專題一基因工程

（第一課時）

學習目標1、通過知識梳理，復習鞏固基因工程的原理和操作程序。2、通過相近概念的比較及針對性練習，掌握本節重難點和易錯點。基因工程

基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，創造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品。（DNA重組技術）一、基本工具1、分子手術刀：限制酶功能：識別DNA分子的________核苷酸序列，使每一條鏈中_______部位的_________鍵斷開。練習：請標出EcoRI、SmaI酶所識別的核苷酸序列，并寫出剪切后形成的末端及其名稱 特定特定磷酸二酯GAATTCCTTAAGGGGCCCCCCGGGEcoRISmal黏末端平末端

EcoRⅠ黏性末端黏性末端SmaⅠ平末端平末端二、基本操作程序1、目的基因的獲取：目的基因：主要指_______________，如生物抗逆性基因獲取方法：_______________、________、___________2、基因表達載體的構建：編碼蛋白質的基因從基因文庫中獲取PCR擴增人工合成質粒目的基因___個切口___個切口重組質粒___種限制性內切酶一一兩DNA連接___________酶表達載體（基因工程的核心）3、將目的基因導入受體細胞轉化：目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持____________的過程。導入方法（連線）：受體細胞動物細胞植物細胞微生物細胞導入方法a.農桿菌轉化法()b.顯微注射法c.基因槍法（）d.感受態細胞法（Ca2+處理法）e.花粉管通道法穩定和表達雙子葉、裸子植物單子葉植物4、目的基因的檢測與鑒定目的基因mRNA蛋白質個體性狀DNA分子雜交分子雜交抗原-抗體雜交抗蟲抗病接種實驗是否出現雜交帶是否出現雜交帶是否抗蟲，是否抗病是否出現雜交帶轉錄翻譯檢測檢測檢測檢測現象現象現象現象個體水平鑒定分子水平檢測（3）如何檢測目的基因是否成功表達？（4）基因工程基本操作程序中哪些步驟需要堿基互補配對？三、易錯點突破：分子水平：是否翻譯----抗原-抗體雜交個體水平：是否具有特定性狀---抗蟲、抗病、抗逆等只有第三步將目的基因導入受體細胞不需要堿基互補配對。（第一步存在逆轉錄法獲得DNA，第二步存在粘性末端連接現象，第四步檢測存在分子水平雜交）2、幾種酶的比較連接兩個DNA片段連接單個脫氧核苷酸使DNA雙鏈互補堿基間的氫鍵斷裂連接單個核糖核苷酸使目的基因或載體有特定末端形成重組DNA分子形成兩條DNA單鏈形成mRNA單鏈3、辨析下列概念（1）、基因文庫、基因組文庫、部分基因文庫、cDNA文庫（2）、啟動子，終止子；起始密碼子、終止密碼子基因文庫基因組文庫部分基因組文庫：cDNA文庫·啟動子、終止子位于DNA上，啟動或終止轉錄。·起始密碼子、終止密碼子位于mRNA上，起始或終止翻譯。綜合練習：1、(2012.山東理綜)

毛角蛋白Ⅱ型中間絲(KIFⅡ)基因與絨山羊的羊絨質量密切相關。獲得轉KIFⅡ基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖。(1)過程①中最常用的運載工具是________，所需要的酶是限制酶和________。(2)在過程②中，用________處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。在培養過程中，將成纖維細胞置于5%CO2的氣體環境中，CO2的作用是______________。質粒DNA連接酶胰蛋白酶和膠原蛋白酶維持培養基的PH值(3)在過程③中，用___________處理以獲取更多的卵(母)細胞。成熟卵(母)細胞在核移植前需要進行_______