附子水提物對小鼠心臟量-毒和時-毒關系的影響

附子是毛科植物的烏拉科零件。附子始載于《神農本草經》,其味辛、甘,性大熱,有毒。歸心、脾、腎經,具有回陽救逆,補火助陽,散寒除濕,止痛的功效1材料表面1.1科植物東南角a.c.caeli子根的鑒定附子購自北京同仁堂飲片有限責任公司(批號201232732-S),經鑒定為為毛茛科植物烏頭A.carmichaeli的子根的加工品,按《中國藥典》2010年版附子項下檢查,符合各項規定。附子水提物(批號20130419)含生藥量1.0g·mL1.2al104電子天平cdmBL-420S生物機能實驗系統(成都泰盟科技有限公司);YP20001電子天平(上海上天精密儀器有限公司);AL104電子天平[梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司];KDM型調溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司);DZKM-S-6電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫療儀器廠);UV-2600紫外-可見分光光度計[尤尼柯(上海)儀器有限公司];MultiskanGo-1510全波長酶標儀[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]。1.3大、國之間的健康關系SPF級KM小鼠,雌雄各半,體重18.0~22.0g,適齡、健康。購自山東大學實驗動物中心,動物許可證號SYXK(魯)20130001。2方法2.1給水提取物的劑量設計根據前期研究,按含生藥量計算,附子水提物對正常小鼠的近似最小致死量(MLD)為14.4g·kg2.2單次給藥心臟“量-毒”關系2.2.1單次給藥心臟“時-毒”關系研究小鼠雌雄各半,隨機分為7組,每組10只,按處理時間點依次為0,5,10,30,60,90,120min組。按25.0mL·kg2.2.2單次給藥心臟“量-毒”關系研究小鼠雌雄各半,隨機分為6組,每組10只,即空白對照組和附子水提物5個劑量組。按25.0mL·kg2.3統計學處理采用SPSS11.5統計軟件,數據用ue0af±s表示,計量資料先進行正態檢驗,正態分布資料采用單因素方差分析,非正態分布資料先轉換成正態分布再用單因素方差分析。進行組間比較,P<0.05為數據統計有顯著性差異。3結果3.1對血清生化指標的影響3.1.1對心電圖的影響單次給藥附子后,小鼠心電圖P波的時間和幅度、P-R間期、Q波和S波幅度的變化與0min組無統計學意義;小鼠心率從藥后5min開始升高,60min達到峰值后顯著降低(P<0.05);QRS間期、R波幅度、T波時間和幅度、QT間期從藥后5min開始降低,60min達到最低值(P<0.05),見表1。3.1.2對血清生化指標的影響單次給藥附子后,小鼠血清中CK,LDH,BNP和CTn-I等指標的含量從藥后5min開始,隨著時間的變化均升高。其中,CK含量在90min達到峰值,與0min組比較呈顯著性差異(P<0.05);LDH在120min時的含量,與0min組比較呈顯著性差異(P<0.05);BNP和CTn-I的含量均在60min達到最大值(分別為P<0.05和P<0.01),隨后降低。提示,與常規指標CK,LDH相比,BNP和CTn-I的變化,能更早的表現藥物對心臟的影響,見表2。3.1.3對臟器指數的影響與0min組比較,單次給予附子水提物后不同時間點的小鼠心體比值、肝體比值和腎體比值均無顯著性變化,見表3。3.2單次給藥劑量對血清生化指標的影響3.2.1對心電圖的影響單次給藥劑量從1.25g·kg3.2.2對血清生化指標的影響單次給藥劑量從1.25g·kg3.2.3對臟器指數的影響與對照組比較,單次給予不同劑量附子水提物后,小鼠的心體比值、肝體比值和腎體比值均無顯著性變化,見表6。3.3不同數字附射劑對小鼠的“劑量-時間-毒性”作用結果本文以血中各組CK,LDH,BNP和CTn-I與對照組(或0min組)的差異顯著性進行積分:顯著性差異,P<0.05,1分;非常顯著性差異,P<0.01,2分;極顯著性差異,P<0.001,3分。積分越大,與對照組的差異越大,藥物的心臟毒性越大。對上述附子水提物對小鼠心臟的“劑量-時間-毒性”作用結果進行分析,見圖1。給予附子后0~60min,附子水提物的毒性積分增大,60~120min,積分減小,其中峰效應點為60min;在一定范圍內,隨著附子水提物濃度的增大,積分增大。灌胃大劑量及臨床范圍劑量的附子水提物后不同時間點對小鼠心臟有一定的損傷,并呈現一定的“量-時-毒”關系,其毒性峰效應時間點出現在藥后60min。因此,在臨床運用過程中,應嚴格控制附子用量,及時監測患者體內靈敏指標變化情況,避免不良反應的發生。4附子水提物附子作為臨床常用有毒中藥,臨床上連續有因心臟中毒致死的病例報道,現代毒理研究發現,附子的毒性成分是雙酯型生物堿,引起中毒的靶器官主要是心臟,臟器系數是毒理學研究中評價受試物毒性作用的重要指標,對確認藥物毒性作用的靶器官具有重要參考價值肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)廣泛存在于心肌組織細胞中,當心肌細胞受損時,心肌酶釋放入血,使血液中CK,LDH的活性增高,造成心肌細胞代謝紊亂。因此,臨床常監測血中CK,LDH活性變化,以評估心肌細胞損傷程度。B-型腦鈉肽(BNP)是一種心臟神經激素,主要存在于心室肌內,因此正常人循環血液中僅有低水平的BNP。心功能障礙時極大激活機體利鈉肽系統,心室負荷增加導致BNP釋放。其血中水平可作為心功能損傷的早期預測指標,并能很好的反映左心室參數及心肌梗死范圍心電圖(ECG)反映心臟每個心動周期中生物電變化,尤其心率、QRS波群、T波及ST段的變化對心功能的影響更靈敏,是臨床中能夠即時反映患者心臟功能、診斷心臟疾病的重要指標。本實驗研究結果發現,小鼠ECG中QRS間期、R波幅度、T波時間和幅度、QT間期等的變化,可能預示著藥后60min時出現了較明顯的房室傳導阻滯,且隨著時間的變化,小鼠單次灌服7.20g·kg本實驗僅以單次給予大劑量和臨床規定用量研究附子水提物0~120min對小鼠心臟毒性的影響。時間短、給藥次數少,因此不同時間和劑量的附子水提物僅引起了小鼠心電圖和血清生化指標的變化,而未引起臟器的實質性病變,對心、肝、腎等臟器指數也就無顯著性影響。綜上所述,附子水提物可造成小鼠心臟不同程度的損傷,并呈現一定的“量-時-毒”關系,且隨著劑量的增大毒性增大,其毒性峰效應時間初步判斷出現在藥后60min左右。本實驗僅對附子水提物單次給藥對正常小鼠心臟的毒性進行了初步研究,為臨床用藥劑量與藥后定時心功能檢測提供