關于植物化學成分分離法對溶劑的要求：

a.對所需成分溶解度大，對雜質溶解度小，或反之；

b.不與所需成分起化學反應，即使反應也是可逆的；

c.經濟易得，并具有一定安全性；

d.沸點適中，便于回收反復使用。第2頁,共43頁，2024年2月25日，星期天常用提取溶劑分二大類：惰性溶劑——水、乙醇、甲醇、苯、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等反應溶劑——稀酸、稀堿的水溶液或醇溶液第3頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

二、提取方法

a.浸漬法

b.滲漉法

c.煎煮法

d.回流提取法

e.連續回流提取法第4頁,共43頁，2024年2月25日，星期天采用幾種不同極性的溶劑分步提取

常用系統：己烷—乙醚—甲醇—水己烷—二氯甲烷—甲醇—水提供生物試驗樣品第5頁,共43頁，2024年2月25日，星期天單一溶劑提取水：

a.胺型生物堿、甙類、有機酸可直接用水提取；

b.雜質較多，分離困難——加戊醇、辛醇;薄膜濃縮；

c.易發霉發酵——加甲苯、甲醛、氯仿等防腐劑。有機溶劑（最常用乙醇）：

a.冷提雜質較少；

b.熱提效率高，但雜質亦較多。第6頁,共43頁，2024年2月25日，星期天多種溶劑處理利用所含成分在某種溶劑中溶解度的差異而達到分離的目的。

例：苦楝皮磨粉苯液醇液油脂類川楝素

苯濃縮石油醚溶解結晶60%乙醇減壓濃縮氯仿提取第7頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第二節兩相溶劑萃取法混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中，由于分配系數不同而達到分離的目的。用于脂溶性成分和水溶性成分的分離。分離生物堿時常用pH梯度萃取。第8頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

例：從蛔蒿中提取驅蛔有效成分山道年第9頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第三節吸附法吸附法的目的：吸附除去雜質（鞣質色素）吸附所需物質常用吸附劑：氧化鋁、氧化鎂、酸性白土、活性炭第10頁,共43頁，2024年2月25日，星期天例：羊角拗甙的提取羊角拗種子石油醚脫脂95%乙醇醇提液蒸餾至干水溶液熱水溶解濾液粗強心甙粗甙乙酸鉛除雜質脫鉛硫酸銨濾液乙醚氧化鎂拌勻乙醇丙酮回流總甙第11頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第四節沉淀法利用某些成分與某些試劑產生沉淀的性質而得到分離或除去雜質的方法。對所需成分來說，沉淀反應是可逆的。最常用的是鉛鹽法。脫鉛方法可通硫化氫氣體，也可用硫酸、磷酸、硫酸鈉、磷酸鈉等。第12頁,共43頁，2024年2月25日，星期天幾種實驗室常用的沉淀劑常用的沉淀劑化合物中性乙酸鉛酸性，鄰位酚羥基化合物，有機酸，蛋白質，黏液質，鞣質，樹脂，酸性皂甙，部分黃酮甙堿式乙酸鉛上述物質，某些甙類，生物堿等堿性物質明礬黃芩甙雷氏銨鹽生物堿碘化鉀季胺生物堿咖啡堿、明膠、蛋白鞣質膽固醇皂甙苦味酸、苦酮酸生物堿氯化鈣、石灰有機酸第13頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第五節透析法利用小分子物質在溶液中可通過半透膜，而大分子物質不能通過半透膜的性質達到分離的方法。

電透析示意圖第14頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第六節升華法凡具有升華性質的化合物，均可用此法進行純化。此法簡單易行，但往往不完全，常伴有分解現象，產率低。例：樟木中的樟腦、茶葉中的咖啡堿、植物中的苯甲酸等成分的純化。第15頁,共43頁，2024年2月25日，星期天

第七節結晶和重結晶

結晶的目的在于進一步分離純化，便于進行化學鑒定及結構測定工作。純化合物的結晶有一定的熔點和結晶學特征，有利于化合物性質的判斷。初析出的結晶總帶有一些雜質，需反復結晶，才能得到純粹的單一晶體。第16頁,共43頁，2024年2月25日，星期天一、結晶的條件需要結晶的溶液往往呈過飽和狀態。通常是在加熱的情況下，使化合物溶解過濾除去不溶性雜質，濃縮，放冷，析出。一般放置對形成結晶來說是一個重要條件。濃度適中，逐漸降溫，有可能析出純度較高的結晶。第17頁,共43頁，2024年2月25日，星期天二、結晶溶劑的選擇對所需成分的溶解度隨溫度的不同而有顯著的差別；不發生化學反應；其沸點低于化合物的熔點。第18頁,共43頁，2024年2月25日，星期天三、制備結晶的方法結晶形成的二個步驟：晶核的形成結晶的增長化合物結晶溶解濃縮過濾靜置第19頁,共43頁，2024年2月25日，星期天如無結晶析出，可采取：

a.松動瓶塞；

b.加入少量晶種；

c.用玻璃棒摩擦玻璃容器內壁；

d.用干冰降溫；

e.加有機可溶性鹽類鹽析。第20頁,共43頁，2024年2月25日，星期天四、不易結晶或非結晶體的處理若是由于純度不夠，夾雜不純物引起的，需要進一步分離純化。若是本身的性質，往往需要制備結晶性的衍生物或鹽，然后用化學方法處理回復到原來的化合物。第21頁,共43頁，2024年2月25日，星期天五、結晶純度的判斷結晶形狀：針狀、柱狀、棱柱狀、板狀、片狀、方晶、粒狀、簇狀、多邊形棱柱狀初步鑒定的依據：形狀、色澤、熔點薄層層析氣相層析高效液相層析波譜技術第22頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第八節層析分離方法一、基本原理

利用不同的物質在兩相（固定相和移動相）中不同的平衡分配系數來進行分離。

k=CsCm固定相中的濃度移動相中的濃度第23頁,共43頁，2024年2月25日，星期天二、層析法的分類根據兩相所處的狀態來劃分：液相層析——液-固層析、液-液層析氣相層析——氣-固層析、氣-液層析

根據層析過程的機理來劃分：吸附層析——液固吸附層析、氣固吸附層析分配層析——液液分配層析、氣液分配層析排阻層析——液固排阻層析、氣固排阻層析離子交換層析——有機離子交換樹脂、纖維素及無機高分子交換劑第24頁,共43頁，2024年2月25日，星期天三、常用的層析方法

層析填料是決定柱效的主要因素。填料應具有的性能是不溶于所使用的流動相中，不使欲分離的物質破壞或分解，惰性大，可逆性強，吸附容量大，同時顆粒直徑范圍要窄。1.硅膠層析

層析硅膠為多孔性物質，可用通式SiO2.xH2O表示。其表面有很多游離(Ⅰ)、鍵合(Ⅱ)和鍵合—活性(Ⅲ)狀態的硅醇基，通過氫鍵與極性或不飽和分子相互作用，同時能吸附多量的水分。第25頁,共43頁，2024年2月25日，星期天硅膠含水量與活性的比較

活性加入水量（%）

Ⅰ0Ⅱ5Ⅲ15Ⅳ25Ⅴ38

硅膠的吸附性能取決于硅膠中硅醇基的數目，其次是含水量，它隨著水分的增加而降低。第26頁,共43頁，2024年2月25日，星期天層析柱的制備與加樣

濕法裝柱；干法裝柱。樣品溶于移動相，柱頂加入；樣品溶于適當溶劑，拌硅膠，待溶劑揮發，加移動相上柱。應用范圍廣，適用于非極性和極性化合物。層析溶劑的選擇

根據物質的極性采用相應的極性溶劑來洗脫。硅膠的再生

乙醇或甲醇洗滌，除去溶劑，烘干活化處理。第27頁,共43頁，2024年2月25日，星期天2、氧化鋁層析最常用吸附劑之一，微堿性。氧化鋁含水量與活性的關系

活性加入水量（%）

Ⅰ0Ⅱ3Ⅲ6Ⅳ10Ⅴ15第28頁,共43頁，2024年2月25日，星期天洗脫用溶劑

極性溶劑洗脫能力大。氧化鋁再生

甲醇、稀乙酸、稀氫氧化鈉、水依次洗滌，200℃活化。第29頁,共43頁，2024年2月25日，星期天3、活性炭層析分離水溶性物質的主要方法之一。吸附作用在水溶液中最強，在有機溶劑中較弱。對物質的吸附力：芳香族化合物＞脂肪族化合物大分子化合物＞小分子化合物極性基團多的化合物＞極性基團少的化合物第30頁,共43頁，2024年2月25日，星期天4、離子交換層析影響離子交換的有關因素

a.

溶液的酸堿度

b.對交換離子的選擇性

c.被交換物質在溶液中的濃度

d.溫度的影響

e.溶劑的影響第31頁,共43頁，2024年2月25日，星期天第32頁,共43頁，2024年2月25日，星期天5、大孔吸附樹脂層析不含交換基團的具有大孔結構的高分子吸附劑，也是一種親脂性物質。吸附力主要依靠分子中的親脂鍵、偶極離子及氫鍵作用。解吸容易，吸附容量大。第33頁,共43頁，2024年2月25日，星期天6、凝膠層析

固定相——凝膠，具有許多孔隙的網狀結構的固體，有分子篩的作用。親水性凝膠——葡聚糖凝膠。

疏水性凝膠——在交聯葡聚糖分子上引如一個基團增大其親脂性

第34頁,共43頁，2024年2月25日，星期天7、聚酰胺層析分子中含豐富的酰胺基，可與酚、酸、醌、硝基化合物等形成氫鍵結合而被吸附，與不能形成氫鍵的化合物分離。化合物分子中酚羥基數目越多，吸附力越強；芳香核、共軛雙鍵多的吸附力也大。易形成分子內氫鍵的化合物，會使化合物的吸附力減弱。第35頁,共43頁，2024年2月25日，星期天8、快速層析(加壓柱層析)硅膠顆粒400—230篩目干法裝柱第36頁,共43頁，2024年2月25日，星期天9、離心液相層析優點:a.分離周期短

b.操作簡便

離心液相層析分離程序第37頁,共43頁，2024年2月25日，星期天10、