中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準SN/T2309—2009進出口乳及乳制品中四環(huán)素類藥物殘留檢測方法放射受體分析法2009-07-07發(fā)布2010-01-16實施玉家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢瘦總局I本標準的附錄A為資料性附錄。1進出口乳及乳制品中四環(huán)素類藥物殘留檢測方法放射受體分析法本標準規(guī)定了進出口乳及乳制品中四環(huán)素類藥物殘留測定的制樣和放射受體分析方法。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3試樣制備和保存干粉樣品室溫密封保存，液體樣品0℃~4℃冷藏可保存5d,—15℃以下冷凍可保存2個月。4檢測方法4.1方法提要測定的基礎(chǔ)是競爭性受體免疫反應(yīng)。當樣品中含有四環(huán)素類抗生素時，樣品中四環(huán)素類抗生素殘留物與受體上的結(jié)合位點結(jié)合，從而阻止了[3H]標記的四環(huán)素與受體試劑位點的結(jié)合。樣品中的四環(huán)品中[3H]含量的cpm值(countperminute,即每分鐘脈沖數(shù))越低。樣品中四環(huán)素類抗生素殘留量與4.2.1牛奶中的四環(huán)素類抗生素CharmⅡ放射免疫試劑盒(MRLsCompetitiveAssay)1):藥片標識為T。4.2.3土霉素標準品，1)CharmⅡ牛奶中四環(huán)素類抗生素競爭性受體結(jié)合測試試劑盒是由Charm公司提供產(chǎn)品的商品名稱。給出這一信息是為了方便本標準的使用者，并不表示對該產(chǎn)品的認可。如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等效產(chǎn)品。24.3.5恒溫加熱器：80℃±2℃,35℃±1℃。5.1陰性對照和陽性對照溶液的準備…置在0℃~4℃冰浴中待測。30μg/L的土霉素。放置在0℃-4℃冰浴中待測5.2.1液態(tài)奶：取20mL牛奶|3400r/min離心5min,除去上層脂肪層。冰浴至0℃~4℃待測。k樣品，加水28mL溶解。冰浴至g℃~4℃待測。5.3.3將5mL牛奶樣品，或的性對照溶液(5.1.1)或阻性對照溶液(5.1.2)加入試管中，在渦旋混合器上振蕩10s,使之混勻。5.3.4加[3H]標記的四環(huán)素藥片(4.2.1.26,在渦旋混合器上振蕩h?s,使之混勻。5.3.5置于恒溫加熱器中35℃士2℃保溫3min。5.4控制點的確定5.4.2按方法5.3測定6個非重復的陽性對照溶液(5.1.2)(含土霉素30μg/kg)的計數(shù)值，求出平均值乘上系數(shù)1.23,即為篩選水平的控制點。3樣品抗生素鮮奶/(pg/kg)奶粉、乳清粉/(μg/kg)四環(huán)素土霉素金霉素強力霉素4(資料性附錄)儀器和試劑的日常監(jiān)控A.1.1每一批新的試劑需測定零基準平均值，測定三次陰性對照液cpm值，其平均值即為零基準平均值。當遇到樣品“初篩懷疑陽性”時，通過測定陰性對照液(5.1.1)和陽性對照液(5.1.2)cpm值與零基準平均值的cpm值比較，可確定試劑和液體閃爍計數(shù)儀是否正常。A.1.1.1正常情況下，陰性對照測定值一般在零基準平均值上下波動，幅度約±20%。A.1.1.2正常情況下，陽性對照測定值小于控制點。A.1.1.3如果A.1.1.1或A.1.1.2條件不符，應(yīng)A.1.2新購試劑應(yīng)首先檢測陽性對照和陰性對照的比值，若比值小于0.7,表明試劑有效，可以進行檢測；若比值大于0.7,表明試劑失效。取空的專用試管放入液體閃爍計數(shù)儀計數(shù)，計數(shù)值需小于50,否則需調(diào)零。如測得的計數(shù)值偏大，可能由液體閃爍計數(shù)儀有大量靜電存在所引起，可用濕抹布將試管外壁濕潤后放入液體閃爍計數(shù)儀進A.2.2[3H]通道校準A.3陰性樣品的監(jiān)控A.4.1測試的環(huán)境溫度為4℃~35℃,濕度：<70%。A.4.2每次同時運行12個樣品最佳。5ThisstandardwasproposedbyandwasunderchargeofNationalRegulatoryCommissionforCertifi-cationandAccreditation.6DeterminationoftetracyclinesresiduesinmilkanddiaryRadio-receptormethodThisstandardspecifiesthemethodofsamplepreparationanddetefminationoftetracyclinesantibiot-standardisapplicabletothedeterminationofTetracyclituteprovisionsofthisstandard.Fordatedreferences,Subseqferredtoapplies.3Samplepreparationsamples.Keepthepreparedsamplesintotwocleancontainers,sealandlabel.Inthecourseofsample7thesamplesbindtothebinding-sitesofreceptorandp4.2.1Charmlltestkitfordetectionoftetracyclinesinmilk”:t4.2.1.1Thereceptor4.2.2Negativecontrolmjkpowdel,Milkcertifiedtoteantini4.2.3Oxytetracyclinestandard.4.2.4Scintillationfluid.alentproductsmaybeusedforthisstandard,iftheyhavethesameeffect.84.3.3Centrifuger:≥3400r/min.4.3.4Vortexmixer.powder(4.2.2),Coolto0℃~4℃beforeuse.coolto0℃~4℃beforeuse.3400r/min,discardtheupperfatlayer.Chillwithiceto0℃~4℃foruse.dissolvewith28mLwater.Chillwithiceto0℃~4℃foruse.tube.9thepellet.5.3.9Add3.0mLScintillationfluid(4.2.4)tothetesttube,capandmixwell.plethreefoldusingthenegativecontrolsolution(5.1.1)asthediluent,retestaccordingtostep5.3,thencomparecpmofdilutedsamplewithcontrolpoint.tedrange(SeeannexA).IfDrugsSampleMilk/(rg/kg)MilkPowder,wheyPowder/(μg/kg)TetracyclineOxytetracyclineChlortetracyclineDoxycycline-200Undernormalconditions,thenegativecontrofthezerocontrolaverage.trolpoint.liquidscintillationcounterinseveraltimestillreac