骨髓檢查及細胞化學染色檢驗第1頁，課件共66頁，創作于2023年2月骨髓檢查及細胞化學染色檢驗熟悉：正常血細胞對化學染色的反應。第2頁，課件共66頁，創作于2023年2月骨髓檢查及細胞化學染色檢驗了解：流式細胞儀的構造、原理、主要技術指標和臨床應用。

染色體分析在臨床血液學中的應用。分子生物學檢查在血液學中的應用。常用FISH技術的種類、原理、方法和臨床應用。常用造血干/祖細胞培養的種類、原理和臨床應用。非顯帶染色體和顯帶染色體相關概念和技術。常見染色體數目和結構異常的有關概念和表示方法。核酸分子雜交技術原理和方法。聚合酶鏈反應原理和常用PCR產物檢查方法。以PCR為基礎的相關技術。基因芯片技術。細胞凋亡概念，細胞凋亡形態學的基本變化及主要生物化學特征。細胞凋亡的機制。第3頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞化學染色檢驗細胞化學染色，是一種以細胞形態學為基礎，結合運用化學反應的原理對血細胞內的各種化學物質作定位、定性及半定量分析的方法。第4頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞化學染色檢驗血細胞化學染色的基本要求是在原位顯示細胞成分和結構，反應產物應是有色沉淀物，具有一定的穩定性。血細胞化學染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質等。第5頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞化學染色檢驗基本步驟固定：蒸汽、液體固定有色沉淀反應：偶氮偶聯法、普魯士藍反應、雪夫反應、聯苯胺法復染第6頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞化學染色檢驗臨床意義輔助判斷急性白血病的細胞類型輔助血液系統疾病的診斷和鑒別診斷觀察疾病療效和判斷預后

探討某些疾病的發病機制

第7頁，課件共66頁，創作于2023年2月一、過氧化物酶染色（POX）原理：粒細胞和單核細胞胞漿中含有的髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）能將底物過氧化氫分解，產生新生態氧，它將四甲基聯苯胺氧化為聯苯胺藍。聯苯胺藍自我脫氫氧化，顯棕色四甲基苯醌二胺，再加入亞硝基鐵氰化鈉與聯苯胺藍結合，可形成穩定的藍色顆粒，定位于細胞漿內酶所在的部位。第8頁，課件共66頁，創作于2023年2月POX結果判斷細胞質內有藍黑色顆粒者為陽性。（－）無顆粒沉著；（a）（±）顆粒細小，分布稀疏；（b）（+）顆粒較粗，局灶分布；（c）

（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質1/2~2/3；（d）（+++）顆粒粗大，呈團塊分布；（e）（++++）全部胞質均部滿顆粒，可覆蓋胞核（f）。第9頁，課件共66頁，創作于2023年2月各種細胞過氧化物酶染色

嗜堿粒細胞嗜酸性粒細胞原幼粒細胞第10頁，課件共66頁，創作于2023年2月骨髓片POX染色第11頁，課件共66頁，創作于2023年2月第12頁，課件共66頁，創作于2023年2月第13頁，課件共66頁，創作于2023年2月臨

床

意

義

POX染色是輔助診斷急性白血病細胞類型的首選、最重要的細胞化學染色。（1）粒系：POX主要分布在粒細胞和單核細胞內，隨著粒細胞成熟的程度而逐漸增強，中性分葉核粒細胞為強陽性。

嗜酸性粒細胞陽性程度最強，其陽性顆粒比中性粒細胞粗大，有折光。

嗜堿性粒細胞為陰性。第14頁，課件共66頁，創作于2023年2月（2）單核細胞：

原始單核細胞為陰性反應，幼稚單核細胞和成熟單核細胞呈弱陽性反應，顆粒細小，彌散分布。臨

床

意

義第15頁，課件共66頁，創作于2023年2月（3）其他細胞淋巴細胞、漿細胞、幼紅細胞、組織細胞、巨核細胞均呈陰性反應。（4）血小板過氧化物酶主要定位于幼稚型巨核細胞的核膜上，可作為原巨核細胞的一種標志物，有助于FABM7的識別。臨

床

意

義第16頁，課件共66頁，創作于2023年2月骨髓片POX染色APL：呈強陽性反應AML-M4：部分呈陽性反應，部分成弱陽性反應AML-M5：呈弱陽性ALL：呈陰性，<3%第17頁，課件共66頁，創作于2023年2月臨床意義（5）過氧化物酶染色主要用于鑒別急性白血病類型，急性髓細胞白血病多呈陽性反應，以M3和M2型反應最強，M1和M5型反應較弱，故有助于區別M3和M5型。急性淋巴細胞白血病呈POX陰性反應，故為急性髓細胞和淋巴細胞白血病鑒別的重要指標。第18頁，課件共66頁，創作于2023年2月二、中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP）原理：（偶氮藕聯法，Kaplow）

中性粒細胞內堿性磷酸酶（neutrophilicalkalinephosphatase,NAP）在pH9.2~9.8時，能水解磷酸萘酚鈉，釋放出磷酸與萘酚，再以重氮鹽與萘酚偶聯成不溶性有色沉淀于胞質內酶所存在的部位。第19頁，課件共66頁，創作于2023年2月NAP結果判斷陽性結果為胞質內出現灰褐色至深黑色顆粒狀或片狀沉淀①（－）胞漿呈淡紅色，為0分。②（＋）胞質出現灰褐色沉淀，為1分。③（＋＋）胞質深褐色沉淀，為2分。④（＋＋＋）胞質中已基本充滿棕黑色顆粒狀沉淀，但密度較低，為3分。⑤（＋＋＋＋）胞質全被深黑色團塊沉淀所充滿，密度高，甚至遮蓋胞核，為4分。

第20頁，課件共66頁，創作于2023年2月第21頁，課件共66頁，創作于2023年2月

NAP積分法

計數100個成熟中性粒細胞，按其反應強度分級，各級百分率與其級數乘積的總和，即為積分。例如：NAP反應結果（%）（-）（+）（++）（+++）（++++）

204020155

積分=（0×20）+（1×40）+（2×20）+（3×15）+（4×5）=145

參考值：正常人血細胞堿性磷酸酶除成熟中性粒細胞（桿狀核及分葉核）可見陽性外，其他血細胞均為陰性。中性粒細胞NAP活性積分值一般為10～50分，但有時可高達162分。

第22頁，課件共66頁，創作于2023年2月

臨床意義（1）生理變化：新生兒NAP增高，成人較兒童減低，老人更低；激烈運動增高；

月經期經前增高，行經后降低，經后期恢復正常；

妊娠期2-3月輕度增高，以后逐漸增高，分娩時達到高峰，產后恢復正常。第23頁，課件共66頁，創作于2023年2月（2）、病理變化

增高：嚴重化膿性感染、類白血病反應、AA、CML加速期、ALL、CLL、惡性淋巴瘤、癌轉移、MM、真紅、骨髓纖維化等。

減低：PNH、CML、惡性組織細胞病、MDS。第24頁，課件共66頁，創作于2023年2月第25頁，課件共66頁，創作于2023年2月第26頁，課件共66頁，創作于2023年2月三、蘇丹黑染色（SBB）原理：蘇丹黑B（sudanblackB,SB）是一種能溶解于脂肪中的色素染料，可使細胞內的中性脂肪、磷脂和類固醇著色，即使胞內微細結構的脂類物質也能顯示出來。結果

：脂類呈黑色或棕黑色顆粒，定位于細胞漿中（+）顆粒很小，細小、稀疏，或胞質局部面積的1/4有致密的顆粒。（++）顆粒較少，或胞質面積的1/2出現黑色顆粒。（+++）顆粒較密，或胞質面積的3/4出現黑色顆粒。（++++）顆粒極密，顆粒間無間隙。第27頁，課件共66頁，創作于2023年2月各種細胞蘇丹黑B染色第28頁，課件共66頁，創作于2023年2月臨床意義蘇丹黑B和過氧化物酶染色臨床意義相似主要用于急性白血病類型的鑒別。蘇丹黑B染色較過氧化物酶染色更敏感，但特異性不如過氧化物酶染色（極少數急性淋巴細胞白血病可為陽性）。第29頁，課件共66頁，創作于2023年2月M1-SBB(+)第30頁，課件共66頁，創作于2023年2月M2-SBB(+)第31頁，課件共66頁，創作于2023年2月四、鐵染色原理：骨髓中的含鐵血黃素（細胞外鐵）和中、晚幼紅細胞胞漿中的鐵蛋白聚合物（細胞內鐵）經普魯士藍反應形成藍色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于細胞內外鐵存在的部位。正常人骨髓細胞外鐵為+~++。鐵粒幼細胞陽性率為12%~44%。鐵染色（ironstain；IS）中的細胞外鐵反映骨髓中鐵的儲存量，細胞內鐵反映骨髓中可利用鐵的量。第32頁，課件共66頁，創作于2023年2月結果判斷（1）細胞外鐵的觀察：

細胞外鐵呈藍色的顆粒狀、小株狀或團塊狀。以油鏡觀察定級標準（-）無鐵粒可見。（+）少數鐵粒或鐵小珠。（++）較多鐵粒和鐵小珠。（+++）很多鐵粒、鐵小珠和少數小塊。（++++）極多鐵粒、鐵小珠并有很多小塊，密集成堆。正常范圍：+～++，“+”占2/3，“++”占1/3第33頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞外鐵觀察陽性為藍綠色沉淀++++血色病+++AA、鐵粒幼貧血++感染+++AA、鐵粒幼貧血+NBM—IDA第34頁，課件共66頁，創作于2023年2月結果判斷（2）細胞內鐵觀察：

細胞內鐵指有核紅細胞胞質內出現藍色顆粒，以油鏡計100個中、晚幼紅細胞，記錄胞質中含有藍色小顆粒（即鐵粒紅細胞）的比值。并根據細胞鐵顆粒的數目、大小、染色深淺和顆粒分布情況，將鐵粒幼紅細胞分為如下四型：Ⅰ型：僅含1-2個鐵顆粒。

Ⅱ型：含3-5個鐵顆粒。

Ⅲ型：含6-10個以上鐵顆粒。

Ⅳ型：>10個鐵顆粒。正常范圍：12%~44%，平均21.4%，多見Ⅰ型，少見Ⅱ型，無Ⅲ、Ⅳ型。第35頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞內鐵第36頁，課件共66頁，創作于2023年2月結果判斷（3）環形鐵粒幼紅細胞：指含鐵顆粒>6個，其中1/2以上鐵顆粒圍繞核周排列成完整環形或不完整環形。正常或非鐵粒幼細貧血無環形鐵粒幼細胞，鐵粒幼細貧血中環形鐵粒幼細胞>6%第37頁，課件共66頁，創作于2023年2月環形鐵粒幼細胞第38頁，課件共66頁，創作于2023年2月

臨床意義1．缺鐵性貧血時，骨髓細胞外鐵明顯減少，為“一”~“士”，細胞內鐵平均5.9%，僅為I型。經有效鐵劑治療后，外鐵增多。因此骨髓鐵染色是診斷缺鐵性貧血及指導鐵劑治療的重要方法。2．鐵粒幼細胞性貧血時，外鐵“2＋”一“3＋”，內鐵平均70%，其鐵粒粗大，以Ⅱ～Ⅳ型為主，出現較多環形鐵粒幼細胞。因此，本實驗是診斷鐵粒幼細胞貧血的有效方法。MDS也可出現環形鐵粒幼細胞。

3.非缺鐵性貧血如巨幼細胞貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血等骨髓鐵正常或不同程度的增加。但再生障礙性貧血不會出現環形鐵粒幼細胞，可作為與MDS鑒別的參考。

4.繼發性貧血的部分患者細胞內鐵可減少，但細胞外鐵不減少。

第39頁，課件共66頁，創作于2023年2月五、過碘酸-雪夫染色（PAS）原理：過碘酸-雪夫（Periodicacid-schiff，PAS）染色又稱糖原染色。胞漿內存在的糖原或多糖類物質（如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）經過碘酸（Periodicacid）氧化，轉變為二醛基（CHO-CHO），與雪夫（Schiff）試劑中的無色品紅結合，形成紫紅色化合物而沉積于胞漿中糖原類物質所存在的部位。該反應稱為過碘酸-雪夫（PAS）陽性反應。

第40頁，課件共66頁，創作于2023年2月PAS結果判斷細胞質內有出現紅色顆粒、塊狀或呈彌漫狀紅色者為陽性。①（－）胞質無色，無顆粒。②（+）胞質淡紅色或有少量紅色顆粒，通常＜10個顆粒。③（++）胞質紅色或有10個以上紅色顆粒。④（+++）胞質呈暗紅色或有粗大紅色顆粒，可出現紅色塊狀。⑤（++++）胞質呈紫紅色或有粗大紅色塊狀。

第41頁，課件共66頁，創作于2023年2月

臨床意義（1）M6與巨幼貧的鑒別

M6的幼紅細胞PAS可呈強陽性，積分明顯增高，巨貧、再障、溶貧時PAS反應為陰性。（2）急性白血病的類型鑒別

ALL，PAS呈大塊狀陽性，也可是陰性，AML為陰性，急性單核細胞白血病時原單核細胞及幼單核細胞PAS陽性，積分增高，陽性顆粒小而多，呈彌散分布。第42頁，課件共66頁，創作于2023年2月PAS染色AML-M6幼紅細胞呈陽性反應MA幼紅細胞呈陰性反應第43頁，課件共66頁，創作于2023年2月ALL-L1第44頁，課件共66頁，創作于2023年2月L1PAS(+)第45頁，課件共66頁，創作于2023年2月AML-M5第46頁，課件共66頁，創作于2023年2月M5PAS(+)第47頁，課件共66頁，創作于2023年2月AML-M6第48頁，課件共66頁，創作于2023年2月AML-M6PAS(+)第49頁，課件共66頁，創作于2023年2月AML-M7第50頁，課件共66頁，創作于2023年2月M7PAS(+)第51頁，課件共66頁，創作于2023年2月（3）巨核細胞和Sternberg細胞鑒別

巨核細胞PAS強陽性，Sternberg細胞為陰性或弱陽性。（4）戈謝氏細胞強陽性，尼曼-皮克細胞陰性或弱陽性。（5）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴細胞的糖原積分增高；一般的病毒感染，糖原積分在正常范圍內。第52頁，課件共66頁，創作于2023年2月六、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）原理：細胞內的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（naphytholAS-Dchloroacetateesterase,NAS-DCE）水解基質液中的氯乙酸AS－D萘酚，產生AS－D萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所存在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。NAS－DCE幾乎僅出現在粒細胞，其特異性高，因此又稱為“粒細胞酯酶”、“特異性酯酶”。第53頁，課件共66頁，創作于2023年2月結果判斷陽性結果為胞質內出現紅色沉淀①（－）胞質無色。②（＋）胞質呈淡紅色。③（＋＋）鮮紅色沉淀布滿胞質。④（＋＋＋）深紅色沉淀充滿胞質。第54頁，課件共66頁，創作于2023年2月

臨床意義1．急性粒細胞白血病和急性早幼粒細胞白血病原粒細胞NAS－DCE染色多呈（＋）~（＋＋）。白血病性早幼粒細胞呈（＋＋）~（＋＋＋）。2．急性單核細胞白血病原、幼單核細胞多呈陰性反應。3．急性淋巴細胞白血病原、幼淋巴細胞呈陰性反應。。第55頁，課件共66頁，創作于2023年2月七、中性非特異性酯酶染色

原理：中性非特異性酯酶包括醋酸AS-D萘酚酯酶(naphytholAS-Dacetateesterase,NAS-DAE)染色和α-醋酸萘酚酯酶（α—naphythyolacetateesterase,α-NAE）染色。細胞內的α-醋酸萘酚酯酶（α—naphythyolacetateesterase,α-NAE）在pH中性的條件下水解基質液中的α-醋酸萘酚，釋放出α-萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢藍B，形成的有色沉淀為棕黑色或灰黑色，α-NAE存在于單核細胞、粒細胞和淋巴細胞中，故它是一種中性非特異性酯酶。第56頁，課件共66頁，創作于2023年2月結果判斷陽性結果為胞質內出現藍色或棕黑色顆粒沉淀

①（－）無顆粒沉淀，為0分。②（±）顆粒少量、稀疏，為0.5分。③（＋）胞質內1/2區域出現顆粒沉淀，為1分。④（＋＋）胞質內3/4區域出現顆粒沉淀，為2分。⑤（＋＋＋）胞質內布滿顆粒沉淀，為3分。⑥（＋＋＋＋）胞質內充滿濃密的顆粒沉淀，為4分。第57頁，課件共66頁，創作于2023年2月

臨床意義NAS－DAE染色屬于中性非特異性酯酶染色，在鑒別白血病類型時需同時做NaF抑制試驗。

1．急性粒細胞白血病原粒細胞NAS－DAE染色可呈陽性反應，且不被氟化鈉抑制。2．急性早幼粒細胞白血病白血病性早幼粒細胞NAS－DAE染色為陽性或強陽性反應，亦不被氟化鈉所抑制。3．急性單核細胞白血病原、幼單核細胞NAS－DAE染色多呈陽性或強陽性反應，但能被氟化鈉抑制

第58頁，課件共66頁，創作于2023年2月骨髓NAS-DAE染色及氟化鈉抑制反應

第59頁，課件共66頁，創作于2023年2月第60頁，課件共66頁，創作于2023年2月第61頁，課件共66頁，創作于2023年2月細胞化學染色檢驗小結第62頁，課件共66頁，創作于2023年2月幾種常見急性白血病的細胞化學染色結果急淋急粒急單紅白血病POX藍黑色－+~+++－~+視合并的白細胞類型而定SB黑棕黑色－++~+++－~+同上AS-DNCE紅－－~+++－~+同上α-NAE棕黑－~++－~+++同上α-NAE-NaF不被NaF抑制被NaF抑制同上NAP褐-深黑增加減少正常或增加同上PAS紅+，粗顆粒狀或塊狀－或+，彌漫性淡紅色－或+，彌漫性淡紅色+++第63頁，課件共66頁，創作于2023年2月各型急性白血病細胞的化學染色特征

POXPASNAS－DCENAS－DAE（＋NaF） NAP

急淋（L1-L3

）

(-)(+)～(+++)(-)(-)～(+)不抑制