流式細胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用1第1頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一白血病分子診斷的意義系統(tǒng)診斷白血病初發(fā)異常標記精確診斷準確預(yù)后指導治療科研資料殘留監(jiān)測靶向治療免疫/遺傳學靶標MICM診斷2第2頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一WHO血液腫瘤新分類實驗技術(shù)平臺實施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細胞、細胞遺傳和分子生物學實驗技術(shù)平臺以及掌握這類實驗技能并具有專業(yè)知識的人員。3第3頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一4第4頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(2008ASHEducationProgramBookp298)

PatientEvaluation

診斷

單克隆蛋白數(shù)量和特征

血清蛋白電泳和免疫球蛋白定量 24小時尿蛋白；總蛋白；本周蛋白

尿和血清免疫固定

血清自由輕鏈和比例

骨髓檢查和骨髓活檢Bonemarrowaspirationandbiopsy

組化

免疫分型-克隆檢定，及通過CD38/CD56/CD19/CD45抗體組合能從90余例患者正常漿細胞中找到檢測殘留MM細胞

終末器官損害評價

全血細胞計數(shù)；生化檢查:血清肌酐和骨鈣測定

預(yù)后評估

球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP

骨髓細胞遺傳學和FISHt(4;14),t(14;16),del17p

針對某些特定患者的特殊研究

5第5頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一傳統(tǒng)流式細胞術(shù)的臨床應(yīng)用細胞計數(shù)：CD4、CD34DNA含量：多倍數(shù)、S期結(jié)果是數(shù)據(jù)、準確性依賴于良好的質(zhì)控傳統(tǒng)流式細胞術(shù)在白血病免疫表型中的應(yīng)用單參“白血病表型”，陽性比率大多數(shù)細胞為腫瘤細胞多為形態(tài)學/細胞化學后的確認數(shù)據(jù)由臨床醫(yī)師判斷高分辨流式細胞的優(yōu)點以多參數(shù)正常抗原表達為基礎(chǔ)結(jié)果類似病理報告用于原發(fā)性診斷與鑒別診斷用于疾病分期，治療選擇療效監(jiān)測，預(yù)后判斷流式細胞術(shù)6第6頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一骨髓-異質(zhì)性系統(tǒng)中的應(yīng)用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列細胞處于連續(xù)性成熟階段必須能涵蓋所有細胞7第7頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一應(yīng)該使用何種抗體？所有抗體必須為標準的商業(yè)化試劑沒有什么“秘密武器”或者專門特異的抗體抗體的聯(lián)合應(yīng)用能使你從有限的標本中得到最大化的信息量對正常抗原表達的正確認識能幫助你有效地鑒別疾病狀態(tài)相關(guān)的改變8第8頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一高分辨流式細胞術(shù)能夠鑒別和分類所有骨髓細胞可以對每一個細胞進行多特征性的檢測并對其相應(yīng)的系列和成熟的階段進行分類至少檢測一萬個細胞，分辨率達到0.5%9第9頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一10第10頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一CD45/SSWood(2004)MethodsCellBiology75:559-57611第11頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一正常粒系成熟模式12第12頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一正常B系成熟Wood(2004)MethodsCellBiology75:559-576第13頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一表達交叉系列的抗原非同步抗原共表達：CD34與CD15、CD11b、CD56、CD14抗原的過度表達：早前B-ALL中CD10抗原表達缺失：泛T抗原易位抗原表達：CSF中TdT+淋巴細胞，骨髓中胸腺發(fā)育階段的T淋巴細胞光散射異常：FSC和SSC白血病相關(guān)的免疫表型特點14第14頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一AML-M015第15頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一AML-M216第16頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一AML-M317第17頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一AML-M418第18頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一AML-M519第19頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一B-ALL20第20頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL21第21頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MALT+GMALT+B22第22頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一AUL23第23頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一B-CLL/SLL24第24頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一HCL25第25頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一大B細胞淋巴瘤26第26頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MM27第27頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一T-ALL28第28頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一NK-LGL29第29頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一報告包括出現(xiàn)或缺乏的異常細胞群異常免疫表型相比正常細胞群的抗原強度增強，減弱，缺失定量層面的判斷相對于全部CD45陽性細胞(WBCs)出現(xiàn)的其它細胞群30第30頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一31第31頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一32TCRVβ克隆第32頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一小結(jié)流式細胞術(shù)有助于血液系統(tǒng)異常疾病的診斷更加確定的診斷排除其他疾病有助于細分亞型更準確的原始細胞辨別和定量有助于預(yù)后判斷治療后監(jiān)測快速33第33頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一免疫表型分析與FAB分型基于不同的參數(shù)對白血病進行分型，兩者的結(jié)果可一致或不一致；對有些病例，尤其是髓系白血病亞型，免疫表型分析并非特異；對于復(fù)雜的病例，需結(jié)合多種檢查，如特異性染色體核型分析或融合基因綜合判斷。34第34頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MRD背景目前由于多種化療藥的聯(lián)合應(yīng)用，使多數(shù)白血病患者可以獲得形態(tài)學的完全緩解（CR）。但多數(shù)患者不能維持長期緩解，仍有相當多的患者再次復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)的主要原因是患者體內(nèi)存在少量的形態(tài)學難以辨認的殘存白血病細胞。如果能夠準確檢測患者體內(nèi)殘存的白血病狀態(tài)，可以有的放矢地進行治療，使患者避免許多不必要的痛苦。35第35頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MRDOutlineofLeukemicDiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flowcytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimaryleukemiaOSChemotherapiesAutoSCTAlloSCTInductionLeukemiccells1012 1010109108107≤106100% 1% 0.1%0.010.001 36第36頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一37第37頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MolecularMeasurementsofTreatmentResponse—ClinicalApplication(2008ASHEducationProgramBookp367)

Application Action

檢測治療早期的反應(yīng)佳 加強治療檢測治療早期的反應(yīng)差

無需加強治療

檢測復(fù)發(fā) 加強治療，準備HSCT

HSCT前MRD評估 優(yōu)化HSCT的時間HSCT后MRD評估 調(diào)整免疫抑制治療時間，等

臨床試驗結(jié)束時的MRD評估 評價新的抗ALL藥物或治療的結(jié)果

38第38頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MRD與預(yù)后當殘存白血病細胞>10-2，3年復(fù)發(fā)率為76-94%10-3<殘存白血病細胞<10-2,3年復(fù)發(fā)率為37-53%殘存白血病細胞<10-3,3年復(fù)發(fā)率為8-20%殘存白血病細胞<10-4,3年無復(fù)發(fā)39第39頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一各種MRD檢測方法檢測殘存白血病細胞的主要依據(jù)是在患者發(fā)病時找到患者的特殊表現(xiàn)，包括遺傳學、分子生物學以及免疫學的特征。這些特征往往是正常血細胞所沒有的，因此可利用這些標志鑒別正常細胞與異常細胞，特異地檢測殘存白血病細胞。評價這些方法的有效性及應(yīng)用性主要依據(jù)該方法的特異性、敏感性、簡單性、重復(fù)性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍體、PCR、FISH是較好的方法。40第40頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一MRD流式分析原則違背正常分化模式診斷時辨別出背離正常發(fā)育階段的免疫表型相對特異的抗原組合隨訪辨別出不同于正常免疫表型的不連續(xù)群體以診斷的免疫表型作為出發(fā)點41第41頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一免疫表型異常適合MRD檢測ALL>95%兒童ALL>90-95%成人ALLAML85%兒童AML80-95%成人AML42第42頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一報告模板43第43頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一病例一AML病例資料：女，3歲，2009.6初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，原始細胞分布區(qū)域可見異常細胞群體，約占有核細胞的26%，主要表達HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴細胞比例降低。提示：急性髓系細胞白血病（AML-M2可能）。基因：AML1/ETO陽性。44第44頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一病例一（續(xù)1）2009.7化療D33：FCM：可見殘留，CD33+CD19+細胞約占0.04%。基因：AML1/ETO陽性。45第45頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一2009.9D70：FCM：未做。基因：AML1/ETO陰性。2010.3D245：FCM：未見免疫表型明顯異常的細胞。基因：AML1/ETO陰性。病例一（續(xù)2）46第46頁，共48頁，2023年，2月20日，星期一病例二B-ALL病例資料：男，3歲，2007.3初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，CD45弱表達分布區(qū)域可見異常細胞群體，約占有核細胞的45%，表達HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴細胞白血病（普通型B-ALL）