第一節結核病防治實驗室痰檢工作第三章結核病管理及最新進展9/14/2023第一節結核病防治實驗室痰檢工作第三章結核病管理及最1第一講痰涂片鏡檢9/14/2023第一講痰涂片鏡檢8/4/20232本節內容導航痰檢工作的目的和意義國家結核病規劃（NTP）與結核病細菌學實驗室網絡檢查對象結核菌的形態和結構電子顯微鏡下的結核分枝桿菌染色特性萋尼氏染色鏡下形態9/14/2023本節內容導航痰檢工作的目的和意義電子顯微鏡下的結核分枝桿菌83本節內容導航痰涂片操作程序常見標本的收集及處理痰標本的采集－容器痰標本的采集留取標本痰標本的運送標本的性狀直接涂片的步驟染色的步驟9/14/2023本節內容導航8/4/20234痰檢工作的目的和意義

在結核病控制工作中痰結核菌涂片鏡檢對于發現傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評價防治效果具有重要意義是國家結核病控制規劃(NTP)的重要組成部分，在現代結核病控制工作中起著不可缺少的重要作用129/14/2023痰檢工作的目的和意義在結核病控制工作中痰結核菌涂片鏡5國家結核病規劃（NTP）與

結核病細菌學實驗室網絡結核病細菌學實驗室通過日常、有效的細菌學（病原學）診斷，發現傳染源、決定化療方案和評價治療效果為實現NTP的重要目標服務痰涂片鏡檢服務必需在健全的細菌學實驗室網絡中才能實現129/14/2023國家結核病規劃（NTP）與

結核病細菌學實驗室網絡6國家結核病規劃（NTP）與

結核病細菌學實驗室網絡結核病高負擔國家NTP主要通過實施現代結核病控制策略（DOTS）來實現痰涂片鏡檢是結核病細菌學實驗室服務中最重要的內容之一。痰涂片鏡檢發現傳染源是DOTS策略的重要組成部分349/14/2023國家結核病規劃（NTP）與

結核病細菌學實驗室網絡7結核病癥狀體征咳血或伴有血痰發熱或胸痛超過2周持續咳嗽咳痰超過3周

檢查對象胸部X線異常凡因結核病癥狀求診及轉診的可疑肺結核患者，均應進行痰直接涂片檢查確定診斷9/14/2023結核病癥狀體征咳血或伴發熱或胸持續咳嗽檢查對象胸部X線異常8確定診斷的涂片檢查應采集3個合格的痰標本就診當時在門診留一份“即時痰”標本，同時給患者2個痰盒，囑患者留取“夜間痰”和“晨痰”，于次日交驗檢查對象

9/14/2023確定診斷的涂片檢查應采集3個合格的痰標本檢查對象8/49檢查對象

治療中或復診隨訪病人按期每次送檢兩份痰(當日即時痰、當日或次日晨痰）

初治涂陽患者在療程滿2、5、6月時

復治涂陽患者在療程滿2、5、8月時療效評價9/14/2023檢查對象療效評價8/4/202310經萋爾-尼爾遜染色后在顯微鏡內藍色背景下呈紅色桿狀寬度為0.3～0.6um，生長發育期間形成分枝光學顯微鏡下為細長稍彎曲，兩端鈍圓的桿菌，菌體長度多為1.5~3.5um結核菌的形態和結構結核分枝桿菌9/14/2023經萋爾-尼爾遜染色后在顯微鏡內藍色背景下呈紅色桿狀寬度為0.11細胞質核物質細胞壁細胞膜結核分枝桿菌結核菌的形態和結構電子顯微鏡下的結核分枝桿菌9/14/2023細胞質核物質細胞壁細胞膜結核分枝桿菌結核菌的形態和結構電子12Gram-positive

S.aureusGram-negative

E.coliAcidfast

M.tuberculosis

結核菌的形態和結構電子顯微鏡下的結核分枝桿菌9/14/2023Gram-positive

S.aureusGram-13

結核桿菌用革蘭氏染色，著色較差但呈蘭色，列為G＋菌

結核桿菌用普通的染色方法不易著色，在染液中加入石炭酸后才可著色

1

2

結核菌的形態和結構染色特性9/14/2023結核桿菌用革蘭氏染色，著色較差但呈蘭色，14

抗酸染色時，因結核桿菌菌體含有大量脂質，其脂質的含量占分枝桿菌之首，占菌體干重的40%，因脂質的含量大，所以不易著色，但經過加熱或者提高石炭酸的濃度、延長染色時間等處理以后才能著色

3

結核菌的形態和結構染色特性9/14/2023抗酸染色時，因結核桿菌菌體含有大量脂質，其脂質的15

一旦著色，不易被鹽酸酒精脫色，而其他細菌均被脫色，把不被鹽酸酒精脫色的細菌稱為抗酸菌，這種方法稱為抗酸染色法

4

結核菌的形態和結構染色特性9/14/2023一旦著色，不易被鹽酸酒精脫色，而其他細菌均被16結核菌的形態和結構萋尼氏染色鏡下形態9/14/2023結核菌的形態和結構萋尼氏染色鏡下形態8/4/202317【胸腹水】【腦脊液】【尿標本】【膿液、病灶組織】【痰標本，肺部深咳的痰】痰涂片操作程序常見標本的收集及處理9/14/2023【胸腹水】痰涂片操作程序常見標本的收集及處理8/4/202318【胸腹水的采取】于試管中加20%的枸櫞酸鈉3—5滴，或10%的草酸鉀5—6滴，可防止15—20ml胸腹水凝固。無菌采取胸腹水以后應立即送檢。可采取離心集菌或漂浮集菌法檢查痰涂片操作程序常見標本的收集及處理9/14/2023【胸腹水的采取】痰涂片操作程序常見標本的收集及處理8/4/219

【纖維支氣管鏡刷檢物】可將毛刷直接進行抗酸染色,也可將刷檢標本洗脫于裝有無菌生理鹽水的試管中,再涂片檢查

痰涂片操作程序常見標本的收集及處理9/14/2023【纖維支氣管鏡刷檢物】痰涂片操作程序常見標本的收集及處20【腦脊液的采取】無菌手術取得腦脊液以后，3000轉離心30分鐘，取沉淀物涂片染色檢查結核性的腦脊液放在冰箱中4℃過夜以后，會在液面形成一個倒漏斗狀的薄膜，取此薄膜涂片染色鏡檢痰涂片操作程序常見標本的收集及處理9/14/2023【腦脊液的采取】痰涂片操作程序常見標本的收集及處理8/4/221

【尿標本的采取】通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小時的尿液，放冰箱或陰涼處，靜置，去上清，留沉淀部分50—60ml送檢，取此沉淀液，經3000轉，離心30分鐘，取沉淀部分2ml直接涂片，染色檢查痰涂片操作程序常見標本的收集及處理9/14/2023痰涂片操作程序常見標本的收集及處理8/4/202322膿液直接涂片染色鏡檢病灶組織或干酪樣組織需充分研碎后再涂片檢查痰涂片操作程序常見標本的收集及處理9/14/2023膿液直接涂片染色鏡檢痰涂片操作程序常見標本的收集及處理8/423

當前,貴州省疾病預防控制機構結核病實驗室進行痰檢工作的耗材由項目統一提供：

螺旋蓋痰瓶可密封的塑料盒可密封的蠟紙盒痰涂片操作程序痰標本的采集－容器9/14/2023當前,貴州省疾病預防控制機構結核病實驗室進行痰檢痰涂片操24痰涂片操作程序痰標本的采集－容器9/14/2023痰涂片操作程序痰標本的采集－容器8/4/202325痰涂片操作程序痰盒圖例9/14/2023痰涂片操作程序痰盒圖例8/4/202326痰涂片操作程序痰盒圖例9/14/2023痰涂片操作程序痰盒圖例8/4/202327痰標本的采集痰容器應標明病人姓名、編號（檢查項目和容器序號1、2、3（1＝當日即時痰，2＝夜間痰，3＝次日晨痰）通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒蠟紙盒收集痰標本如：張三，涂片58—1，58—258--3痰涂片操作程序痰標本的采集9/14/2023痰標本的采集痰容器應標明病人姓通用螺旋蓋如：張三，涂片痰涂片28痰瓶上標明病人姓名，初診門診序號（或隨訪病人登記號）痰標本留取后，痰盒切勿倒置、嚴防痰液外溢，應立即送檢進行細菌學檢查時，應在登記本和檢驗報告單上注明標本性狀留取標本痰涂片操作程序留痰時應囑咐病人盡量深咳，留取痰量3~5毫升干酪痰、血痰、黏液痰為合格的標本唾液屬不合格痰標本

留取標本9/14/2023痰瓶上標明病人姓名，初診門診序號（或隨訪病人登記號）痰標本留29難以獲得合格標本時，也應進行細菌學檢查，但應注明標本性狀，以供分析結果時參考需送上一級實驗室檢查的痰標本應置4℃冰箱保存，外送前認真核對檢驗單與痰瓶上標注，放專用的冰盒內運送，或用紙袋、塑料袋封裝扎牢后順序放入包裝盒，盒外注明請勿倒置標志痰涂片操作程序痰標本的運送9/14/2023難以獲得合格標本時，也應進行細菌學檢查，但痰涂片操作程序痰標30合格的痰標本應是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物核心是肺部壞死組織中間層是支氣管分泌物外層是口腔黏液痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023合格的痰標本應是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物核心是31

【干酪痰】標本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團塊狀的肺部分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時較易涂抹涂片染色后鏡檢，可發現大量膿性炎癥細胞、肺上皮脫落細胞由于此類標本是由肺部深處咳出，對肺結核的診斷最有價值，故抗酸桿菌(以下簡稱AFB)的檢出率較高痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023【干酪痰】痰涂片操作程序標本的性狀8/4/202332【血痰】此類標本是因粘液痰或干酪痰標本中混有血液而形成顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲涂片染色后鏡檢除能夠觀察到粘液痰或干酪痰的細胞特征外，含新鮮血液的標本中可見到被染色的血細胞由于含血標本易干擾AFB鏡檢的結果，故在制片時應盡量避免挑取含血標本痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023【血痰】痰涂片操作程序標本的性狀8/4/202333痰涂片操作程序【粘液痰】標本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支氣管分泌物為主，制片時需仔細涂抹此類標本的AFB檢出率較唾液高標本的性狀9/14/2023痰涂片操作程序【粘液痰】標本的性狀8/4/202334痰涂片操作程序【粘液痰】涂片染色后鏡檢時，鏡下可見支氣管內膜纖毛柱狀上皮細胞(細胞較長且形態不規則、細胞核和細胞質著色均較深，細胞一端可見著色較淺的纖毛)，伴有少量肺上皮脫落細胞(多數為圓形、細胞核較小且著色較細胞質深，核質比大于1:3)、膿性炎癥細胞(卵圓形、細胞核占細胞比例較大且著色較深，核質比低于1:1)、口腔脫落細胞及口腔寄生菌標本的性狀9/14/2023痰涂片操作程序【粘液痰】標本的性狀8/4/202335【唾液】目視觀察標本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘度較低的口腔分泌物為主，標本中有時伴有氣泡涂片染色鏡檢時，鏡下可見少量口腔上皮脫落細胞(形態不規則、細胞核著色較細胞質深，核質比接近或大于1:2)和口腔內寄生菌，有時可見食物殘渣由于此類標本進行AFB檢查時的檢出率很低，用于對患者確定診斷時是不合格的標本痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023【唾液】痰涂片操作程序標本的性狀8/4/202336

不同痰液涂片陽性率表

（僅供示例）性質例數陽性數陽性率干酪痰553665.5%血痰461634.8% 粘液痰5295610.6%唾液9277.6%痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023

37細胞核質比，白細胞，說明痰的質量較好痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023細胞核質比，白細胞，說明痰的質量較好痰涂片操作程序標本的性狀38上皮細胞多，說明標本質量差痰涂片操作程序標本的性狀9/14/2023上皮細胞多，說明標本質量差痰涂片操作程序標本的性狀8/4/239【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】

編號無磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用標簽紙有磨砂面的玻片，可用鉛筆編號痰涂片操作程序直接涂片的步驟9/14/2023【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】

編號痰涂片操作程序直接涂40

【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】使用折斷的竹簽茬端，取痰標本中干酪樣或膿樣0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3處，均勻涂抹10x20毫米大小的橢圓形痰膜痰膜朝上，待自然干燥(一般20分鐘)

痰涂片操作程序直接涂片的步驟9/14/2023【清潔無劃痕的新玻片脫脂、干燥】痰涂片操作程序直接涂片的步4110×20mm20mm10mm痰涂片操作程序涂片面積9/14/202310×20mm20mm10mm痰涂片操作程序涂片面積8/4/42復染(亞甲蘭)脫色(鹽酸酒精)初染(堿性復紅)染色過程

痰涂片操作程序染色步驟9/14/2023脫色(鹽酸酒精)初染(堿性復紅)染色過程

痰涂片操作程序43

【初染】將玻片放置染色架上，玻片間距保持10毫米以上距離火焰固定（5秒鐘將玻片過火4次）滴加石炭酸復紅染液，蓋滿玻片火焰加熱至出現蒸汽，勿使沸騰脫離火焰，保持5分鐘染色步驟痰涂片操作程序9/14/2023【初染】染色步驟痰涂片操作程序8/4/202344痰涂片操作程序

【脫色】流水自玻片一端清緩沖洗染色液，瀝去玻片上的水，滴加脫色液，保持1分鐘染色步驟9/14/2023痰涂片操作程序【脫色】染色步驟8/4/202345痰涂片操作程序【復染】滴加亞甲藍復染液，保持30秒鐘流水沖洗，瀝去玻片上的水玻片干燥后鏡檢染色步驟9/14/2023痰涂片操作程序【復染】染色步驟8/4/202346將涂片排放在染色架上，注意間隔痰涂片操作程序染色步驟9/14/2023將涂片排放在染色架上，注意間隔痰涂片操作程序染色步驟8/4/47滴加堿性復紅痰涂片操作程序染色步驟9/14/2023滴加堿性復紅痰涂片操作程序染色步驟8/4/202348加熱痰涂片操作程序染色步驟9/14/2023加熱痰涂片操作程序染色步驟8/4/202349流水沖洗痰涂片操作程序染色步驟9/14/2023流水沖洗痰涂片操作程序染色步驟8/4/202350脫色痰涂片操作程序