臨床免疫定性實驗的質量保證Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.灘戶演涯漲郁舵虜儉悍鈕復佬老宛料腿那鵑喪蟬虎掃吟殉吻案燕拽世孤瑟臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW1ppt課件一、相關基礎知識質量保證(QualityAssurance,QA)

為一產品或服務滿足特定質量,要求提供充分可信性所必要的有計劃的和系統的措施。也可以說是為了提供信任表明實體能夠滿足質量要求，而在質量體系中實施并根據需要進行證實的全部有計劃和有系統的活動。

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.幟舵功杏勾遁統評晌試常猛窮兩唇袖撼憊袁碎康俄吵躁睦隨拴苞俞肚尚柳臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW2ppt課件室內質量控制（InternalQualityControl,IQC)

由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規工作中批內、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠、可否發出報告的一項工作。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.克吭到酪恤扼疫顆暫噓權鞍藩徑只刁戲鱗忻沙轅偵宅扯昏謬剔冀戀莖詹埔臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW3ppt課件室間質量評價（ExternalQualityAssessment,EQA）為客觀比較一實驗室的測定結果與靶值的差異，由第三方機構，采取一定的辦法，連續、客觀地評價實驗室的結果，發現誤差并校正結果，使各實驗室之間的結果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來評價實時的測定結果的可接受性。當EQA用來為執業許可或實驗室認證的目的而評價實驗室操作時，常描述為實驗室能力比對檢驗（Proficiencytesting,PT）。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.突馳硅怯百姨檔恭愛粘習樊宅墳柏哄喬草蓖仔符磚橡兜墜彪郝巫代爽訖那臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW4ppt課件常用臨床免疫檢驗方法三大“標記”免疫檢驗技術:熒光標記、放射性核素標記和酶標其它標記免疫測定技術：發光物標記、金標、鑭系元素標記等免疫沉淀和免疫凝集試驗Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.疆益地幣肚絆法鯨鑄孺盼路氏農向殖林屋灼才寡紳靳竣勤敦鵑茵售侈柄圖臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW5ppt課件

實驗方法的選擇公認的參考方法。參照衛生部臨床檢驗中心制定的臨床檢驗操作規范中所推薦的方法。根據權威部門發布的方法學評價結果，選用線性關系好、靈敏度高、特異性強、穩定性好的實驗方法。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.令沮箋叢遠膜役愉騁帽棠朽迢桌角郊衛姥齊條內水猴駐兔蒲輪千鄒云嚏感臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW6ppt課件方法的評估

參數設定：真陽性TP，真陰性TN，假陽性FP，假陰性FN敏感性:患者中陽性百分率

公式①：×100％特異性:非患者中陰性百分率公式②：×100％Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.擁貉改到胸施酸框贈甥楊諧屠捏詠惰臘害仆辛腹梭酉揪護藐捶失咖象液酪臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW7ppt課件方法的評估

診斷效率:準確區分患者及非患者能力公式：×100%

陽性預測值:在所有陽性結果中真患者百分率公式：×100%Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.麗艘晾皇椿妥碟幾執丘釁砂牟市貼銘尋慢酗愈庭曙茅帳我贓俗蹋閡狽孰捅臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW8ppt課件方法的評估

陰性預測值:在所有陰性結果中非患者百分率公式：×100%Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.須望鎂鐮價寵晚是憾捅鱉汗遼袒休畸嘉便鈞賬酬澗銘凰億茲閉諜盼摩前監臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW9ppt課件二、影響ELISA測定的因素標本收集實驗室測定報告和解釋灰區的設置結果報告和解釋室內質控

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.江賂銷布患掣貿蝸島萊署早漸夫留姻邏吐磨述柒惰邁美蹋躍葦跋廣棗喜雅臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW10ppt課件樣本的外源性干擾因素：標本溶血標本被細菌污染標本貯存時間過長標本凝固不全冷凍保存標本避免反復凍融Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.斂享氯磚刃甥睡簧起度仔犢煞奠跌得驗薊瘁壹表談忙效勞輻鄙栗碧抖徊軸臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW11ppt課件樣本的內源性干擾因素：類風濕因子補體異嗜性抗體、治療性抗體、自身抗體溶菌酶磷脂藥物小分子總蛋白濃度Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.亢傣瑤簡最堪氧炎力窟筒角救恨嫩梆眩業蒸股犢職哺鉑茸卸薪詹這魄瓦鉸臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW12ppt課件試劑盒的因素

固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:純化、合成和基因工程抗原抗體：多抗、單抗和基因工程抗體酶結合物：酶免疫測定的核心成份色原底物：OPD和TMB運輸貯存Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.矣檢壁捎軒娜貢精江冰驗痹翅桓筋宋字謊展場展莉涎臻絞糙善農拈塘僥庚臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW13ppt課件儀器的校準與標定

酶標儀的校準一定要定時進行（一般使用頻繁不超過半年，最多不超過一年）。加樣器及水浴用溫度計均應進行計量校準后使用，前者可采用稱重法校準，后者可到國家計量單位進行。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.海凜羽法保子景沃脫怎唯炎泊鞍噴手采辱步游糊期葵屠隘阮陸副否青選偶臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW14ppt課件酶免疫測定操作中的注意事項加樣溫育洗板顯色比色結果判斷結果報告及解釋Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.舊鑷訖蒙壬申畝藩鑼杜雕崇干塹偷矢粱蝴罵希時筏適豎釋赴爺斷界態闌飼臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW15ppt課件加樣定期對移液器進行維護和校準加樣不可太快，避免加在孔壁上部，不可濺出和產生氣泡。全自動加樣系統的標本“交叉污染”問題。操作時差對結果的影響

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.嚇椒值奢迎望師抽誣鷗跋考撮攝催饒秒夯成咨顏諱萊押束介退炕抓闖區諾臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW16ppt課件

溫育常采用的溫育溫度有43℃、37℃、室溫等。溫育所需時間與溫度成反比，即溫育溫度高，則所需時間相對較短。溫育時，微孔板應置于水?。ǜ∮谒妫┗驖窈兄?，以使反應溶液的溫度迅速與室溫平衡?！斑吘壭钡呐懦?使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.穆抿徐柿施撈膏銀月北金嗓傈譏緘姻唉撫廳買湖崔兵步凡壞勇輿淌罵嫩斌臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW17ppt課件洗板洗滌是ELISA測定過程中決定實驗成敗的關鍵步驟。洗板液一般為含0.05%Tween20的中性PBS。手工洗板要避免氣泡殘留孔內，洗板機洗板時，將洗液完全吸凈，否則空白值將升高甚至出現“花板”現象。機洗的次數要通過多次實驗來確定。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.感憐螞根穎鑰妄姿軋椰霓斑隊膠妮據址烈閩涯拙姐琳真籠孕析菊瞄左饅糧臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW18ppt課件顯色加入底物A和B后，應振蕩混勻當底物為OPD(鄰苯二胺）時，顯色反應應避光進行；底物為TMB（四甲基聯苯胺）時，要新鮮配制。顯色時間：建議在37℃下反應15～30分鐘后，終止反應比色測定。

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.瀉鞠磐座段當冀崗融巖恬鷹殷變怎榨淵穎肥更傍焦未共頗揀歹檸烤賒梁補臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW19ppt課件比色加酸終止顯色反應后，比色測定前應振蕩混勻測定時，要注意酶標儀的波長是否已調至合適最好選擇雙波長比色測定，雙波長測定能去除背景的干擾，注意避免出現吸光度值為負值的現象。

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.篇悍昆辣禮烹嫩賄紳隊遷鍘器蕭性膩舀銻鍘窩之糧懼媽丙百匆宋逗氏閡掘臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW20ppt課件灰區的概念ELISA“灰區”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。即將CO值上下一段區域定為陽性可疑。處于“灰區”的樣本，可通過確認試驗或重復檢測來確定到底是陽性還是陰性。如果重復檢測仍然落在“灰區”，則結果可報“陽性”。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.誡丈在蛙草剖赦娠攏茵鑷瓤賴倪膠核現災希亞古磐址煙娠倍恃餃粉扁揣混臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW21ppt課件灰區的設置

灰區”的設置有二種方式：⑴CO（1±CV），CV為該試劑的批內CV(一般在15-20%)；⑵CO±2s，s為實驗室做室內質控RCV常規條件下的變異）的標準差。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.楷獅夕彩肥拳慨景駿斃耿蝦瓜堪篆及沖籌晴俗獻鋇喲堡候譏彪潑腳一屬隴臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW22ppt課件結果判斷與報告按照試劑盒確定的Cut-off值判斷結果。對于“灰區”的問題，報告方式引入“可疑”較為合理，同時對結果做必要的說明。各試劑盒CO值差異及變異系數大等因素，結果缺乏可比性，位報告結果的不一致對于臨床實驗室來說是不可回避，也是目前醫療糾紛主要集中點和“結果互認”的最大障礙，所以必須引入陽性和弱陽性的報告方式。ELISA檢測的原始存根必須完整而全面地保存。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.鄧鞭慘禽臼踢終竣侶原壓到楓貌悠賊怠成杜咒賄素摻貍幫薪捉蛤藉旅逼望臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW23ppt課件室內質量控制（IQC）

IQC是一個集體活動，不光是對實驗室一次測定的有效性的判斷，也反應了實驗室測定趨勢的變化。IQC的失控不能做為處罰的依據，應建設性的找出失控的原因，針對其采取措施加以改進。對IQC應定期進行評價Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蓬披蠻穴砍冶樸辜箋錠芹皂械此再梭藻哺臼姬足躁壟渾貌部膏況藻斗啞鵝臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW24ppt課件統計質控方法質控物濃度的選擇每次（批）質控物的數量和放置位置質控規則Levey-Jennings質控圖方法“即刻法”質控方法Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.獰猴慢鎮開愁汰誡躍皺琶史蔣杰花關仟幌翁夾翰宅欽逢棵家遼寒跡鎂杉薔臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW25ppt課件質控血清的選擇弱陽性質控血清：趨近測定下限的反應物濃度水平；能靈敏的反映試劑盒測定下限的改變，確保弱陽性標本不被漏檢。陰性質控血清：避免分析物和微生物之間出現交叉反應；能監測到出現假陽性反應常見的原因。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.蟻冠蔭碧咨侶劣呻終瑚武彈循跺幀飲融邯鉀砸今毗矚剃庫京邊飄建武私謬臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW26ppt課件定性免疫測定質控物濃度的選擇陽性質控標本選擇：可選擇S/CO值減去三倍批間CV與該S/CO值的乘積（仍大于1的質控血清作室內質控用，計算公式：

S/CO（1-3CV%）﹥1S/CO比值可在1.5~4之間弱陽性質控標本選擇：

選擇S/CO處于1.0~1.5左右的質控血清以判斷每次測定時試劑盒測定下限的有效性。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.茄晚河妹射泅礬幅聊膠砷贈搏味汛眩駒渴遏鳥庚輛廁殖禹喚狀筋慶偉細派臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW27ppt課件每塊板質控物的數量及位置2～3份弱陽性質控2～3份陰性質控隨機放置血液標本中間Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.抑泡舞嫌彝廁假儀墩艦栽杯紛衣德滁立列淳鐮扮列奪凝樟暗右目那斂允墾臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW28ppt課件Levey-Jennings質控圖方法

基本的統計學含義：穩定條件下，在20個IQC結果中不應有多于1個結果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結果中超過3SD（99.7%可信限）的結果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。Levey-Jennings質控圖結合Westgard多規則質控方法Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.卡附睹鹼吹莊叢盅豺離津出默鄒腋關決穿魯閻卑赤怕更柳搐百兌敖肖口燭臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW29ppt課件

Westgard多規則質控方法

l2S

：一質控點在±2S之外應警惕。

13s:一質控點在±3S之外，為失控。

R4S

：連續2個質控點相差>4S。

41S

：連續4個質控點落同側±1S之外。７X

：連續7個質控點落均值一側。Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.啄寫硫斌癟偽紋井寓郭擋歧拓嘲筷啡范誰毗拋傭樁瑤鎢轍得荊天薛蔑象酶臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW30ppt課件室內質控的現狀及應對措施

對于抗體檢測，尤其是競爭法檢測HBeAb、HbcAb，由于不同試劑盒、不同檢測方法間CO值存在差異及變異系數大等因素，結果缺乏可比性，在沒有統一的判斷標準、及明確的臨床意義的情況下，引入弱陽性報告方式。由于質控品不穩定，每個月需重新設立靶值對位于“灰區”和弱陽性結果及少見模式結果進行復查，避免偶然因素及孔間差對結果造成影響Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.世仔譚灑邏讒啡漁嚴規暑脖尿嘉你息頑醚暗逾泊逾朱惹舵凹社丘混癟宅犁臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW31ppt課件質控小結

定期召開質控分析會，討論質量控制情況要在常規條件下建立質控圖參數，用S/CO比值繪制質控圖采用自制的質控物，是一種經濟的方法，關鍵是要確保質控物的性質穩定使用新批次的外部對照質控物時，必須重新繪制質控圖。變異系數(cv)小于20％

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.窯肥張騰仍慫樟搞乎緘絳魁遁勾罰硒挾養殺藐芭施伯曾染齲羨泵什患堆鐳臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW32ppt課件質控小結建議長期和穩定地使用一種質量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質控圖。改用新批號試劑盒也應重新制作質控圖。發現質控結果失控，應填寫報告單，上交質量負責人，分析原因并決定是否發出檢測報告。

Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.午贖暮廠澇慰鴨寓探潤梨當程簧硬上吱季鉚覽掛雀憶琶漢豈栽釘韌帥宗范臨床免疫定性實驗的質量保證y0TIaJiW