附件2ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊技術審查指導原則本指導原則旨在指導注冊申請人對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。本指導原則是對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）的普通規定，申請人應根據產品的具體特性擬定其中內容與否合用，若不合用，需具體敘述理由及對應的科學根據，并根據產品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內容，可自行補充。本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文獻，但不涉及注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿足有關法規規定的其它辦法，也能夠采用，但需要提供具體的研究資料和驗證資料，有關人員應在遵照有關法規的前提下使用本指導原則。本指導原則是在現行法規和原則體系以及現在認知水平下制訂的，隨著法規和原則的不停完善，以及科學技術的不停發展，本指導原則有關內容也將適時進行調節。一、范疇ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）是指使用凝膠、玻璃微珠等材料進行填充微柱，以免疫血液學、顆粒過篩和離心技術結合原理，進行人ABO血型的正定型鑒定及RhD抗原的檢測。本指導原則合用于ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）以及包含ABO、RhD血型抗原檢測用途的柱凝集法的血型檢測卡，但不合用于血源篩查用血型正定型試劑。本指導原則僅涉及對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊申報資料中部分項目的規定，合用于進行產品注冊和有關許可事項變更的產品。其它未盡事宜，應當符合《體外診療試劑注冊管理方法》（國家食品藥品監督管理總局令第5號）（下列簡稱《方法》）等有關法規規定。二、注冊申報資料規定（一）綜述資料綜述資料的撰寫應符合《有關公布體外診療試劑注冊申報資料規定和同意證明文獻格式的公示》（國家食品藥品監督管理總局公示第44號）（下列簡稱第44號公示）的有關規定。內容重要涉及產品預期用途、產品描述、有關生物安全性的闡明、有關產品重要研究成果的總結和評價以及同類產品在國內外同意上市的狀況介紹等內容，其中同類產品上市狀況介紹部分應著重從抗體生物學來源、抗體效價、特異性、敏捷度、使用期等方面寫明擬申報產品與現在市場上已獲同意的同類產品之間的異同。（二）重要原材料研究資料重要原材料研究資料應涉及重要構成成分（抗體、凝膠或其它填充物、緩沖液等）的選擇、制備及其質量原則的研究資料。1.抗體的選擇及質量原則。應明確寫明抗體的供應來源、生物學來源或克隆號，抗D抗體應明確抗體屬性，是IgM型或IgG型或兩者均含有。1.1抗體效價將抗A、抗B抗體進行倍比稀釋，應用試管法分別與A1型、A2型紅細胞試劑和B型紅細胞試劑反映，考察抗體效價。境內產品應與國標品比對，抗體效價不得低于國標品。進口產品根據原產國合用原則或原則品提交效價研究資料。將抗D抗體進行倍比稀釋，應用試管法與RhD陽性紅細胞試劑反映，考察抗體效價。1.2特異性抗A抗體應與A1型、A2型試劑紅細胞和A1B、A2B型紅細胞發生陽性反映，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反映；抗B抗體應與B型試劑紅細胞及A1B、A2B型紅細胞發生陽性反映，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反映；抗D抗體應與RhD陽性試劑紅細胞發生陽性反映，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反映。全部陽性反映不應有雙群現象等混合反映，全部陰性反映不應有凝集、溶血等不易分辨現象。1.3抗體親和力抗A、抗B抗體親和力應當滿足現行《中華人民共和國藥典》規定。將抗A、抗B血型試劑分別與10%紅細胞懸液于瓷板或玻片上混勻，抗A血型試劑與A1、A2、A2B血型紅細胞出現凝集的時間應分別不長于15秒、30秒、45秒；抗B血型試劑與B血型紅細胞出現凝集的時間應不長于15秒，且在3分鐘內凝集塊應達成1mm2以上。抗D親和力可參考對應的行業原則。將約50μL抗體置干凈瓷板或玻片上，加等體積10%RhD陽性O型紅細胞懸液（3人份混合），立刻混勻，凝集時間應不不不大于15s，3min內凝集塊應不不大于1mm2。1.4應提供不同批次抗體的驗證資料。1.5如為兩株抗體混合，應提交驗證資料闡明混合比例。2.填充物的選擇闡明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如構成、粒徑及其質量控制規定。應提交選擇比較過程，提交驗證明驗資料。3.填充緩沖液應闡明構成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功效性進行研究驗證。（三）重要生產工藝及反映體系的研究資料1.重要生產工藝介紹，可用流程圖方式表達，并簡要闡明重要生產工藝的擬定根據。2.產品基本反映原理介紹。3.重要生產工藝過程的研究資料、每一步生產工藝確實認資料及實驗數據。如抗體濃度的選擇擬定過程、凝膠溶脹條件（如介質、時間、溫度等）的擬定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質量控制的規定。4.重要反映體系的研究資料、每一步反映體系確實認資料及實驗數據。反映體系的設立應符合《全國臨床檢查操作規程》等公認原則操作規范、指南或原則的規定。如紅細胞懸液制備規定及紅細胞濃度的擬定、用量的規定、溫度、時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數和時間的方式設立離心條件。反映體系設立與《全國臨床檢查操作規程》規定不一致的產品應提供充足的驗證資料證明反映體系的有效性。（四）分析性能評定資料申請人應提交生產者在產品研制或成品驗證階段對試劑進行的全部性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應涉及具體研究目的、實驗設計、研究辦法、可接受原則、實驗數據、統計辦法等具體資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現，涉及實驗地點（實驗室）、合用儀器、試劑規格、批號、臨床樣原來源等。分析性能評定的實驗辦法能夠參考國內或國際有關體外診療產品性能評定的指導原則進行。產品性能研究所采用的儀器、試劑或其它物品如可能均應采用境內或境外已同意上市的產品，如紅細胞試劑、抗人球蛋白試劑、離心機等。分析性能評定實驗中應明確全部實驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的實驗辦法。全部實驗辦法應符合產品闡明書的具體操作規定。分析性能研究應采用最少三批產品進行。如檢測卡同時合用于手工法及全自動血型分析儀，應分別進行性能驗證并對兩者性能進行比較。建議著重對下列分析性能進行研究：1.外觀檢測卡應標記清晰，不同抗體對應不同顏色，封口應嚴密且能夠整條撕脫，檢測卡內填充物均勻，無干枯現象，液面高度一致，無明顯傾斜，離心后應無氣泡。2.特異性抗A柱應與A1型、A2型試劑紅細胞和A1B、A2B型紅細胞發生陽性反映，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反映；抗B柱應與B型試劑紅細胞和A1B、A2B型紅細胞發生陽性反映，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反映；抗D柱應與RhD陽性試劑紅細胞發生陽性反映，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反映。質控柱（Ctl柱）（如有）均呈陰性反映。全部陽性反映不應有雙群現象等混合反映，全部陰性反映不應有凝集、溶血等不易分辨現象。3.敏捷度3.1凝集強度規定抗A柱與A1型試劑紅細胞發生凝集反映時，反映強度應為4+，與A2型及A2B試劑紅細胞發生凝集反映時，反映強度應不不大于2+；與A1B試劑紅細胞發生凝集反映時，反映強度應不不大于3+；抗B柱與B型試劑紅細胞發生凝集反映時，反映強度應為4+，與AB型（A1B或A2B）試劑紅細胞發生凝集反映時，反映強度應不不大于3+；抗D柱與RhD陽性試劑紅細胞發生凝集反映時，反映強度應為4+。3.2與試管法的比對實驗采用同樣的A1型、A2型、AB型、B型、RhD陽性試劑紅細胞，將試劑卡檢測成果與試劑卡使用的抗體采用試管法的檢測成果進行比較，根據各自的成果鑒定辦法進行凝集強度的判讀，試劑卡凝集強度不得低于試管法。全部陽性反映不應有雙群現象等混合反映，全部陰性反映不應有凝集、溶血等不易分辨現象。4.重復性采用A1型、A2型、B型、AB型、O型試劑紅細胞分別對抗A柱和抗B柱進行重復性實驗，采用RhD陽性和陰性試劑紅細胞對抗D柱進行重復性實驗，使用上述全部試劑紅細胞對Ctl柱（如有）進行重復性實驗。批內重復性采用同一批次檢測卡重復檢測上述試劑紅細胞，重復次數不少于10次，比較同一批次檢測卡不同次檢測之間的檢測成果。日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復檢測上述試劑紅細胞，重復天數不少于10天，比較同一批次檢測卡不同天檢測之間的檢測成果。批間重復性采用最少三批檢測卡對上述試劑紅細胞進行重復檢測，比較不同批次間的檢測成果。批內、日間、批間重復性檢測成果應分別對應一致，對同一試劑紅細胞的檢測成果凝集強度差別不超出1+。陰性成果不應有凝集、溶血等不易分辨現象。手工法檢測還應考察不同操作人員之間的重復性。建議由最少3名不同操作人員，采用同一批次檢測卡重復檢測上述試劑紅細胞，重復次數不少于10次，比較不同操作人員檢測之間的檢測成果的重復性。5.臨床樣本驗證收集各ABO血型臨床樣本，涉及RhD陰性樣本，采用試劑卡進行檢測，將血型鑒定和凝集強度成果與已上市試劑成果進行比較。臨床樣本的收集應考慮涵蓋腫瘤、血液病、本身免疫病和貧血患者、老人及小朋友等來源。6.收集臨床弱凝集紅細胞樣本，驗證抗A、抗B和抗D陽性不大于3+及多個凝集強度的狀況，并提供多個凝集強度的圖片。7.收集多個血型的直接抗人球蛋白實驗陽性紅細胞進行檢測驗證，并提供直接抗人球蛋白實驗試劑及檢測成果信息。8.收集弱D、部分D紅細胞，考察驗證抗D柱能否檢出，并明確上述RhD血型的具體擬定辦法。9.溶血、脂血、黃疸等樣本的干擾評價。10.抗凝劑的合用性研究驗證。（五）陽性判斷值的擬定資料提供充足的驗證明驗，體現不同凝集強度的成果，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應包含溶血、混合視野雙群等狀況，明確具體的實驗辦法、實驗環節，提供不同凝集強度的圖例或相片。（六）穩定性研究資料穩定性研究資料重要涉及兩部分內容，申報檢測卡的穩定性和合用樣本的穩定性研究。前者重要涉及實時穩定性（使用期）研究，申請人可根據實際需要選擇合理的穩定性研究方案，實驗項目應最少涉及外觀、敏捷度、特異性、重復性。穩定性研究資料應涉及研究辦法的擬定根據、具體的實施方案、具體的研究數據以及結論。對于實時穩定性研究，應提供最少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品使用期后的研究資料。應對樣本穩定性進行研究，重要涉及室溫保存、冷藏條件下的使用期驗證，能夠在合理的溫度范疇內選擇溫度點（溫度范疇），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩定性。試劑穩定性和樣本穩定性兩部分內容的研究成果應分別在闡明書【儲存條件及使用期】和【樣本規定】兩項中進行具體闡明。（七）臨床實驗臨床實驗總體規定及臨床實驗資料的內容應符合《方法》、第44號公示和《體外診療試劑臨床實驗技術指導原則》的規定，下列僅結合ABO、RhD血型抗原檢測卡的具體特點對其臨床實驗中應重點關注的內容進行敘述。1.研究辦法按照法規規定應選擇境內已同意上市、臨床普遍認為質量較好的同類產品或試管法作為對比試劑，采用實驗用體外診療試劑（下列稱考核試劑）與之進行比較研究實驗，證明考核試劑與已上市產品或試管法等效。2.臨床實驗單位的選擇應選擇符正當規規定資質的臨床實驗機構進行臨床實驗，不得選擇血站進行臨床實驗。3.病例選擇臨床總病例數應不少于3000例。應采用臨床患者進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應涉及血型鑒定易產生干擾的病例，盡量選擇多個疾病患者（如腫瘤患者、本身免疫病患者、血液病患者）、老人、小朋友（不同年紀段）等。血型分布盡量均衡，ABO血型每種均應有統計學意義，RhD陰性樣本建議不少于50例。4.實驗過程分別采用考核試劑與對比試劑根據各自的闡明書對入組臨床樣本進行血型檢測，統計成果應具體到凝集強度。5.統計學分析應分別進行考核試劑與對比試劑對不同ABO血型、RhD血型的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，對定性成果進行Kappa檢查以驗證檢測成果的一致性。6.成果差別樣本的驗證對于兩種試劑檢測成果不一致（涉及考核試劑與對比試劑定型成果不一致、考核試劑與對比試劑凝集強度差別較大，如≥2+）的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認實驗，同時應結合樣本的復測成果進行綜合分析，最后應采用適合的辦法進行樣本血型的最后確認。如臨床樣本中包含凝集強度不大于3+的樣本，應進行進一步確認，明確出現弱凝集的因素。7.臨床實驗數據統計表應作為臨床實驗報告附件提交。臨床實驗數據統計表應列明全部病例的具體臨床診療信息、凝集強度和血型定型成果，如有不符樣本應列明第三方確認的成果。8.臨床實驗中應注意考核試劑與對比試劑應嚴格恪守闡明書操作規定，如紅細胞懸液濃度、離心條件等，應與闡明書一致。（八）產品風險分析資料產品風險分析資料應符合第44號公示的基本規定，并參考對應的行業原則進行風險分析。風險分析中應充足考慮到多個可能影響檢測成果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、本身免疫病患者、血液病患者等）在進行血型定型檢測時可能存在一定的干擾、抗體效價隨放置時間延長的削弱對成果的影響、樣本放置的影響等，申請人應根據這些不擬定的因素分析產品應用可能存在的風險。（九）產品技術規定申請人應當在原材料質量和生產工藝穩定的前提下，根據產品研制、性能評定等成果，根據國標、行業原則及有關文獻，按照《醫療器械產品技術規定編寫指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告第9號）的有關規定，編寫產品技術規定。產品技術規定應符合《方法》和第44號公示的有關規定。如果擬申報試劑已有對應的國家/行業原則公布，則原則的規定不得低于上述原則規定。產品技術規定的性能指標應最少涉及外觀、敏捷度、特異性、重復性、穩定性。產品技術規定的附錄應涉及重要原材料、生產工藝及半成品檢定規定。重要原材料應明確抗體來源、克隆號、效價、特異性以及功效性驗證規定，應明確填充物來源及重要特性、質量控制規定，緩沖液應明確構成、pH值等特性及質控規定；重要生產工藝應以流程圖形式描述重要生產工藝過程，并明確重要生產工藝的具體條件和質量控制點；半成品檢定應明確半成品的檢查規定及辦法。（十）產品注冊檢查報告根據《方法》規定，申請注冊的第三類體外診療試劑應在含有對應承檢范疇的醫療器械檢查機構進行持續三個生產批次樣品的注冊檢查。（十一）產品闡明書闡明書承載了產品預期用途、實驗原理、實驗辦法、檢測成果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員對的操作、臨床醫生針對檢查成果給出合理醫學解釋的重要根據，因此，產品闡明書是體外診療試劑注冊申報最重要的文獻之一。產品闡明書的格式應符合《體外診療試劑闡明書編寫指導原則》（國家食品藥品監督管理總局通告第17號）的規定，境外產品的中文闡明書除格式規定外，其內容應盡量保持與原文闡明書的一致性，翻譯力求精確且符合中文體現習慣。產品闡明書的全部內容均應與申請人提交的注冊申報資料中的有關研究成果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，則應以規范格式對此內容進行標注，并單獨列明參考文獻的有關信息。下列內容僅對ABO、RhD血型抗原檢測卡闡明書的重點內容進行具體闡明，闡明書其它內容應根據《體外診療試劑闡明書編寫指導原則》規定進行編寫。1.【預期用途】1.1寫明本試劑用于人ABO血型的正定型檢測及RhD血型抗原的檢