第四章藥物分析方法驗證演示文稿當前第1頁\共有61頁\編于星期六\18點優(yōu)選第四章藥物分析方法驗證當前第2頁\共有61頁\編于星期六\18點第一節(jié)

定量分析樣品的前處理方法概述不經(jīng)有機破壞的分析方法經(jīng)有機破壞的分析方法前處理：特殊分析對象的前處理：藥物制劑、生物樣品

特殊藥物成分的前處理當前第3頁\共有61頁\編于星期六\18點概述前處理的目的：將特定原子或離子從藥物中分離出來，轉變?yōu)檫m合分析狀態(tài)適用藥物對象：含金屬元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含鹵素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前處理方法：依據(jù)待測元素在藥物分子中結合的牢固程度，各有不同當前第4頁\共有61頁\編于星期六\18點

泛影酸碘番酸

三氯叔丁醇磺溴酞鈉Organichalides（有機鹵化物）當前第5頁\共有61頁\編于星期六\18點

酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵

卡巴胂Organicmetal-containingdrugs（有機金屬化物）當前第6頁\共有61頁\編于星期六\18點概述前處理的目的：將特定原子或離子從藥物中分離出來，轉變?yōu)檫m合分析狀態(tài)適用藥物對象：含金屬元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含鹵素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前處理方法：依據(jù)待測元素在藥物分子中結合的牢固程度，各有不同當前第7頁\共有61頁\編于星期六\18點不經(jīng)有機破壞的分析方法

適用于：所含金屬離子或待測元素易于解離的藥物常用前處理方法：直接測定法經(jīng)水解后測定法經(jīng)還原分解后測定法常用測定方法：配位滴定，氧化還原滴定，沉淀滴定當前第8頁\共有61頁\編于星期六\18點直接測定的分析方法－－應用示例葡萄糖酸銻鈉的測定

取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定的結果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當于6.088mg的Sb。當前第9頁\共有61頁\編于星期六\18點經(jīng)水解后測定法－－分析示例三氯叔丁醇的測定原理三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。當前第10頁\共有61頁\編于星期六\18點當前第11頁\共有61頁\編于星期六\18點不經(jīng)有機破壞的分析方法

適用于：所含金屬離子或待測元素易于解離的藥物常用前處理方法：直接測定法經(jīng)水解后測定法經(jīng)還原分解后測定法常用測定方法：配位滴定，氧化還原滴定，沉淀滴定當前第12頁\共有61頁\編于星期六\18點經(jīng)有機破壞的分析方法適用于原子與碳原子結合牢固的藥物濕法破壞

(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等)干法破壞當前第13頁\共有61頁\編于星期六\18點濕法破壞－－凱氏定氮法凱氏定氮法（Kjeldahlmethod，）是一種常用的確定有機化合物中氮含量的檢測方法。這種方法是由凱耶達爾在1883年發(fā)明的。凱氏定氮法的普遍適用性、精確性和可重復性已經(jīng)得到了國際的廣泛認可。它已經(jīng)被確定為檢測食品中蛋白質含量的標準方法。

當前第14頁\共有61頁\編于星期六\18點樣本的分解：蛋白質+H2SO4→(NH4)2SO4(aq)+CO2(g)+SO2(g)+H2O(g)銨鹽的分解：(NH4)2SO4(aq)+2NaOH→Na2SO4(aq)+2H2O(l)+2NH3(g)氨的固定：B(OH)3+H2O+NH3→NH4++B(OH)4–

返滴定：2NH4++2B(OH)4–

+H2SO4→（NH4)2SO4+2B(OH)3+2H2O當前第15頁\共有61頁\編于星期六\18點凱氏定氮法（kjeldahlnitrogendetermination）儀器裝置

凱氏燒瓶：為30~50ml（半微量法）或500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬質茄形燒瓶蒸餾裝置（半微量法）：1000ml的圓底燒瓶（A）、安全瓶（B）、連有氮氣球的蒸餾器（C）、漏斗（D）、直形冷凝管（E）、100ml錐形瓶（F）橡皮管夾（G、H）當前第16頁\共有61頁\編于星期六\18點當前第17頁\共有61頁\編于星期六\18點注意通過凱氏定氮法測得的含氮量一般被稱作總凱氮量。總凱氮量有時并不能真正地反映樣本中的蛋白質含量，因為所測定的部分含氮量可能不是由蛋白質轉化來的。如今，凱氏定氮法已經(jīng)可以自動化進行，一些催化劑（如氧化汞或硫酸銅）也被使用來提高反應速率。當前第18頁\共有61頁\編于星期六\18點干法破壞

干法破壞法適用于濕法不易破壞完全的有機物（如含氮雜環(huán)類有機物）以及某些不能用硫酸進行破壞的有機藥物。

氧瓶燃燒破壞氧瓶燃燒法系將有機藥物在氧氣中燃燒，燃燒產(chǎn)物被吸收液吸收后，采用適宜的分析方法進行鑒別、檢查或含量測定，該法適用于含鹵素或含硫、磷、硒等有機藥物分析的前處理。

當前第19頁\共有61頁\編于星期六\18點氧瓶燃燒法

原理：氧瓶燃燒法系將有機藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質吸收于適當?shù)奈找褐校缓蟾鶕?jù)欲測物質的性質，采用適宜的分析方法進行鑒別、檢查或含量測定。適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機藥物的分析。當前第20頁\共有61頁\編于星期六\18點當前第21頁\共有61頁\編于星期六\18點氧瓶燃燒法②稱樣用材料及稱樣

A.固體樣品無灰濾紙

B.液體樣品紙袋

C.軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴密，外層再用無灰濾紙包裹當前第22頁\共有61頁\編于星期六\18點③氧氣④吸收液作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)。當前第23頁\共有61頁\編于星期六\18點氧瓶燃燒法樣品

吸收液測定方法FH2O茜素氟藍分光光度法

ClNaOH溶液

銀量法、汞量法

BrSO2-NaOH液或NaOH液-硫酸肼飽和液銀量法、分光法INaOH液硫酸肼飽和液

銀量法、碘量法、汞量法、分光法當前第24頁\共有61頁\編于星期六\18點第二節(jié)定量分析方法的特點容量分析法光譜分析法 色譜分析法當前第25頁\共有61頁\編于星期六\18點含量測定的表述方式原料藥：原料藥的百分含量

W測定量/W稱取量×100%藥物制劑：表示量的百分含量

W測定的每片主成分含量/W標示的每片主成分含量×100%W測定的每片主成分含量：實際測定時取10-20片計算平均片重、混合均勻后測定平均每片的主成分含量當前第26頁\共有61頁\編于星期六\18點容量分析法容量分析法：用已知濃度的標準溶液，滴定一定體積的待測溶液，直到化學反應完全為止，到達終點，根據(jù)標準溶液的體積和濃度計算待測物質含量的方法。特點：簡便，快速，準確度高，專屬性較差（化學原料藥分析）當前第27頁\共有61頁\編于星期六\18點容量分析法滴定度 每1ml標準滴定液相當待測物的mg數(shù)。滴定度計算當前第28頁\共有61頁\編于星期六\18點容量分析法直接滴定法的結果計算V為滴定液的消耗體積(ml)；T為滴定度；W為供試品的稱樣量(g)；10－3為質量換算因數(shù)(1mg等于10－3g)；F為滴定液的濃度校正因數(shù)。當前第29頁\共有61頁\編于星期六\18點精密稱取阿司匹林0.3972g，用氫氧化鈉（0.1021mol/L）滴定,消耗反應體積21.35ml。計算每1ml標準氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的滴定度，以及阿司匹林的含量。（分子式C9H8O4

分子量180.2）當前第30頁\共有61頁\編于星期六\18點取司可巴比妥鈉膠囊（標示量為0.1g）20粒，除去囊殼后測得內容物總重為3.0780g，稱取0.1536g，按藥典規(guī)定用溴量法測定。加入溴液（0.05mol/L）25mL，剩余的溴液用硫代硫酸鈉液（0.1025mol/L）滴定到終點時，用去17.94mL。空白試驗用去硫代硫酸鈉液25.00mL。按每1mL溴液（0.05mol/L）相當13.01mg的司可巴比妥鈉，計算該膠囊標示量百分含量。（注：溴與硫代硫酸鈉反應摩爾比為1：2）當前第31頁\共有61頁\編于星期六\18點光譜分析法

光譜分析法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的吸光度或發(fā)光強度，對該物質進行定性、定量分析的方法。單色光穿過吸光物質溶液時，在一定的濃度范圍內，被該物質吸收的光量與該物質溶液的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比。其關系式如下：

當前第32頁\共有61頁\編于星期六\18點取標示量為25mg的鹽酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密稱定，總重量為2.4120g，研細，精密稱量片粉0.2368g，置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在254nm波長處測得吸收度為0.435，按百分吸收系數(shù)為915計算，求其標示量百分含量？(10分)當前第33頁\共有61頁\編于星期六\18點紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法用于藥物含量測定的方法有三種：1對照品比較法分別配制供試品和對照品溶液，在規(guī)定波長處分別測定吸光度，按下式計算供試品溶液中被測組分的濃度。CX=（AX/AR）CR

2吸收系數(shù)法按各品種項下方法，配制供試品溶液，在規(guī)定波長處測定其吸光度，再根據(jù)吸收系數(shù)按下式計算供試品溶液的濃度。

當前第34頁\共有61頁\編于星期六\18點紫外-可見分光光度法3比色法

供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當?shù)娘@色劑顯色后測定用比色法測定時，由于顯色時影響的因素較多，應取供試品與對照品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的試劑，并用同樣方法處理，在規(guī)定的波長處測定吸光度后，按對照品比較法公式計算供試品溶液的濃度。

當前第35頁\共有61頁\編于星期六\18點色譜法色譜法（chromatography）是利用混合物不同組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)（或吸附系數(shù)、滲透性等），當兩相作相對運動時，不同組分在兩相中進行多次反復分配實現(xiàn)分離后，通過檢測器得以檢測，進行定性定量分析。當前第36頁\共有61頁\編于星期六\18點色譜系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗指用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進行試驗和調整，應達到的要求。（一）色譜柱的理論板數(shù)（n）在選定的色譜條件下，測定主成分或內標物色譜峰的保留時間（tR）和半峰寬（W1/2），按塔板理論公式計算色譜柱的理論板數(shù)。如果測得的理論板數(shù)低于各品種項下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱填充的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達到要求。當前第37頁\共有61頁\編于星期六\18點（二）分離度（R）定量分析時，為便于準確測量，要求定量峰與其他峰或內標峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定外，分離度應大于1.5。（三）重復性取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5次， 除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標準 偏差應不大于2.0%。當前第38頁\共有61頁\編于星期六\18點（四）拖尾因子為保證測量精度，特別當采用峰高法測量時，應檢查待測峰的拖尾因子是否符合各種項下的規(guī)定。拖尾因子（T）以下式計算：除另有規(guī)定外，T應在0.95～1.05之間。當前第39頁\共有61頁\編于星期六\18點第三節(jié)藥品分析方法的驗證

一、目的

證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求，方法驗證過程和結果均應記載在藥品標準起草和修訂說明中。

當前第40頁\共有61頁\編于星期六\18點二、用途1、藥品質量標準起草時，分析方法需經(jīng)驗證。2、藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，分析方法需經(jīng)驗證。當前第41頁\共有61頁\編于星期六\18點三、需驗證的分析項目1.鑒別試驗；2.雜質定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等 的測試方法。當前第42頁\共有61頁\編于星期六\18點驗證內容有：

準確度、 精密度（重復性、中間精密度和重現(xiàn)性）、

專屬性、 檢測限、 定量限、 線性、 范圍和耐用性四、驗證內容

當前第43頁\共有61頁\編于星期六\18點

（一）準確度（accuracy）

準確度是指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

原料藥可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。當前第44頁\共有61頁\編于星期六\18點

制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定。當前第45頁\共有61頁\編于星期六\18點

回收試驗空白+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M當前第46頁\共有61頁\編于星期六\18點

加樣回收試驗

已準確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M當前第47頁\共有61頁\編于星期六\18點數(shù)據(jù)要求

規(guī)定的范圍內，至少用9次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次。當前第48頁\共有61頁\編于星期六\18點

（二）精密度（precision）

精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。用偏差（d）、標準偏差(SD)、相對標準偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。當前第49頁\共有61頁\編于星期六\18點相對標準（偏）差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）當前第50頁\共有61頁\編于星期六\18點1.重復性

在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度；在規(guī)定的范圍內，至少用9次測定結果評價，或制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當作100%，至少測6次進行評價。當前第51頁\共有61頁\編于星期六\18點2.中間精密度

同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備所得結果的精密度。考察隨機變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設備當前第52頁\共有61頁\編于星期六\18點3.重現(xiàn)性不同實驗室，不同分析人員測定結果的精密度。當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現(xiàn)性試驗。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗得出重現(xiàn)性結果，協(xié)同檢驗的過程、重現(xiàn)性結果均應記載在起草說明中。

當前第53頁\共有61頁\編于星期六\18點

（三）檢測限（limitofdetection，LOD）