ELISA【樣品制備】取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。注意量少、溶血、脂血、黃疸血，必須在申請單，接收上標明，對于影響很大的，必須委婉拒絕接收【溶血】血液中的紅細胞被破壞，釋放到血中，使血清或血漿呈紅色【脂血】

脂內(nèi)物質(zhì)進入血液中，使血清或血漿呈乳白色【黃疸】huangdan

血清或血漿中膽紅素含量過高，肉眼觀看顯明黃色血清樣品的運輸冷藏離心分離血清血清的保存棄掉血凝塊的血清：冷凍帶血凝塊的血清：冷藏豬瘟抗體ELISA試劑盒

武漢科前動物生物制品有限責任公司試劑盒組成黃色蓋-樣品稀釋液白色蓋-20×洗滌液藍色蓋-酶標二抗棕色-底物液B紅色-底物液A淡藍/白色-終止液陰陽性血清藍色為陰性紅色為陽性抗原包被板和血清稀釋板試劑盒組成（1）抗原包被板2板（96孔/板）

（2）陰性對照血清（藍色蓋子）1管（1ml/管）

（3）陽性對照血清（紅色蓋子）1管（1ml/管）

（4）羊抗豬酶標二抗（藍色蓋子）1瓶（20ml/瓶）

（5）樣品稀釋液（黃色蓋子）1瓶（50ml/瓶）

（6）底物液A（紅色蓋子）1瓶（10ml/瓶）

（7）底物液B（黑色蓋子）1瓶（10ml/瓶）

（8）終止液（藍色蓋子）1瓶（10ml/瓶）

（9）20倍濃縮洗滌液（白色蓋子）1瓶（30ml/瓶）

（10）血清稀釋板2板（96孔/板）

【洗滌液配制】使用前，濃縮的洗滌液應恢復至室溫（25℃），并搖動，使沉淀溶解（最好在37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘），然后用蒸餾水作20倍稀釋（例如：30ml的濃縮洗滌液加上570ml蒸餾水）混勻，稀釋好的洗滌液2～8℃可存放7日。

【樣品稀釋】在血清稀釋板中按1:40的體積稀釋待檢血清樣品（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清樣品）。【對照稀釋】

在血清稀釋板中按1:4分別稀釋陽性對照和陰性對照（180μl樣品稀釋液中加60μl對照血清）。

【注意事項】

（1）試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫。使用后放回2~8℃保存。

（2）不同批號的試劑盒組份不得混用，不同試劑使用時應防止交叉污染。

（3）底物液和終止液不能暴露于強光或接觸氧化劑。

（4）待檢血清數(shù)量較多時，應先稀釋完所有待檢血清，再加到抗原包被板上，使反應時間一致。

（5）稀釋20倍濃縮洗滌液時，如發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，應加熱使其溶解后再使用。

（6）移液時，應盡量準確，防止產(chǎn)生氣泡。

（7）應嚴格遵守各操作步驟規(guī)定的時間和溫度。

（8）2~8℃避光保存，有效期為10個月。

【操作步驟】1.取抗原包被板用稀釋好的洗滌液洗板2次；2.將稀釋好的待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清各取100μl加至抗原包被板中，待檢血清設(shè)1孔，陰、陽性對照各設(shè)2孔。輕輕振勻孔中樣品，置37℃下溫育30分鐘。

【操作步驟】3.棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μl，靜置3分鐘后，棄去洗滌液，并在吸水紙上拍干，重復洗滌5次。

4.每孔加羊抗豬酶標二抗100μl，置37℃下溫育30分鐘。

【操作步驟】5.每孔加底物液A50μl、底物液B約50μl，混勻，置室溫（20~25℃）下避光顯色10分鐘。

6.每孔加入終止液50μl，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

在酶標儀上讀各孔OD630nm值。試驗成立的條件是：陽性對照孔OD630nm值均應≥0.6，陰性對照孔OD