發酵之菌種選育第1頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一（二）放線菌（actinomyces）最大的經濟價值在于產生多種抗生素（antibiotic）鏈霉菌（Streptomyces）小單孢菌屬（Micromonospora）第2頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一

（三）霉菌（mould）1.曲霉屬（Aspergillus）黑曲霉（A.niger）米曲霉（A.oryzae）黃曲霉（A.flavus）2.青霉屬（Penicillum）桔青霉（P.citrinum）產生5’－磷酸二酯酶，降解核糖核酸為四個單核苷酸。第3頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一3.根霉屬（Rhizopus）米根霉（R.oryzae）華根霉（R.chinensis）4.紅曲霉屬（Monascus）第4頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一（四）酵母（yeast）酵母屬（Saccharomyces）啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）2.假絲酵母屬（Candida）產朊假絲酵母（Candidautilis）3.畢赤酵母屬（Pichia）第5頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一（五）其它微生物1.擔子菌（basidiomycetes）即菇類（mushroom）2.藻類（alga）第6頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一幾種菌落第7頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一

（六）噬菌體（phage）

危害以細菌和放線菌為生產菌株的發酵工業。第8頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一烈性噬菌體

——引起寄主細胞迅速裂解。受感染的細菌稱敏感性細菌。溫和噬菌體

——隨寄主細胞的繁殖而繁殖。含溫和噬菌體的細菌稱溶原性細菌。第9頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一吸附注入核酸合成核酸和蛋白質釋放裝配第10頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一二、微生物工業對菌種的要求1.原料廉價，生長迅速，目的產物產量高。2.易控制培養條件，發酵周期較短。3.抗雜菌和噬菌體的能力強。4.不易變異和退化，不產生任何有害物質和毒素。第11頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一

第二節工業微生物菌種的選育一、自然選育1.采樣2.增殖培養方法：（1）控制培養基成分（2）控制培養條件（3）抑制不需要的菌類第12頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一3.純種分離（1）劃線法：簡單、快捷。（2）稀釋法：菌落單一均勻。第13頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一固體培養基四區劃法接種法第14頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一接種針先以火焰滅菌法滅菌

步驟一第15頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一輕觸營養平板上無菌的瓊脂處冷卻

步驟二第16頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一以接種針輕觸菌落，使接種針上沾有細菌。

步驟三第17頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一更換一個新的無菌營養平板

步驟四第18頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一將接種針上的細菌劃于一個新的營養平板上。此為第一菌區。步驟五第19頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一重復第一步驟，將接種針以火焰滅菌法滅菌，然后輕觸瓊脂無菌處冷卻。步驟六第20頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一由第五步驟的第一區中劃出第二區，如右上圖。步驟七第21頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一重復第六以及第七步驟，由第七步驟的第二區中劃出第三區，如右上圖。

步驟八第22頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一重復第六以及第七步驟，由第八步驟的第三區中劃出第四區，劃滿剩下的空間。完成后的營養平板，如右上圖。步驟九第23頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一在營養平板上貼好標簽，標示好接種日期、操作者姓名、菌種學名以及培養基名稱。步驟十第24頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一固體培養基的稀釋涂抹接種法第25頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一需要使用的儀器——震蕩機

第26頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一吸取準備好欲稀釋的菌液第27頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一吸取充分均勻后的菌液

第28頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一取含有9mL無菌水之試管，將試管口過火滅菌。將菌液置入，此時試管須做記號為第一次稀釋。第29頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一將試管于震蕩機上，使菌液混合均勻第30頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一取出試管中的第一次十倍稀釋菌液1mL，加入另一個新的含9mL無菌水的試管中。重復此步驟直至所需要的稀釋濃度。

第31頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一從最后稀釋菌液中吸取0.1mL菌液，置入準備好的無菌瓊脂內。第32頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一將三角玻璃棒浸于酒精中

第33頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一將三角玻璃棒在火焰上燃燒（須注意勿使燃燒中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃燒）

第34頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一使用玻璃棒將菌液均勻涂布開來，將培養皿置于恒溫培養箱中隔天觀察菌落數目，再依照稀釋倍數推算出菌液濃度。

第35頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第36頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一4.生產性能的測定一般采用兩步法：初篩：以量為主復篩：以質為主第37頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一二、誘變育種用各種物理、化學的因素人工誘發基因突變。誘變劑：能夠提高生物體突變頻率的物質。誘變劑物理：紫外線，快中子化學：硫酸二乙酯，亞硝基胍{第38頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一誘變育種的主要環節（1）以合適的誘變劑處理細胞懸浮液

——誘變（2）用合適的方法淘汰負效應變異株，選出性能優良的正變異株——篩選第39頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第三節生產菌種的改良一、原生質體融合（protoplastfusion）1.標記菌株的篩選2.原生質體的制備3.原生質體的融合與再生聚乙二醇（PEG）－脫水劑助融劑Ca2+－提高融合頻率4.融合子的選擇第40頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一二、DNA重組技術（DNArecombinationtechnology）目標DNA片斷的獲得與載體DNA分子的連接重組DNA分子引入宿主細胞從中選出所需重組DNA分子的宿主細胞第41頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第四節菌種的衰退、復壯與保藏一、菌種的衰退衰退的原因：1.菌種保藏不當2.菌種生長條件沒有得到滿足第42頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一二、菌種的復壯1.純種分離2.通過寄主體進行復壯3.淘汰已衰退的個體第43頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一三、菌種保藏1.原理低溫、干燥、缺氧、缺營養物質2.方法（1）斜面保藏法（2）干燥保藏法（3）懸液保藏法（4）冷凍干燥保藏法（5）低溫保藏法第44頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第五節種子的擴大培養一、微生物的培養方法1.表面培養2.固體培養3.液體深層培養第45頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第46頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一二、菌種的擴大培養菌種擴大培養的目的：為每次發酵罐的投料提供相當數量的代謝旺盛的種子。

第47頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一

（一）種子制備的工藝流程

搖瓶保藏菌種試管斜面活化茄瓶斜面種子罐固體培養基第48頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第49頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第50頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一搖瓶種子培養發酵培養第51頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第52頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一第53頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一（二）斜面菌種的培養1.不宜多次移種。2.活化斜面中加0.1%葡萄糖。培養基特點：原料較精細。第54頁，共57頁，2023年，2月20日，星期一（三）一級種子培養（搖瓶）培養基特點：

使用的原料基本接近于發酵培養基。第55頁，共57頁，2023年，2月20