模塊九微生物的菌種保藏技術(shù)Microbialculturepreservationtechnology內(nèi)容導(dǎo)入菌種保藏主要是根據(jù)微生物生理生化特點(diǎn)，人工創(chuàng)造條件，使微生物代謝處于不活潑、生長繁殖受抑制的休眠狀態(tài)，即采取低溫、干燥、缺氧3個條件，使菌種暫時處于休眠狀態(tài)。任務(wù)內(nèi)容菌種保藏目的及原理常用菌種的保藏方法一、菌種保藏目的及原理目的使菌種不生長不死亡不污染不降低或不喪失其優(yōu)良性以盡量延長使用時間原理：創(chuàng)造不利于菌種生長的一切條件，使其代謝處于休眠狀態(tài)。不利條件干燥無氧缺營養(yǎng)低溫保藏注意1、用保種培養(yǎng)基2、及時保藏（菌絲占斜面2/3）3、最好換膠塞4、用時活化5、嚴(yán)防棉塞受潮基本原則1、挑選典型菌種的優(yōu)良純種。2、盡量使用分生孢子、芽孢等休眠體3、創(chuàng)造有利于休眠的保藏環(huán)境（如干燥、低溫）。4、盡可能多的采用不同的手段保藏一些比較重要的微生物菌株。二、常用菌種的保藏方法以母種形式保藏1.斜面低溫法

斜面菌種置4~6℃冰箱中（3~6個月）特點(diǎn)簡便

保藏時間短

易污染及退化

不適于草菇等菌類2.礦油保藏法斜面或半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)物上加滅菌石蠟（約1cm高），保存時間1-2年。用途：用于霉菌、酵母菌、放線菌、好氧性細(xì)菌等的保存礦油處理注入種管無菌檢驗(yàn)？口堵膠塞滅菌：121℃、30min

去水：40~50℃烘至無色透明

淹沒斜面約1cm用時轉(zhuǎn)管再轉(zhuǎn)管3.自然基質(zhì)保藏法基質(zhì)的處理麥粒浸透、煮熟

麩皮拌濕裝管滅菌接種培養(yǎng)干燥器去水特點(diǎn)防衰老、保藏時間長

轉(zhuǎn)接后生長旺

易污染，滅菌要徹底4、沙土保藏法特點(diǎn)：干燥、無營養(yǎng)用途：保存比較干燥的微生物孢子或芽孢、放線菌。保存時間數(shù)年或數(shù)十年5、冷凍真空干燥法原理：在極低溫度下快速的將菌體細(xì)胞凍結(jié)且保持完整，在減壓條件下利用升華現(xiàn)象除去水分，真空條件下熔封管口稱為凍干法。特點(diǎn)：干燥、低溫、無氧、保護(hù)劑，保存時間可達(dá)15年以上。保護(hù)劑：牛乳血清、糖類、甘油、二甲基亞砜6、液氮冷凍保藏技術(shù)原理：將安瓿管置于-70℃冰箱中冷凍4h，然后迅速移入液氮罐中保存。使用時從液氮罐中取出，立即放置在38～40℃水浴中使其溶化，而后直接將其接種到適宜的培養(yǎng)基中即可。特點(diǎn)：此法存活率高，穩(wěn)定性強(qiáng)，保藏時間長，是長期保藏菌種的最好方法。冷凍保護(hù)劑在液氮冷凍保藏中，最常用的冷凍保護(hù)劑是二甲亞砜和甘油，最終使用濃度一般為甘油10％、二甲亞砜5％。所使用的甘油—般用高壓蒸汽滅菌，而二甲亞砜最好為過濾滅菌。幾種常用菌種保藏方法的比較方法名稱主要措施適宜菌種保藏期評價冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低溫、有保護(hù)劑各大類細(xì)菌、酵母菌各大類**產(chǎn)孢子微生物各大類3~6月6~12月1~2年1~10年5~15年以上簡便簡便簡便簡便有效簡便有效1、菌種保藏