分子病理診斷的現狀與思考摘要：基于總體視角，我國分子病理診斷發展進程相比于國外大體上同步，我國國內最早的分子病理針對為上個世紀八十年代的DNA原位雜交，之后隨著更多與腫瘤有關的基因被發現，也誕生了更多的檢測和抑制癌基因的分子病理技術。鑒于此，文章詳細闡述了分子病理診斷的現狀及思考，希望能夠為行業發展提供幫助。關鍵詞：分子病理；診斷；現狀；思考前言：分子病理診斷，具體為經過應用分子生物學技術，基于基因水平視角，判斷及檢測細胞與組織分子遺傳學的變化，它是一種病理診斷技術，在病理診斷、靶向治療、療效預測和預后預測等方面都有很大的幫助，其也為轉化醫學范疇一類。基于本質而言，廣義上可把分子病理診斷定義成以組織與細胞分子水平為基礎的疾病診斷，狹義上講，它為一細胞或組織基因水平為基礎的一種病理診斷，其可叫做分子病理診斷。1我國分子病理診斷的發展現狀概述總體而言，現今，可以說我國分子病理診斷發展進程和國外大體同步。我國最早的分子病理診斷就是上世紀80年代的DNA原位雜交，在社會不斷發展進步下，發現了更多的與腫瘤有關的基因，則不斷誕生了更多的檢測和抑制癌基因的分子病理學技術。本世紀初，腫瘤靶向藥物的使用導致了靶向診斷的誕生，乳腺癌HER2基因擴增的FISH檢測和肺癌中EGFR基因突變的ARMS檢測都是我們較為熟悉的新技術。最近一些年，已經有更多的醫院在應用分子病理診斷，所以，可以說，最近一些年，我國分子病理診斷處于蓬勃發展時期，然而，雖然我國分子病理診斷同國際趨勢大體相同，當通過對比，我們在認識度及普及方面還有規范化程度上的距離還很大。精準醫療環境下基層醫院病理科分子病理學發展面臨著巨大的挑戰，病理學界應當充分重視這一現實。由于歷史、工作環境等諸多原因，我國病理從業人員數量少，分布嚴重不均。主要存在的問題如下：①醫院病理科條件差，病例數量少，不具備開展分子病理檢測的條件。②病理科醫師和技術人員對分子病理學認識不足，對其檢測的臨床意義、檢測方法及標本規范化處理等方面缺乏必要的知識。③由于以上原因難以滿足規范化分子檢測的要求，從而嚴重影響分子病理檢測的結果，這已成為分子病理學發展的瓶頸問題。應該看到，不管是從衛生經濟學角度，還是從我國病理學現狀看，讓每一個基層醫院病理科均開展分子病理學檢測工作既不現實也無必要。應當努力尋求一種適合我國現狀的分子病理學科學發展模式，從病理界自身層面努力提高從業人員的分子病理學知識水平，加強分子病理學檢測能力建設。精準醫學已成為當代醫學發展的一個熱點方向，因此應當在充分調研的基礎上，權衡利弊并提出不同層次醫院分子病理檢測要求和標準，努力爭取衛生行政部門的政策支持和認可。在加強三級醫院分子病理學建設的基礎上，強化對口支援工作，從而進一步推進我國分子病理學均衡發展，以滿足精準醫療環境下臨床對分子病理學檢測的需求。2我國分子病理診斷技術2.1顯色原位雜交（chromogenicinsituhybri-dization,CISH）顯色原位雜交的基礎原理是核酸分子單鏈間的堿基互補，將標記有地高辛或生物素的探針與待測的DNA或RNA互補配對后，從而將該位置標記出來。又將待測基因的不同分為：DNA原位雜交（主要應用于基因定位、特定基因檢測等）和RNA原位雜交（主要應用于基于表達檢測）。顯色原位雜交的優點是操作簡單、信號穩定、存儲方便。是當前應用最廣泛的分子病理診斷技術之一。2.2熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridi-zation,FISH）其原理與顯色原位雜交相同，區別在于FISH中應用了熒光標記，可以用熒光顯微鏡觀測到信號的表達。隨著對熒光原位雜交研究的不斷深入與拓展，科研人員又研發出多彩熒光原位雜交，主要是對疾病在染色體水平（檢測染色體的易位、缺失、變異等）和DNA水平上的檢測（檢測基因的突變、易位、缺失等）。FISH在檢測中比CISH更安全、快捷、特異性好、定位準確。2.3聚合酶鏈反映（PCR）PCR的原理是在TaqDNA聚合酶的催化作用下，通過特異的引物，對特定的一段區域采取高溫變性、低溫退火、適溫延伸三個過程擴增，再用凝膠電泳或測序的方法分析產物。該技術檢測的是組織、細胞中病毒的DNA。2.4基因芯片（DNA芯片或DNA微陣列）基因芯片的原理是將樣品分子DNA/RNA擴增、轉錄等技術后與DNA芯片的已知序列進行雜交，在計算機的綜合分析下，獲得樣品中基因表達的信息。基因芯片是將已知的DNA/cDNA片段大量集成在固體載體上而得名。基因芯片采用的是已知探針，可以在一次實驗中自動、快速完成數千條序列的檢測。3我國分子病理的臨床應用隨著分子病理的快速發展，已經發現了許多腫瘤基因和一些疾病基因，它已應用于臨床疾病的診斷，尤其在遺傳病、傳染病和腫瘤的診斷和藥敏試驗中發揮了顯著的優勢。3.1遺傳性疾病診斷、分型通過檢測病患的基因和染色體，能夠更好的預測家族遺傳性疾病的發生，如今，臨床上常用方法是染色體核型分型、熒光原味雜交等，產前篩查中得以廣泛應用。3.2感染性疾病病原體的檢測HPV的檢測通過原位雜交及PCR-斑點雜交實現；使用原位雜交檢測EB病毒；使用PCR對HSV及SARS病毒實施檢測等，這部分檢測已在臨床中得以廣泛應用，且在診斷感染性疾病方面發揮著十分重要的作用。3.3腫瘤的病理診斷與臨床應用在分子病理診斷的臨床應用中，腫瘤診斷和藥敏檢測應用最為廣泛，技術相對成熟，對腫瘤的早期篩查和早期診斷有著十分巨大的作用，在腫瘤診斷和個體化治療中發揮著相應的輔助作用。腫瘤輔助診斷中，軟組織及骨腫瘤的診斷以及淋巴造血系統腫瘤的分子分型應用了分子病理診斷計劃，使用熒光原味雜交法檢測有腫瘤特征的染色體及融合基因，最終能夠在保持基因水平的前提下，更好的對疾病的發生與發展進行了解。4對分子病理診斷所存的思考1）行業協會需要進一步努力將本職工作認真做好，并做好相應的宣傳及推動工作，盡可能組織分子病理診斷宣傳活動，宣傳分子病理診斷對臨床診療的意義，進而有效提升人們對分子病理診斷的認識度、關注度及重視度。不可只把分子病理診斷完全依附于大城市醫院和經濟發達的醫院，在具備開展分子病理檢查軟硬件條件和標本來源的醫療機構，也要進一步強化開展力度，積極開展實施。2）分子病理檢查需要病理科進行承擔，而非僅局限在經濟方面的利益，并且需要更多的開展分子病理檢查項目，并派病理醫師主要負責，最終獲得正確的細胞或組織，讓檢驗結果更具根據性，出現的爭議更具責任性。同時將生物技術公司的技術、資金、設備等優勢發揮出來，與權威可靠的醫療機構病理科合作，組建子病理實驗室，進一步推動分子病理診斷的有效開展。3）應該在規范且干凈的環境下開展分子病理檢查，所以，需要設置各準備區、處理區、制備區還有擴增區及擴增產物的分析區。并應用切實可行的管理方式，進一步將分子病理檢查準入制度加以完善，嚴格規范技術與市場準入條件，嚴格審查醫療單位開展病理診斷的條件和制度，大力支持和鼓勵合格單位，對不合格單位進行懲治，并且對設備技術及診斷人員提高標準與要求，從而進一步完善系統建設。結束語：總的來說，中國的分子病理診斷水平已經可以與國外和國際的分子病理診斷水平相媲美，這是毫無疑問的，但從局部的角度來看，依然有很多的局限性及弊端存在，在面對這部分局限及弊端時，它也給自己帶來了一些思考，唯有構建完善的分子