表示。

紫外光譜圖是由橫坐標、縱坐標和吸收曲線組成的。第4頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.1.3電子躍遷

有機物在紫外和可見光區域內電子躍遷的方式一般有:σ→σ*,

n→σ*,

π→π*,

n→π*

飽和烴中的C-C鍵是σ鍵.產生σ→σ*躍遷所需能量大,吸收波長小于150nm的光子,即在真空紫外區有吸收.1)σ→σ*第5頁,共63頁，2024年2月25日，星期天(2)n→σ*

含O,N,S和鹵素等雜原子的飽和烴衍生物可發生此類躍遷,所需能量也較大,吸收波長為150-250nm的光子.C-OH和C-Cl等基團的吸收在真空紫外區域內.C-Br,C-I和C-NH2等基團的吸收在紫外區域內，其吸收峰的吸收系數ε較低，一般ε＜300.第6頁,共63頁，2024年2月25日，星期天(3)π→π*

不飽和烴,共軛烯烴和芳香烴類可發生此類躍遷,吸收波長大多在紫外區(其中孤立雙鍵的λmax小于200nm),吸收峰的吸收系數ε很高.(4)

n→π*

在分子中含有孤對電子的原子和π鍵同時存在時,會發生n→π*躍遷,所需能量小,吸收波長＞200nm,但吸收系數ε很小，一般為10-100.

不同分子結構具有不同電子躍遷方式,有的基團可有幾種躍遷方式。在紫外光譜中主要研究的躍遷是在紫外區域有吸收的π→π*和n→π*兩種。第7頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

除上述4種電子躍遷方式外，在紫外和可見光區還有兩種較持殊的躍遷方式，即眾d-d躍遷和電荷轉移躍遷.(5)

d-d

躍遷

在過渡金屬絡合物溶液中容易產生這種躍遷,其吸收波長一般在可見光區域,有機物和高分子的過渡金屬絡合物都會發生這種躍遷。(6)

電荷轉移躍遷

電荷轉移可以是離子間,離子與分子間,以及分子內的轉移,條件是同時具備電子給體(donor)和電子受體(acceptor).電荷轉移吸收譜帶的強度大,吸收系數一般大于10,000.這種躍遷在聚合物的研究中相當重要。

第8頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第9頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.1.4吸收帶的分類：R吸收帶（n-π

*躍遷）由酮基、--NO2、--NO、--N=N等發色基團引起。特點是波長較長，但吸收較弱。測定這種吸收帶時需要濃溶液。K吸收帶（

π-π

*躍遷）由共軛烯烴和取代芳香化合物引起。特點是波長較短但吸收較強（ε>10000）。

ε值較大的原因：1）電子躍遷后有較大的偶極矩變化；

2）電子在某個能級間躍遷幾率較大。第10頁,共63頁，2024年2月25日，星期天B吸收帶（苯環振動加π-π

*躍遷）該吸收帶是芳環、芳雜環的特征譜帶，吸收強度中等（ε=1000）。特點是在230—270nm，譜帶較寬且含多重峰或精細結構,精細結構是由于振動次能級的影響，當使用極性溶劑時，精細結構常常看不到，只能看到一寬峰。E吸收帶（

π-π

*躍遷）與B吸收帶一樣，是芳香族的特征譜帶，吸收強度大（ε=2000—14000，吸收波長偏向紫外的低波長部分，有的在遠紫外區。如苯的E2和E1分別在184nm（ε=47000）和204nm(ε=7000），苯上有助色團取代時，E2移向近紫外區。第11頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.1.5各類化合物的紫外吸收

飽和有機化合物的紫外吸收

只有部分飽和有機化合物（如C-Br、C-I、C-NH2）的n*躍遷有紫外吸收。(2)不飽和脂肪族有機化合物的紫外吸收

只有具有-共軛和p-共軛的不飽和脂肪族有機化合物可以在近紫外區出現吸收。吸收是由*躍遷和n*躍遷引起的。(3)芳香族有機化合物的紫外吸收

芳香族有機化合物都具有環狀的共軛體系，一般來講，它們都有三個吸收帶。最重要的芳香化合物苯的吸收帶為：

max=184nm(=47000),max=204nm(6900）

max=255nm(230）

第12頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.1.6影響紫外光譜的因素(1)紫外吸收曲線的形狀及影響因素

紫外吸收帶通常是寬帶。影響吸收帶形狀的因素有：被測化合物的結構、測定的狀態、測定的溫度、溶劑的極性。(2)吸收強度及影響因素

能差因素：能差小，躍遷幾率大空間位置因素:處在相同的空間區域躍遷幾率大(3)吸收位置及影響因素幾個基本概念：

生色基：能在某一段光波內產生吸收的基團，稱為這一段波長的生色團或生色基。第13頁,共63頁，2024年2月25日，星期天助色基：當具有非鍵電子的原子或基團連在雙鍵或共軛體系上時，會形成非鍵電子與電子的共軛（p-共軛），從而使電子的活動范圍增大，吸收向長波方向位移，顏色加深，這種效應稱為助色效應。能產生助色效應的原子或原子團稱為助色基。紅移現象：由于取代基或溶劑的影響使最大吸收峰向長波方向移動的現象稱為紅移現象。藍移現象：由于取代基或溶劑的影響使最大吸收峰向短波方向移動的現象稱為藍移現象。增色效應：使值增加的效應稱為增色效應。減色效應：使值減少的效應稱為減色效應。第14頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

max與化學結構的關系該公式為：

max=母體二烯烴（或C=C-C=C）+環內雙烯+環外雙鍵+延伸雙鍵+共軛體系上取代烷基+共軛體系上取代的助色基.

實例一

max=217nm（母體二烯烴）+35nm（環外雙鍵）

+30nm（延伸雙鍵）+55nm(共軛體系上取代烷基）

=287nm應用伍德沃德和費塞爾規則來估算化合物紫外吸收

max的位置。第15頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第16頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第17頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.1.7定量分析朗伯-比爾定律是紫外光譜定量分析的基礎:A=logI0/I=εlc

（I0、I

–入射光和透射光強；ε

-–-摩爾消光系數；l–-試樣的光程長；c–溶質濃度）參數λmax

和εmax

很重要：（1）λmax

表示吸收的最大波長，即最大的吸收峰位置。（2）εmax表示最大吸收的摩爾消光系數。因為ε與A成正比，譜圖可以用ε為縱坐標，因而ε也可以表示吸收峰的強度。一般地，ε>104

為強吸收（ε不超過105）

ε=103----104為中等吸收ε<103為弱吸收，由于這種躍遷的幾率很小，稱為禁戒躍遷。第18頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第19頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共63頁，2024年2月25日，星期天P.Shen,S.T.Tan,etal,

Macromolecules,2008,41,5716-5722第21頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第22頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第23頁,共63頁，2024年2月25日，星期天Y.Liu,….,S.T.Tan,

Chem.Commun.2009,2499第24頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第25頁,共63頁，2024年2月25日，星期天H.Chen,…..,S.Tan,JournalofPhysicsChemistryC,2010,114,3280-3286第26頁,共63頁，2024年2月25日，星期天鍍膜器件室第27頁,共63頁，2024年2月25日，星期天光伏性能測試室第28頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.2熒光光譜2.2.1熒光光譜法基本原理

(1)

熒光(Fluoresence)和磷光(Phosphoresence)

熒光和磷光同屬發光光譜法，它們與分子吸收分光光度法緊密相關。分子在吸收輻射能而被激發到較高電子能級后，它們為了返回基態而釋放出能量。熒光是分子在吸收輻射之后立即(在10-8s數量級)發射的光，而磷光則是在吸收能量后延遲釋放的光。兩者間的區別是；熒光是由單態—單態的躍遷產生的，而磷光所涉及的是三線態—單態躍遷。

熒光光譜具有很高的靈敏度。樣品中含有1~100ppm生色團即可產生足夠強的檢測信號。采用多種不同的表征方法，使熒光發光方法具有多功能性，并可獲得分子水平的信息。第29頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

大多數有機分子的電子態可以歸納為兩大類：單態和三重態。處于單態時，分子內所有電子的自旋是配對的；處在三重態時，一組電子自旋是不成對的。第30頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

分子在吸收適當的輻射能時，它從基態內的一個振動能級上升到某一受激電子能級(通常是第一受激單態，S1)中的某一振動能級。吸收步驟發生在10-15S以內。在緊接吸收之后處于受激單態較高振動能級中的分子，通過碰撞而把過多的能量轉移給其它分子，以及將過多的能量分配給受激分子內振動或旋轉的其它可能模式，從而很快回到受激態的最低振動能級。當受激分子恢復到基態時，產生自發輻射，即熒光現象。這一輻射過程(S1-S0)的壽命很短，約10-8s，所以在許多分子里它能有效地與其它轉移激發能的過程相競爭。如果單態的勢能曲線和三重態的勢能曲線交叉，某些單態受激分子可以通過系統間的交叉而轉到最低三重態，再從這里回到基態的某一振動級，便發射磷光。磷光的發射必須改變自旋狀態，因此這一發射過程的速度比熒光慢得多，可達10-2~100s。熒光和磷光的發射波長長于激發波長，除了X射線熒光外，大多熒光法的工作波長在200~800nm之間。第31頁,共63頁，2024年2月25日，星期天(2)激發(Excitation,Ex)光譜熒光物質的激發光譜是指不同激發波長的輻射引起物質發射某一波長熒光的相對效率。也就是，固定發射波長，改變激發波長，所得的熒光強度與激發波長的關系曲線為激發光譜。理論上最大激發波長與最大吸收波長是一致的，由激發光諧可選擇最佳激發波長。(3)發射(Emission,Em)光譜

使激發光的波長和強度保持不變，讓熒光物質所產生的熒光通過發射單色器后照射到檢測器上，掃描發射單色器并檢測各種波長下相應的熒光強度，然后記錄熒光強度對發射波長.第32頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.2.2熒光光譜的測量

熒光光譜儀由光源、單色器、記錄系統等組成。并具有兩個單色器，一個為激發單色器，另一個為發射單色器。下圖為這類儀器光學系統示意圖。第33頁,共63頁，2024年2月25日，星期天PELS55LuminescenceSpectrometer第34頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.2.3溶液的熒光強度與濃度的關系

(1)熒光的壽命熒光分子的平均壽命()定義：當不存在進一步的激發時，處于激發態的分子數目衰減到初始值的1／e所經歷的時間，用下式表示:

式中，kf為熒光發射的速率常數；為各種非輻射去活化過程的速率常數總和。熒光強度的衰變一般遵從如下速率方程式:

式中F0

和Ft分別表示t=0和t=t時的熒光強度。作lnFt-t的關系曲線,從該曲線的斜率可求出熒光壽命.

沒有非輻射去活化過程存在時的熒光壽命為內在的壽命,用表示:

一個近似的經驗規則是:

式中為最大吸收波長下的摩爾吸光系數。第35頁,共63頁，2024年2月25日，星期天(二)熒光量子產率

熒光量子產率的定義：熒光物質吸光后所發射的熒光的光子數與所吸收的激發光的光子數之比值，即:

現代最常用的測量方法是相對測量法得到相對熒光量子產率。在同一設備和激發光強度下測定已知量子產率標準溶液(以s腳注)，和另一未知量子產率溶液(以x腳注)的校正熒光發射光譜面積D時，有以下的關系：式中，A為吸光度；n為溶液折射率；D為校正熒光發射光譜積分面積。熒光化合物的熒光量子產率的數值常處于0.1—1之間。熒光量子產率與熒光壽命之間的關系為:

第36頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.2.4熒光與分子結構的關系

在熒光分析中，分析對象本身必須具有熒光特性，或者使其與相應的熒光試劑反應生成具有熒光特征的物質。分子的熒光性主要取決于它自身的能量狀態，即該分子的化學結構。熒光強度與分于結構關系一般具有如下普遍規律。

1.具有共軛π

鍵的化合物化合物共軛體系越大，能量越低，離域π

電子越容易激發，熒光越易產生。大部分物質具有芳環或雜環，芳環越大，其熒光峰越移向長波方向，熒光強度也越強。

2.具有剛性平面結構的化合物熒光效率高的熒光體，其分子多是平面構型且具有一定的剛性，例如偶氮苯不發熒光雜氮菲會發熒光。有機配位劑與金屬離子組成配合構成取代基之間形成氫鍵，加強了分子的剛性，使熒光強度增強。

第37頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第38頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3．取代基的影響

(1)給電子取代基當化合物中含有-NH2、-NHR、-NR2、-0H、-OR、-CN等給電子基團時，這些基團上的n電子可通過共軛效應(十E)向芳環離域，使共軛體系中電子云密度增大，分子基態激發能降低，故能增強分子的熒光。

(2)吸電子取代基當化合物中含有-CO-、-CHO、-COOH、-NO2和重氮類等基團時，由于吸電子基的誘導效應(-I)，使共扼體系中n電子云的密度降低，削弱了分子的熒光.(3)取代基的位置鄰位及對位取代基對熒光影響較大，間位取代基影響不大，兩種性質不同的取代基共存時，其中一個取代基起主導作用。(4)重原子效應芳烴取代上鹵素(Cl、Br和I)等其他的重原子之后。分子內的共軛效應(十E)小于誘導效應(-I)，使共軛體系的電子云密度下降。分子熒光強度隨重原子的原子量增加而減弱，而磷光通常相應地增強，這種效應稱為重原子效應。因為重原子的存在，使得熒光體中電子自旋軌道偶合作用加強，S1—T1的系間交叉增加，導致熒光強度減弱，磷光強度增強。第39頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

4．鈾和稀土元素的鹽類參加吸光的是4f和5f內層電子,與外部沒有能量交換,無論固相還是液相,4f和5f電子躍遷所特有的熒光.5．配位化合物的熒光金屬離子與有機配位體形成配位化合物的發光能力與金屬離子以及有機配位體的結構有很大關系。

(1)二元配合物金屬離子主要有兩種類型。第一類金屬離子的外電子層具有與惰性氣體相同的結構，為反磁性離子，這種金屬離子與含有芳基的有機配位體形成配合物時一般會發較強的熒光。配合物的熒光強度隨金屬離子的原子量增加而減弱(也稱重原子效應)，吸收峰和發射峰也相應向長波長方向移動。金屬離子相當于一惰性原子，與有機配位體的不同部位形成一附加環，同時加強配位體的剛性平面結構。這類配合物由配位體L吸光和發光，稱L*一L發光。

第40頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

第二類金屬離子具有惰性氣體的外層電子結構，其次外層含有未充滿電子的f層，金屬離子會產生f*一f發光躍遷。激發的有機配位體的能量可能轉移給金屬離子M，產生金屬離子激發態M*，由激發態金屬離子M*返回基態，發出特征的線狀熒光，稱M*一M發光。其熒光強度比該金屬純無機離子的熒光強得多，金屬離子得到敏化，部分稀土元素屬于這類。(2)三元配合物

三元配合物的發光行為與上述的二元配合物相似，即可分為L*-L型發光和M*-M型發光。可是在某些情況下，三元配合物可大大提高熒光分析法的靈敏度和選擇性。目前有很多元素采用三元配合物的熒光分折。第41頁,共63頁，2024年2月25日，星期天5、環境因素對熒光光強度的影響雖然分子的熒光性取決于分子的化學結構，但溶液中環境因素對分子熒光能產生強烈的影響。(1)溶劑的影響有人認為溶劑對于熒光強度的影響主要決定于溶劑的分子結構，而不在于溶劑的極性。溶質、溶劑分子問的相互作用，即偶極子向的靜電作用、氫鍵、電荷移動等因素改變了熒光的量子產率，要對溶劑的影響做出恰當解釋是不容易的。(2)溫度的影響在一般情況下，隨著熒光物質溫度的升高而熒光強度降低。其原因在于高溫下分子碰撞失去能量以及易于發生內部轉體和系間交叉，可是也有例外。在熒光測定時需要使試樣保持恒溫。(3)pH值一般情況下度具有很大影響,溶液的pH值對熒光性有機化合物和熒光性螯合物的熒光光譜以及熒光強度進行定量分析時必須選擇最佳pH范圍。第42頁,共63頁，2024年2月25日，星期天6.溶液熒光猝滅

熒光猝滅一般指任何可使某種給定熒光物質的熒光強度下降的作用。狹義地說，熒光猝滅指的是熒光物質分于與溶劑分子或溶質分子之間所發生的導致熒光強度下降的物理或化學作用過程。與熒光物質分子發生相互作用而引起熒光強度下降的物質，稱為熒光猝滅劑。熒光猝滅過程分為兩種形式：第一種：基態熒光性分子P與猝滅性分子Q之間生成配位化合物PQ，從而使熒光物質喪失熒光性。由這種機理引起的猝滅是靜態猝滅:

第二種：激發態熒光性分子P*與猝滅性分子Q碰撞而失去能量,稱為動態粹滅：第43頁,共63頁，2024年2月25日，星期天(1)濃度猝滅對于氣態或液態的純熒光物質，其濃度達到某一程度之后熒光強度開始降低，這種現象叫濃度猝滅。濃度猝滅有兩個原因:一是由激發態分子與基態分子碰撞造成的動態猝滅；另一原因是基態分子締合造成的靜態猝滅。也有負的濃度猝滅現象。(2)氧分子猝滅很多的熒光物質，特別是芳香族碳氫化合物的熒光會被氧猝滅。在溶液中氧分子的猝滅作用大小因熒光分子的結構及溶劑介電常數而異。沒有取代基的芳香族化合物，氧分子的猝滅作用大；有取代基的芳香族及雜環化合物，氧分子猝滅作用小。有機溶劑中猝滅作用大，水溶液中猝滅作用小。對氧分子猝滅作用的一種解釋為，三重態的氧分子和激發單重態的熒光分子碰撞形成了激發單重態的氧分子和三重態的熒光分子。還有一種解釋為順磁性的氧分子增加了自旋軌道的相互作用，助長了系間交叉(S1-T1,T1-S0)的速度。

第44頁,共63頁，2024年2月25日，星期天(3)順磁性離子猝滅順磁性金屬離子，特別是3d軌道未充滿電子的過渡金屬離子，如Fe(III)，Ni(II)，Cr(III)，Cu(II)，Co(II)等對熒光性分子顯示很大的猝滅作用。一般解釋為：熒光性分子的π電子與順磁性離子的軌道相互作用形成特殊的能級，或者是由于順磁性離子的有色吸收將熒光分子的能量轉化為熱能，增加了系統間交叉的速度。第45頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.2.6熒光光譜分析及其應用

1.熒光定量分析

進行常規的熒光定量分析時，熒光強度必須與測定成份的濃度成正比，并具有良好的重現性，一般采用工作曲線法。首先用一穩定的熒光物質(熒光塑料板或某種熒光基準物質如硫酸奎寧的溶液)，并設定儀器的工作條件．即校正儀器讀數，使不同時間測得的工作曲線先后一致。然后測定已知濃度的標準溶液系列的熒光強度，以熒光強度對標準溶液濃度繪制工作曲線。最后由測得的試樣溶液的熒光強度對照工作曲線，求出分析物質的濃度。定量分析中應使用工作曲線的直線部分。熒光分析中，熒光強度必須真實地反映待測熒光物質的濃度，應當扣除溶劑和其他熒光雜質的熒光強度，即扣除空白溶液的值。根據樣品實際情況，可根據溶劑空白、試劑空白或僅猝滅了分析物質熒光后的試樣溶液空白。第46頁,共63頁，2024年2月25日，星期天2.熒光探針

以熒光標記物或熒光探針注入生物體內,可以檢測生物體內的生物或化學反應.對熒光探針的要求是：①有高的熒光強度(包括激發的吸收和量子產率)；①熒光信號與背景應有明顯的區別，探針試劑的熒光發射波長應大于500nm，Stockes位移應大于50nm；③其與生物體的結合不能對生物體有不利的影響；④易溶于水，⑤形成的結合物在貯存或測定時穩定性好。作為熒光探針的鑭系離子螯合物，已使熒光免疫分析的熒光探針由單純的有機分子標記物發展到金屬離子螯合物，由于鑭系離子螯合物高強度的熒光發射及熒光壽命長的特點，已建立了時間分辨熒光免疫分析法(FIA).

在FIA中己廣泛應用異硫氰酸熒光素及其衍生物、羅丹明類衍生物等作為標記物。另外一些生物大分子，如藻膽蛋白、卟啉類和葉綠素等，由于其stokes位移大，有利于排除干擾，也作為探針標記物。一些有機熒光探針的結構及分析用途見?分析化學手冊第三分冊?表23—2。第47頁,共63頁，2024年2月25日，星期天Figure9.FluorescentopticalmicroscopicimageofelectrospunPLLAfiberscontaining50wt%ZnSequantumdots(200×magnification).Figure10.Fluorescenceemissionspectraof(a)ZnSequantumdotsfromCH2Cl2solution,(b)electrospunPLLAfiberscontaining10wt%ZnSe,(c)electrospunPSfiberscontaining10wt%ZnSe.SSchlecht,ST

Tan,JH.Wendorff,ChemistryofMaterials2005,17(4),809第48頁,共63頁，2024年2月25日，星期天Figure1(a)UV-Visandfluorescenceemissionspectraand(b)FluorescentopticalmicroscopicimageofelectrospunPHEMAfiberscontaining30wt%Fe3O4nanoparticlesand20wt%albuminwithdog-fluoresceinisothiocyanate.(a)(b)ST

Tan,JH.Wendorff,ChemPhysChem,2005,6,1461第49頁,共63頁，2024年2月25日，星期天3.無機化合物的熒光分析無機化合物的直接熒光測定，以鈾和稀土元素分析為主。絕大多數無機化合物都是與有機試劑發生反應轉變為熒光物質而后進行測定(即熒光呈現法)，利用的反應類型有形成配合物、置換反應、氧化還原反應、催化反應和酶反應等。基于無機化合物對熒光試劑或熒光配合物的熒光猝滅作用的方法(即熒光猝滅法)測定無機物，約占全部文獻的五分之一，其中也不乏一些高靈敏度的方法，但其線性范圍和選擇性不如熒光呈現法。?分析化學手冊第三分冊?表23—5(共32頁)匯總了近十幾年國內外各種無機離子或化合物的熒光分析方法。第50頁,共63頁，2024年2月25日，星期天4.有機化合物的熒光分析熒光法可以分析痕量和超痕量的有機物。在各種環境樣品—大氣、水、土壤、動植物材料、食品和飼料中，熒光法用來測定其雜質，也還應用于藥物、農藥、毒素、胺類、氨基酸以及其他生物樣品的分析。

一般的熒光分析法的選擇性不夠好，這是實際應用熒光法的主要障礙。但熒光法與色譜法[包括紙色譜、柱色譜、薄層色譜、高效薄層色譜、液相色譜、離子交換色譜、高效液相色譜(HPLC)、氣固體色譜、氣液色譜等]、萃取、電泳、沉淀、吸附等其他分離手段相結合后，使熒光法的應用有了新的極大可能。熒光法不僅適用于本身具有熒光的物質的分析，還有不少試劑能與許多有機物形成熒光衍生物。進一步再利用環化、縮合、氧化、還原、與酸堿作用、加熱和光照等反應，能分析許多自身沒有熒光的有機物。一些有機化合物的熒光分析方法匯總在?分析化學手冊第三分冊?表23—14(共8頁