抗體偶聯藥物非臨床研究技術指導原則（征求意見稿）2022年7月目錄一、前言 3二、基本原則 3三、非臨床研究 4（一）藥理學 4（二）安全藥理學 5（三）藥代動力學 5（四）毒理學 61、一般毒理學 72、遺傳毒性 93、生殖毒性 94、致癌性 105、免疫原性/免疫毒性 106、光安全性 117、組織交叉反應 118、制劑安全性 119、毒代動力學 12三、支持臨床試驗和上市的非臨床考慮 121、人體首次用藥的起始劑量 122、支持臨床試驗和上市的非臨床研究 13四、參考文獻 14一、前言本指導原則適用的抗體偶聯藥物（Antibody-DrugConjugate，ADC）是指通過連接子將小分子化合物偶聯至靶向性抗體或抗體片段上的一類生物技術藥物，旨在增強藥物靶向性和穩定性、減少臨床毒副反應、提高治療指數，臨床上主要應用于抗腫瘤或者其他疾病的靶向治療。ADC結構組成包括抗體或抗體片段、連接子和小分子化合物。其中，抗體通常選用可內吞的抗體，主要作用是靶向性介導抗體依賴性細胞吞噬；連接子具有一定的循環穩定性，可以支持藥物在到達靶器官前不被降解或者少量降解，進入細胞后能夠快速釋放活性小分子化合物；小分子化合物能夠對靶細胞產生藥效作用。因此，ADC是生物大分子和化學小分子的結合體，具有獨特的作用機制和代謝動力學特征。上述概念范疇以外的抗體偶聯藥物，如抗體偶聯放射性藥物，多肽偶聯藥物也可參考本指導原則。本指導原則的起草基于當前的科學認知，隨著科學研究的進展，相關內容將不斷完善和適時更新。二、基本原則本指導原則的目的是為合理開展ADC非臨床研究提供幫助和指導，以獲取科學規范的試驗數據支持開展后續臨床試驗和批準上市。本指導原則描述了其他相關指導原則未涵蓋的特殊情況。ADC是生物大分子與化學小分子的結合體，結構組成和作用特征復雜，其非臨床研究應遵循創新藥物研發的一般原則，同時綜合考慮藥物中抗體、連接子和小分子化合物的特征、適應癥、給藥途徑和給藥方案等多種因素采用具體問題具體分析的評價策略。ADC確證性非臨床研究所用受試物應能充分代表臨床試驗擬用樣品；非臨床安全性研究應遵循《藥物非臨床研究質量管理規范》。三、非臨床研究（一）藥理學通常在臨床試驗開始之前，應完成藥物作用機制、臨床試驗方案或適應癥相關藥理作用的初步研究。旨在指導臨床用藥方案和劑量遞增計劃，有助于選擇起始劑量和合適的生物標志物，或者為臨床聯合用藥提供合理性依據。必要時應進行次要藥效學研究，藥物的次要藥效學特征有助于藥物毒性風險的評價。對于ADC，在早期研發中，應對ADC的體外和體內藥理/藥效作用進行研究。通常，除了ADC整體的藥理/藥效作用外，還需要對其各個組成部分的藥理作用進行研究。主要包括靶抗原結合活性，可能的靶抗原相關藥理作用，以及Fc效應，如抗體依賴性細胞介導細胞毒性（ADCC）、補體依賴性細胞毒性（CDC）等研究；同時，還需對游離小分子化合物或主要的藥理活性代謝物進行作用機制研究。應關注ADC與裸抗體、游離小分子化合物或藥理活性代謝物之間的藥理作用差異，以及抗原表達水平對藥理作用的影響。在早期研究中應獲得內化、裂解以及裂解后主要的游離小分子化合物或藥理活性代謝物（參見注釋,下文統稱為游離小分子化合物）等信息，為藥代動力學/毒代動力學等研究的檢測或評價目標提供數據支持。對于某些ADC，盡管荷載的小分子化合物為已上市藥物，仍需要關注由于裂解、切割方式的不同生成新的游離小分子化合物的情況，在這種情況下需按照新化合物所遵循的原則開展相關非臨床研究。（二）安全藥理學在開始臨床試驗之前，通常應獲得ADC對重要系統功能（包括心血管系統、呼吸系統和中樞神經系統等）影響的信息。安全藥理學試驗可以單獨進行，也可以結合在一般毒理學試驗中開展。當游離小分子化合物是新化合物時，需要單獨對小分子化合物開展hERG試驗評價藥物對QT間期延長的潛在作用。必要時需開展ADC和/或小分子化合物的追加和/或補充的安全藥理學試驗。（三）藥代動力學ADC的偶聯結構特性，導致其體內過程多樣，因此，生物分析方法具有一定的復雜性。在進行藥代樣品生物分析前，需要根據ADC的組成、理化特性、體內代謝情況、以及對檢測靈敏度和線性范圍的要求等因素，選擇和建立合適的檢測方法，并完成相應的分析方法學驗證。ADC的藥代動力學研究內容主要包括：體外穩定性，血藥濃度-時間曲線，吸收、分布、代謝、排泄（ADME），血漿蛋白結合，對藥物代謝酶活性及轉運體的影響。臨床試驗開展前，需在人和動物（藥理試驗和/或毒理試驗動物）的血漿等介質中考察ADC的體外穩定性。通常，在藥代研究中主要檢測偶聯抗體、總抗體（偶聯抗體和裸抗體）和游離小分子化合物。若ADC的小分子化合物或者體內裂解后的游離小分子化合物是新化合物，需要對其血漿蛋白結合、組織分布、代謝、排泄/物質平衡、藥物代謝酶及轉運體影響進行研究。對于全新連接子，在研發中應關注其在體內的代謝情況。由于小分子化合物的體循環暴露可能很低，因此對試驗的靈敏度是一個挑戰，通常采用放射性標記的方法來追蹤小分子化合物在體內的ADME。一般情況下，ADC的組織分布不是必需的，但對于擬靶向特定組織病灶的ADC（如靶向腦部的ADC），需要進行組織分布研究。通常，可以放射標記小分子化合物對其組織分布特征進行評價，也可以分別放射標記抗體和小分子化合物獲得更為全面的組織分布特征。（四）毒理學1、一般毒理學ADC中的抗體與靶抗原特異性識別、結合、內化進入靶細胞，在靶細胞中裂解釋放小分子化合物，將其靶向遞送至靶細胞，并發揮治療作用。ADC雖然通過靶向性釋放小分子化合物實現了靶組織藥物富集，提高了治療窗，但ADC的主要毒性反應特征仍然與所連接的小分子化合物毒性特征相似。大部分ADC的毒性反應程度比小分子化合物直接給藥減弱，但有些ADC可能會增加或加重抗體靶結合組織毒性反應。ADC雖然增加了小分子化合物的靶向釋放，但是仍然有一部分小分子化合物提前釋放，有些游離小分子化合物也可從靶細胞中快速擴散或轉運至周圍組織、體循環中，或者靶細胞的凋亡、損傷可能導致游離小分子化合物進入體循環。ADC中的抗體部分，還可能與其他非靶組織器官細胞表面受體或者抗原表位結合，例如，由Fc受體介導的細胞吞噬作用，藥物經過分解代謝以后會對相應組織細胞產生毒性作用。因此，ADC的毒性作用與抗體、小分子化合物、以及連接子的特性密切相關，隨著抗體、小分子化合物、連接子的變換，其毒性反應特征也會產生變化。非臨床安全性研究中，應關注藥物組成結構、藥代特征對毒性作用的影響，綜合分析試驗結果。ADC安全性研究相關種屬的選擇一般遵循抗體藥物相關種屬選擇的基本原則。ADC不同于一般抗體藥物，其毒性反應主要來自于游離小分子化合物，應關注在所選動物種屬中小分子化合物的毒性風險是否充分暴露。如果游離小分子化合物為新化合物或者毒性特征不明確，則至少需要在一個相關動物種屬中對其毒性進行單獨考察，可以單獨開展試驗，也可以在ADC的毒性研究中設置單獨給藥組。若在嚙齒和非嚙齒兩個種屬開展了ADC毒性研究，游離小分子化合物毒性的單獨考察首選嚙齒動物，除非在嚙齒動物中沒有活性。對于全新的小分子化合物，還應以具體問題具體分析為原則，采用小分子化合物遵循的原則對其相關動物種屬進行評估，如有必要，需要采用代謝相關動物種屬進一步對小分子化合物毒性進行研究。當游離小分子化合物在人體中有高比例代謝產物，需基于適應癥，參考ICHM3或者ICHS9考慮對其非臨床安全性進行評價。當游離的小分子化合物為已上市藥物，無需對其毒性進行單獨研究。當抗體部分無靶抗原結合相關動物種屬時，通常采用具體問題具體分析的原則進行考慮。一般情況，整體ADC的毒性研究可在一種動物種屬中進行研究，小分子化合物的毒性研究考慮見上文所述。若抗體部分靶向全新的靶點或者具有特殊安全性擔憂時，應考慮采用轉基因動物或替代分子對抗體的靶向藥理作用、Fc效應，以及靶向釋放小分子化合物所帶來的潛在毒性反應進行研究。對于連接子，一般無需對其進行單獨毒性評價。通常，非臨床研究樣品中未反應的連接子含量需涵蓋臨床試驗擬用樣品或上市產品中未反應連接子含量。通常，不必對裸抗體進行安全性研究。有些情況下，抗體可能帶來某些特異的、或者嚴重的毒性反應，可能需要研究ADC各組成部分對最終毒性的貢獻。因此，裸抗體的單獨毒性試驗雖然不是必需的，但是有助于整體ADC毒性研究數據的分析。2、遺傳毒性生物大分子一般不與DNA直接相互作用，ADC及其抗體部分通常無需進行遺傳毒性評價。ADC潛在的遺傳毒性來自于游離小分子化合物。應基于ADC的理化性質和體內裂解特征等因素確定具體需對哪些分子開展相關遺傳毒性研究。若已有充分數據提示目標檢測物具有遺傳毒性，則無需開展遺傳毒性研究。3、生殖毒性ADC中小分子化合物、連接子和裸抗體可能對生殖器官、生育力、胚胎-胎仔發育、子代發育等產生不良影響，因此應關注ADC的生殖毒性風險。ADC生殖毒性評價的研究策略、試驗設計、實施和評價等應參考ICHS5指導原則，同時結合ADC的作用機制和適應癥人群等，采用具體問題具體分析的評價策略。擬用于晚期腫瘤患者的ADC在上市申請時，通常應至少完成胚胎-胎仔發育毒性試驗。對于生物制品，通常在一種藥理相關動物種屬中評價生殖毒性。如果抗體與大鼠或兔的靶抗原不結合，那么在大鼠和兔可能不能識別抗原介導的生殖毒性反應。若靶結合動物種屬為非人靈長類動物或者無相關動物種屬，通常可首先考慮采用大鼠或兔開展生殖毒性試驗，考察游離小分子化合物的生殖毒性。若研究結果確證陽性，無需再采用靶結合相關動物種屬考察生殖毒性；否則，需要考慮采用非人靈長類動物或者采用轉基因動物或替代分子進行試驗，以識別抗原介導的生殖毒性。4、致癌性可根據ADC的特性，基于ICHS1、ICHS6、ICHS9等相關指導原則考慮致癌性研究的必要性。5、免疫原性/免疫毒性ADC進入生物體后可能會引起免疫原性，產生抗藥抗體，對ADC的免疫原性評價有助于對藥物藥代動力學、藥效和安全性結果進行分析，因此通常在ADC的非臨床安全性研究中應伴隨進行抗藥抗體檢測。抗藥抗體可能產生自ADC中的抗體部分和連接部分等，應基于免疫原性風險，考慮是否需要進一步考察抗原表位。有關ADC的免疫原性分析方法學開發、驗證以及分析檢測策略應遵循《藥物免疫原性研究技術指導原則》。可參考ICHS6、ICHS8等指導原則，結合ADC的種類、作用機理等因素，合理設計免疫毒性檢測指標。除了常規免疫毒性研究，必要時還應考慮進一步開展附加的免疫毒性研究。6、光安全性在Ⅰ期臨床試驗前，應根據小分子化合物（包括連接子）的光化學特性和藥理/化學類別初步評估潛在光毒性。如果這些數據評估后提示有潛在風險，應對臨床試驗受試者采取合適的保護措施。如果根據非臨床數據或臨床經驗，無法充分評價其光安全性風險，應在大樣本量受試者的臨床試驗（Ⅲ期）前提供符合ICHS10所述原則的光安全性評估。7、組織交叉反應組織交叉反應研究是采用免疫組織化學技術進行的體外組織結合試驗，確定抗體與抗原表位在組織內的結合特征。組織交叉反應研究可以為靶標分布的認知提供有用的補充信息，還可以提供潛在非預期結合的信息。使用人體組織進行的組織交叉反應研究，是支持抗體類藥物進行初始臨床給藥的系列安全性評價的有機組成。當沒有靶點結合相關動物種屬時，組織交叉反應信息對人體毒性風險的預測尤為重要。對于擬用于晚期腫瘤適應癥的ADC，可采用相關動物種屬評價毒理作用，并且沒有特殊擔憂時，組織交叉反應研究不是必需的。8、制劑安全性對于注射給藥途徑的ADC制劑需考察其局部刺激性和溶血性。9、毒代動力學ADC毒理研究應伴隨開展毒代動力學試驗。ADC毒代動力學試驗一般應測定偶聯抗體、總抗體、游離小分子化合物（必要時包括其主要代謝產物）的血藥濃度，并計算暴露參數，必要時測定組織器官或體液中的受試物和/或其代謝產物濃度。應注意對ADC毒代動力學數據進行合理分析，以支持對毒理研究結果的解釋。三、支持臨床試驗和上市的非臨床考慮1、人體首次用藥的起始劑量對于ADC，由于其藥效和毒性作用主要來自于游離小分子化合物，通常其臨床起始劑量的擬定方法與大多數全身給藥的小分子藥物相同，應將動物劑量與人體劑量進行等效劑量種屬間換算。基于擬定的適應癥考慮毒性耐受終點和安全系數。對于小分子藥物，也可根據AUC或其它暴露參數來進行種屬間換算。需要關注的是，若小分子化合物單獨開展了毒性研究，應考慮根據其毒性敏感性納入臨床起始劑量的估算中。擬用于晚期腫瘤患者的ADC，常用方法是基于嚙齒類動物STD10（10%的動物出現嚴重毒性反應劑量）等效劑量的1/10和非嚙齒類動物HNSTD（最高非嚴重毒性劑量）等效劑量的1/6估算起始劑量，為了保障受試者的安全，一般取其中較低者作為起始劑量。對于具有免疫激動特性的ADC，應基于最低預期生物效應水平（MABEL）估算起始劑量。2、支持臨床試驗和上市的非臨床研究通常，支持臨床試驗的非臨床研究設計應適應早期臨床試驗中可能使用的不同給藥方案。對于擬用于晚期腫瘤患者的ADC，當早期臨床試驗方案為每3周或4周給藥1次時，考慮到ADC的半衰期較長，非臨床毒性研究應至少給藥2次。支持Ⅰ期臨床試驗的非臨床數據和獲得的Ⅰ期臨床試驗數據可以支持進行臨床Ⅱ期試驗或者進入晚期腫瘤患者的二線或一線治療；3個月重復給藥毒性試驗可以支持大規模臨床試驗和上市申請。其他適應癥的ADC應遵循ICHM3，非臨床研究期限應支持臨床試驗計劃。ADC的內化裂解，血漿等介質中的穩定性信息對其后續藥代動力學、毒理學研究的設計和實施非常重要。應在早期開發、開展首次臨床試驗前獲得上述信息。ADC的其他研究可遵循ICHM3、ICHS6、ICHS9指導原則中建議的分階段研究原則。注釋：游離小分子化合物是指機體中未與抗體偶聯的小分子化合物，其可能為荷載小分子化合物，也可能為裂解后帶有連接子或部分連接子（如氨基酸）的荷載小分子化合物，其有可能有藥理活性，有可能沒有藥理活性；藥理活性代謝物是指具有藥理活性的未與抗體偶聯的小分子化合物，其可能與上述游離小分子化合物為同一化合物，也可能是游離小分子化合物的活性代謝產物。四、參考文獻NMPA.《藥物非臨床研究質量管理規范》.2017.NMPA.《藥物單次給藥毒性研究技術指導原則》.2014.NMPA.《藥物重復給藥毒性研究技術指導原則》.2014.NMPA.《藥物遺傳毒性研究技術指導原則》.2018.NMPA.《藥物生殖毒性研究技術指導原則》.2014.NMPA.