實驗六微生物的簡單染色及革蘭氏染色第1頁，課件共27頁，創作于2023年2月

細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的

制片和簡單染色

革蘭氏染色法

第2頁，課件共27頁，創作于2023年2月

細菌、放線菌、酵母菌和霉菌的

制片和簡單染色一、實驗目的學習掌握微生物制片及簡單染色的基本

技術

初步了解細菌、放線菌、酵母菌及

霉菌的形態特征和相互區別

鞏固顯微鏡操作技術及無菌操作

技術第3頁，課件共27頁，創作于2023年2月二、基本原理

染色前必須固定細菌

其目的有二：

一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上

二是增加其對染料的親和力

常用的有加熱和化學固定兩種方法

固定時盡量維持細胞原有的形第4頁，課件共27頁，創作于2023年2月

常用堿性染料進行簡單染色，原因在于微生物細胞在堿性、中性及弱酸性溶液中常帶負電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷，因此堿性染料的染色部分很容易與微生物細胞結合使其著色。常用作簡單染色的染料有美藍、結晶紫、堿性復紅等。當細菌分解糖類產酸使培養基pH下降時，細菌所帶

正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復紅或剛果紅

等酸性染料染色第5頁，課件共27頁，創作于2023年2月三、實驗器材與試劑

菌種：牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養的12-18小時枯草芽

胞桿菌和培養24h的金黃色葡萄球菌

溶液和試劑：草酸銨結晶紫染液、齊氏石炭酸復紅染液、

呂氏堿性美藍染液、革蘭氏染色用碘液、

乳酸石炭酸棉藍染液

儀器和其他用品：雙層瓶、接種環、接種鏟、接種針、

平皿、U型玻璃棒、解剖針、

解剖刀、50%乙醇、20%甘油、高氏一號培養

基平板、馬鈴薯瓊脂薄層平板等第6頁，課件共27頁，創作于2023年2月四、操作步驟安全警示1.加熱固定時要使用載玻片夾子，以免燙傷。不要將

載玻片在火焰上燒烤時間過長，以免載玻片破裂2.使用燃料時避免粘到衣服上3.放線菌和霉菌制片要減少空氣流動，避免吸入孢子4.實驗完畢后洗手，金黃色葡萄球菌為條件致病菌，

二甲苯為有毒物質。第7頁，課件共27頁，創作于2023年2月細菌制片及簡單染色涂片：將玻片分成兩個區域，各滴上一小滴蒸餾水，再用無菌操

作的方法挑菌少許枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌于玻

片的水中，并充分混勻涂成薄膜干燥：將涂片置火焰高處微熱烘干或自然干燥固定：涂面朝上，通過微火2-3次染色：玻片泠卻后加結晶紫滴于涂片上，覆蓋涂面染色1分鐘水洗：傾去染色液，用水自玻片一端輕輕沖洗至洗出水變無色為止

（注：勿沖去菌體）干燥：自然干燥，或用吸水紙吸干鏡檢：顯微鏡下觀察并記錄第8頁，課件共27頁，創作于2023年2月四、實驗步驟1、菌落形態觀察：2、細菌簡單染色：3、細菌革蘭氏染色。注意：菌落顏色、濕度、形狀、大小、透明度、顏色、邊緣是否規則等特征。染色過程：涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→干燥→鏡檢注意事項：涂片：取菌量不能太大干燥：自然干燥水洗：水流不能直接沖在涂菌處滴加少量水挑取菌體涂片干燥固定染色水洗干燥第9頁，課件共27頁，創作于2023年2月放線菌革蘭染色第10頁，課件共27頁，創作于2023年2月青霉的顯微結構第11頁，課件共27頁，創作于2023年2月曲霉的顯微的顯微結構第12頁，課件共27頁，創作于2023年2月毛霉顯微結構第13頁，課件共27頁，創作于2023年2月根霉顯微形態

第14頁，課件共27頁，創作于2023年2月電鏡下的酵母第15頁，課件共27頁，創作于2023年2月

革蘭氏染色法一、目的要求學習掌握革蘭氏染色法

了解革蘭氏染色原理

鞏固顯微鏡操作技術及無菌操

作技術第16頁，課件共27頁，創作于2023年2月二、基本原理（革蘭氏染色）革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理ChristainGram氏創立的，可將細菌區分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）革蘭氏染色法是細菌學中最重要的鑒別染色法革蘭氏染色法所以能將細菌分為革蘭氏陽性和

革蘭氏陰性，是由這兩類細菌細

胞壁的結構和組成不同決定的第17頁，課件共27頁，創作于2023年2月第18頁，課件共27頁，創作于2023年2月三、實驗器材與試劑菌種：大腸桿菌16小時牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養物

金黃色葡萄球菌16小時牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養物溶液和試劑：革蘭氏染液、草酸銨結晶紫染液、盧戈氏碘

液、95%乙醇、番紅復染液等儀器和其它用品：顯微鏡、雙層瓶、接種環、載玻片夾

子、無菌生理鹽水等第19頁，課件共27頁，創作于2023年2月本實驗為什么采用上述生物？第20頁，課件共27頁，創作于2023年2月四、操作步驟革蘭氏染色法的基本步驟是：

制片—初染（結晶紫）—媒染（碘液）—

脫色（95%乙醇或丙酮）—復染

(番紅)

—

鏡檢（油鏡）—混合涂片染色經此方法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的

細菌為革蘭氏陽性菌；細菌染上復染劑的顏

色(紅色)，該菌屬于革蘭氏陰性菌第21頁，課件共27頁，創作于2023年2月染色結果金黃色葡萄球菌革蘭氏染色結果第22頁，課件共27頁，創作于2023年2月染色結果大腸桿菌革蘭氏染色結果第23頁，課件共27頁，創作于2023年2月染色結果金黃色葡萄球菌和大腸桿菌混合菌樣的革蘭氏染色結果第24頁，課件共27頁，創作于2023年2月附：油鏡的使用雙目顯微鏡單目顯微鏡第25頁，課件共27頁，創作于2023年2月2.油鏡的原理

油鏡的透鏡很小，從