78株銅綠假單胞菌耐藥分析

【摘要】目的了解銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)臨床分離株的耐藥現(xiàn)狀，指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。方法采用美國德靈公司MicroscanAutoscan-4鑒定儀進(jìn)行菌株鑒定及藥敏試驗(yàn)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果78株銅綠假單胞菌對(duì)抗生素前5位的耐藥率分別為頭孢曲松%、頭孢噻肟%、氨曲南%、哌拉西林/他唑巴坦%、頭孢吡肟%。其中5株粘液型銅綠假單胞菌除對(duì)上述抗生素高度敏感，同時(shí)對(duì)復(fù)方新諾明、氨芐青霉素、氨芐青霉素/舒巴坦、頭孢呋辛均敏感。檢出1株全耐藥菌株。結(jié)論銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯類、氨基糖苷類、喹諾酮類、脲基青霉素及其β-內(nèi)酰胺酶抑制復(fù)合劑保持較低的耐藥率。要加強(qiáng)對(duì)粘液型和多重耐藥性銅綠假單胞菌的耐藥監(jiān)測和研究，合理選擇抗菌藥物。

【關(guān)鍵詞】假單胞菌，銅綠；微生物敏感性試驗(yàn)；抗藥性，細(xì)菌

銅綠假單胞菌廣泛存在于自然界中，是一種可引起人類各種感染性疾病的條件致病菌。在一些慢性疾病和免疫功能低下以及侵入性治療或嚴(yán)重創(chuàng)傷的患者中極易罹患該菌感染，是醫(yī)院內(nèi)感染的主要致病菌之一。近年來，由于該菌在醫(yī)院內(nèi)感染中分離率居高、耐藥性廣泛、臨床治療困難，而成為醫(yī)院感染和抗生素耐藥的監(jiān)測重點(diǎn)［1，2］。筆者通過對(duì)我院臨床標(biāo)本分離的78株銅綠假單胞菌耐藥現(xiàn)狀的分析，以指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。

1材料與方法

菌株來源2005年1月～12月我院住院患者送檢標(biāo)本中分離出78株銅綠假單胞菌。78株非重復(fù)分離株銅綠假單胞菌中，下呼吸道標(biāo)本67株，占%，膿液分泌物標(biāo)本8株，占%，血液標(biāo)本1株，占%，尿液標(biāo)本2株，占%。

試驗(yàn)方法所有菌株經(jīng)常規(guī)分離培養(yǎng)后，用美國德靈公司DadeMicroscanAutoscan-4自動(dòng)分析系統(tǒng)及配套試劑NC21鑒定/藥敏復(fù)合板，進(jìn)行菌株鑒定及藥敏試驗(yàn)。并根據(jù)2002年版NCCLS文件標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行抗生素敏感性判斷。20種抗生素分別為：頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、亞胺培南、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨芐青霉素、氨芐青霉素/舒巴坦、復(fù)方磺胺、環(huán)丙沙星、慶大霉素、阿米卡星、妥布霉素。標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853。

統(tǒng)計(jì)方法藥敏試驗(yàn)結(jié)果用WHONET5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果

對(duì)NC21鑒定/藥敏復(fù)合板上20種抗生素的監(jiān)測結(jié)果所有檢測菌株對(duì)頭孢唑啉、頭孢噻吩、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟均耐藥；對(duì)12種抗假單胞菌抗生素的藥敏結(jié)果，見表1。

粘液型銅綠假單胞菌在78株銅綠假單胞菌中，有5株為粘液型。均來自慢性支氣管炎、支氣管擴(kuò)張并感染的患者，并在多次送檢標(biāo)本中重復(fù)檢出。這5例菌株表現(xiàn)為對(duì)12種抗假單胞菌的抗生素高度敏感，同時(shí)對(duì)復(fù)方新諾明、氨芐青霉素、氨芐青霉素/舒巴坦、頭孢呋肟辛均敏感。

表178株銅綠假單胞菌對(duì)12種抗生素的藥敏結(jié)果

特殊菌株從1例痰標(biāo)本中檢出一株對(duì)上述試驗(yàn)中所有抗生素均耐藥的銅綠假單胞菌。

3討論

銅綠假單胞菌的耐藥率78株銅綠假單胞菌對(duì)頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢西丁、頭孢泊肟等藥物均耐藥，與有關(guān)資料報(bào)道呈天然耐藥一致［3］。

對(duì)12種抗假單胞菌藥物的耐藥率分別為頭孢他啶%、頭孢噻肟%、頭孢曲松%、頭孢吡肟%、亞胺培南%、氨曲南%、哌拉西林%、哌拉西林/他唑巴坦%、環(huán)丙沙星%、慶大霉素%、阿米卡星%、妥布霉素%。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，本院銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯類、氨基糖苷類、喹諾酮類、脲基青霉素及其β-內(nèi)酰胺酶抑制復(fù)合劑保持較低的耐藥率，但三代頭孢菌素的耐藥率高于國家細(xì)菌耐藥監(jiān)測研究組2001年、2002年的統(tǒng)計(jì)結(jié)果［2，4］。三代頭孢菌素中，頭孢他啶的耐藥率較低，但頭孢曲松、頭孢噻肟耐藥率較高，特別是頭孢噻肟中介率高達(dá)%。氨曲南的耐藥率也較高。

耐藥原因據(jù)有關(guān)研究報(bào)道［5，6］攜帶各種β內(nèi)酰胺酶編碼基因(廣譜或超廣譜β內(nèi)酰胺酶如TEM、SHV及OXA型酶、AmpC酶、金屬β內(nèi)酰胺酶等)和(或)外膜通道蛋白o(hù)prD2基因缺失是導(dǎo)致銅綠假單胞菌對(duì)β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的重要原因。耐藥株產(chǎn)生的β內(nèi)酰胺酶以AmpC和(或)ESBLs為主，其AmpC基因和調(diào)控基因AmpR、AmpD及AmpE與標(biāo)準(zhǔn)菌株染色體介導(dǎo)的AmpC酶基因及氨基酸序列具有%～%同源性。由于AmpC酶是一類可被β-內(nèi)酰胺類抗生素誘導(dǎo)的頭孢菌素酶，因此，頭孢曲松、頭孢噻肟、氨曲南的高耐藥率，除細(xì)菌本身的生物學(xué)特征外，還可能與第三代頭孢菌素在臨床作為抗感染的一線藥物廣泛應(yīng)用，而導(dǎo)致銅綠假單胞菌產(chǎn)生高水平、染色體介導(dǎo)的AmpC酶有關(guān)。

在我們的統(tǒng)計(jì)中值得注意的是，哌拉西林耐藥率為%、哌拉西林/他唑巴坦耐藥率為%。這可能與他唑巴坦對(duì)假單胞菌無抑制作用，反而可誘導(dǎo)產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶有關(guān)。

另外，78株銅綠假單胞菌中，有5株為粘液型，均來自慢性支氣管炎、支氣管擴(kuò)張并感染患者的痰液標(biāo)本。這5株粘液型銅綠假單胞菌的體外藥敏試驗(yàn)對(duì)12種抗假單胞菌的抗生素高度敏感，同時(shí)對(duì)復(fù)方新諾明、氨芐青霉素、氨芐青霉素/舒巴坦、頭孢呋辛均敏感。而其余73株非粘液型銅綠假單胞菌對(duì)上述藥物均耐藥，與文獻(xiàn)報(bào)道呈天然耐藥一致［3］。這一現(xiàn)象是否與粘液型銅綠假單胞菌形成生物膜有關(guān)，有待于進(jìn)一步的研究。雖然體外藥敏試驗(yàn)顯示粘液型銅綠假單胞菌對(duì)多種生素高度敏感，但由于生物被膜有很強(qiáng)的耐藥作用［7，8］，可以保護(hù)細(xì)菌逃逸宿主免疫和抗菌藥物的殺傷作用，使治療更為困難。

我們從78株檢測菌株中，檢出1株對(duì)上述試驗(yàn)中所有抗生素均耐藥的銅綠假單胞菌。由于銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)理非常復(fù)雜，它幾乎包括了現(xiàn)在已知的所有耐藥機(jī)理［9］。其對(duì)不同抗生素的耐藥機(jī)理各不相同，且往往是幾種耐藥機(jī)理共同起作用，使其對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥。這種“全耐藥菌株”將給臨床抗感染治療造成極大的困難，應(yīng)引起臨床和實(shí)驗(yàn)室的共同關(guān)注。

因此，為了減少或減緩耐藥菌株的產(chǎn)生和阻止其傳播，必須加強(qiáng)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測，開展耐藥機(jī)理的試驗(yàn)室檢測，指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物。

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