淺論基質金屬蛋白酶【摘要】目的探討基質金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)、層黏連蛋白(Laminin,LN)在原發性干燥綜合征(PrimarySjgrens’sSyndrome，PSS)患者唇腺組織的表達及其與唇腺病理分級的相關性。方法采用免疫組化S-P法檢測59例PSS患者，30例正常對照者唇腺中MMP-9，LN表達。結果原發性干燥綜合征患者唇腺組織中MMP-9高表達,LN低表達,而對照組唇腺組織中MMP-9低表達,LN高表達；MMP-9的表達強度隨唇腺病理分級升高而增強，LN的表達隨唇腺病理分級升高而減弱；MMP-9與LN的表達呈現負相關性。結論MMP-9、LN在PSS患者唇腺組織中存在異常表達，并且二者的表達情況與病理分級相關。

【關鍵詞】原發性干燥綜合征基質金屬蛋白酶-9層黏連蛋白唇腺

Abstract:ObjectiveTostudytherelationshipbetweenMMP9,LNandtheirrolesinthepathogenesisofPrimarySjgrens‘sSyndrome.MethodsImmunohistochemicaltechniquewasemployedtodetecttheexpressionofMMP9andLNinthelabialglandaciniofpatientswithPrimarySjgrens‘sSyndrome(PSS).ResultsSignificantdifferencesinLNandMMP9expressionsbetweentwogroupswereexpressionofMMP9inthelabialglandofthepatientswithPSSwasincreasedsignificantly(P＜)andtheexpressionofLNinthelabialglandaciniofthepatientswithPSSwasdecreasedsignificantly(P＜).TheexpressiondegreeofMMP9wassignificantlynegativelycorrelatedwiththetheexpressioneddegreeofLN,andthePearson‘scorrelationcoefficientwas(P＜).ConclusionMMP9,LNmaybeinvolvedinthepathogenesisofPrimarySjgrens‘sSyndrome.

Keywords:PrimarySjgrens‘sSyndrome;matrixmetalloproteinase9;laminin;labialglands

原發性干燥綜合征(PrimarySjgrens’sSyndrome,PSS)是一種累及全身外分泌腺的自身免疫性疾病，主要侵犯淚腺和唾液腺，以淋巴細胞、漿細胞浸潤為特征，可以引起腺體分泌減少，出現眼、口干燥癥狀。其發生淋巴瘤的機率是正常人的44倍［1］。MMP-9是一個蛋白酶家族中主要成員之一，能降解上皮基底膜(basementmembrane,ＢＭ)，在許多生理和病理過程中發揮重要作用，包括免疫和炎癥反應。有關MMP-9在腫瘤的發病及MMPs抑制劑對腫瘤和部分自身免疫性疾病治療作用的研究已有報道［2-3］，而有關MMP-9及LN與PSS的發病機制關系，國內未見報道。深入探討PSS患者唇腺組織MMP-9的表達及其與LN表達間的關系，有可能為PSS提供新的治療靶點，本研究應用免疫組化SP法對原發性干燥綜合征患者唇腺區MMP-9及LN進行了檢測和分析。

1資料和方法

臨床資料

實驗組：2004年5月～2006年9月我科門診及住院的PSS患者59例，所有病例均符合2002年干燥綜合征國際分類診斷標準［4］，首次確診時由本院口腔科行唇腺活檢術。術前均征得患者本人的同意。男3例,女56例,年齡25～65歲,平均(±)歲;病程1個月～10年,平均(±)年。對照組：30例為同期健康志愿者。兩組患者年齡、性別等無統計學差異。

方法

石蠟5μm厚連續切片,常規處理后,微波爐抗原熱修復,依次加入即用型一抗(鼠抗人MMP-9、LN工作液)、生物素標記二抗,DAB顯色、蘇木素復染。具體操作步驟嚴格按試劑盒說明進行。用已知陽性片作陽性對照,PBS代替一抗作空白對照。鼠抗人MMP-9、LN工作液和即用型SP免疫組化染色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

結果判斷標準

免疫組化：光學顯微鏡下MMP-9以胞質內出現黃色顆粒狀物質為陽性，LN以基底膜線性染色為陽性,按著色強弱分級計分:無著色為0,淺黃色為1,深黃色為2,棕黃色為3;著色范圍以在40倍鏡下隨機選取5個視野(每個視野計數100個細胞)計數陽性細胞所占的百分比均值:＜25%為1,25%～50%為2,＞50%為3。上述兩項相加即為MMP9或LN的強度積分:＜3分為陰性,3分為(+),4分為陽性(2+),5分為(3+)，6分為(4+)。

HE染色按Chisholm標準進行病理分級［5］：0級為間質中無淋巴細胞浸潤；1級為每4mm2組織內有少量淋巴細胞浸潤；2級為每4mm2組織內有輕度淋巴細胞浸潤；3級為每4mm2組織內有中度淋巴細胞浸潤或少于一個灶淋巴細胞浸潤；4級為每4mm2組織內有兩個或兩個以上淋巴細胞浸潤灶，每個灶至少有50個淋巴細胞聚集。

統計學方法

采用SPSS統計軟件，兩樣本計數資料比較采用非參數秩和檢驗、單因素方差分析及Pearson相關性分析。

2結果

陽性信號為胞漿內出現黃色顆粒。以PBS代替一抗的空白對照切片中,無任何陽性反應。59例原發性干燥綜合征患者唇腺組織MMP9陽性，呈現高表達,主要位于導管細胞胞漿(圖1，見封3)。30例原發性干燥綜合征患者的唇腺組織檢測到LN，呈現低表達(圖2，見封3)。對照組唇腺組織中MMP-9表達為陰性或弱陽性，而LN呈現高的表達(圖3，見封3)。二組MMP-9、LN的表達強度相比較，差異有統計學意義，并且MMP-9的表達隨病理分級的升高而升高，LN的表達隨唇腺病理的分級升高而減弱，MMP-9與LN的表達強度呈現負相關(r=-,P＜)，見表1、2。表1MMP-9、LN在正常對照與患者唇腺中表達強度的比較表2MMP-9、LN在PSS患者唇腺中表達強度與病理分級的關系

3討論

PSS是臨床常見的結締組織病，發病率僅次于類風濕關節炎。PSS最主要的病理特征是唇腺、淚腺等腺體組織中淋巴細胞的灶性浸潤。PSS因外分泌腺結構破壞、功能受損可出現口干、眼干癥狀，還可有皮疹、關節炎、膽囊炎、胰腺炎、腎小管病變、肺部受損等全身表現，并且PSS發生淋巴瘤的機率明顯高于正常人［1］。至今，其確切發病機制仍不完全清楚。唇腺導管、腺泡上皮及基底膜的完整是保證唇腺功能正常的基礎。

在正常情況下,上皮細胞不但分泌LN等基底膜蛋白以形成基底膜，而且分泌MMP-9等依賴鋅離子的內肽酶降解物質分解基底膜,使基底膜成分處于不斷合成和降解的動態平衡，以維持基底膜完整結構。PSS的典型唇腺病理特征是導管周圍大量的淋巴細胞浸潤成灶，并且多為CD4+的T淋巴細胞［6］，MMP-9可以介導T細胞的遷移［7］。

本研究發現MMP-9在PSS患者唇腺組織中高表達，與對照組比較差異明顯(Ｐ＜),并且表達強度隨著病理分級的升高而表達增強，具有統計學意義(Ｐ＜)。LN在PSS患者唇腺組織中呈現低表達，表現為基底膜染色減弱、基底膜破壞、斷裂甚至缺失，與對照組比較差異明顯(Ｐ＜),并且表達強度隨著病理分級的升高而減弱，差異具有統計學意義(P＜)。MMP-9與LN的表達間存在顯著性負相關性(r=-,P＜)。部分對照組MMP-9的低表達，推測為其發揮生理作用維持基底膜完整結構。Fox［8］研究認為唇腺組織的上皮細胞具有一定的免疫功能，而在PSS患者的腺體局部免疫失衡的情況下，導管上皮細胞產生MMP-9的增加，LN是MMP-9的作用底物，即MMP-9活性增加，從而導致MMP-9降解其基底膜中的層黏連蛋白，而基底膜借助層黏連蛋白與上皮細胞緊密連接［9］，一旦基底膜結構不完整，二者連接受到影響，導致腺體分泌功能受損。推測PSS患者唇腺功能的受損有MMP-9與LN的參與。

本研究結果提示，MMP-9、LN在PSS患者唇腺組織中存在異常表達，并且二者的表達情況與病理分級相關，而檢測原發性干燥綜合征患者唇腺組織中MMP-9、LN的表達變化，可以預測病變，為臨床實施積極的干預措施提供實驗室依據。

【參考文獻】

［1］張乃崢.臨床風濕病學［M］.上海:上海科學技術出版社，

［2］ZuckerS,CaoJ，Chenappraisalofmatrixmetalloproteinaseinhibitorsincancertreatment［J］.Oncogene,2000,19:6642-6650.

［3］KerkelaE,Saarialho-keremetalloproteinaseintumorprogression:focusonbasalandsquamouscellskincancer［J］.ExpDermatol,2003,12:109-125.

［4］董怡.2002年修訂的干燥綜合征國際分類(診斷)標準［J］.中華風濕病學雜志，2002,6(4):257.

［5］ChisholmDM，MasonsalivaryglandinSjgren‘sSyndrome［J］.JClinPathol,1968,21:656-660.

［6］唐福林.原發性干燥綜合征的發病機制［J］.中華風濕病學雜志，2000,4:50-53.

［7］LeppertD，WaubantE，GalardyR,etcellgelatio