乙肝丙肝核酸檢測的新平臺臨床詳解演示文稿現在是1頁\一共有27頁\編輯于星期六（優選）乙肝丙肝核酸檢測的新平臺臨床現在是2頁\一共有27頁\編輯于星期六目前乙肝和丙肝臨床治療過程中遇到的主要問題治療終點無法準確判定有些病人經一段時間治療后DNA/RNA檢測結果忽陰忽陽，但臨床癥狀依然明顯不能及時預測耐藥（病毒學突破）核苷（酸）類似物治療后病毒DNA/RNA快速下降至檢測限以下，不久卻發現病毒出現反跳療效的準確監測？？？治療后12或24周病毒DNA/RNA下降幅度直接決定預后問題的根源在哪里？現在是3頁\一共有27頁\編輯于星期六內容HBV核酸檢測的現狀與需要HCV核酸檢測的現狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結現在是4頁\一共有27頁\編輯于星期六HBVDNA監測在抗病毒治療中的臨床應用HBVDNA是監測抗病毒治療響應和時間的關鍵標志物HBV治療的路線圖理念，為HBVDNA監測用于臨床實踐提供了指導對用藥耐藥性的監測（拉米夫定－YMDD，…）肝移植HBV復發風險的降低（術前，術后）……現在是5頁\一共有27頁\編輯于星期六HBVDNA監測的臨床應用HBV治療路線圖

KeeffeE.ClinGastroHepatology2007;5:890-897.侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治療方案優化，中國肝臟病雜志現在是6頁\一共有27頁\編輯于星期六國產試劑現狀目前使用的國產試劑能解決的問題，不能解決的問題：HBV試劑盒說明：500～5×107IU/mL較可信的測試范圍：104～5×107IU/mL對部分發生HBV病毒突變的病人無法準確檢測注：1IU/mL=1copy/mL現在是7頁\一共有27頁\編輯于星期六內容HBV核酸檢測的現狀與需要HCV核酸檢測的現狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結現在是8頁\一共有27頁\編輯于星期六HCVDNA監測在抗病毒治療中的臨床應用HCV病毒感染是可治愈的疾病HCVRNA檢測可以有效指導臨床用藥治療的終點是核酸檢測為陰性（核酸檢測可以直接指導停藥時機）現在是9頁\一共有27頁\編輯于星期六慢性HCV治療方案治療應答名稱描述快速病毒學應答（RVR）4周時未檢測到HCVRNA早期病毒學應答（EVR）-完全早期病毒學應答（cEVR）未RVR，但12周時未檢測到HCVRNA-部分早期病毒學應答（pEVR）未RVR，12周時HCVRNA拷貝數下降≥2log10，但仍檢測到HCVRNA沒有應答12周時HCVRNA拷貝數下降<2log10治療結束（EOT）治療結束未檢測到HCVRNA持續病毒學應答（SVR）治療結束后24周，未檢測到HCVRNA反彈治療期間曾有HCVRNA低于檢出限，但尚未停藥即出現HCVRNA重新升高復發治療期間HCVRNA低于檢出限，但治療結束（停藥）后HCVRNA重新升高現在是10頁\一共有27頁\編輯于星期六慢性HCV治療方案用藥12周早期病毒學反應HCVRNA下降<2logHCV病毒檢測陰性HCV病毒檢測陽性停藥HCV病毒檢測陰性治療到24周HCVRNA檢測HCVRNA下降>2log繼續治療至48周繼續治療至24周考慮停藥現在是11頁\一共有27頁\編輯于星期六國產試劑現狀目前使用的國產試劑能解決的問題，不能解決的問題：HCV試劑盒說明：500～5×107IU/mL較可信的測試范圍：104～5×107IU/mL注：1IU/mL=1copy/mL現在是12頁\一共有27頁\編輯于星期六內容HBV核酸檢測的現狀與需要HCV核酸檢測的現狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結現在是13頁\一共有27頁\編輯于星期六全世界第一臺用于體外診斷的全自動熒光定量分子診斷系統真正實現“樣品進，結果出”全球安裝超過2,000臺，國內安裝超過40臺COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系統COBAS

AmpliPrep/COBASTaqMan48?系統COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96?系統（帶連接系統）COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96?系統

（無連接系統）現在是14頁\一共有27頁\編輯于星期六COBASAmpliPrep儀器簡介全自動系統，自動進行核酸提取純化和PCR反應體系配制基于MGP磁珠分離技術，確保高質量的核酸提取純化最多72個樣品可以同時上機，運行中可連續裝載上架，提高工作效率包括耗材、樣品、試劑均可以連續上樣現在是15頁\一共有27頁\編輯于星期六DNA或者RNA1.裂解、穩定和去蛋白2.核酸捕獲病毒或細胞3.沖洗4.洗脫37°C孵育COBASAmpliPrep儀器

MGP磁珠分離技術室溫80°C孵育現在是16頁\一共有27頁\編輯于星期六取SPU槍頭樣本管/反應管管蓋抓手樣本初始體積感應器取試劑鋼針CAP機械臂介紹樣本管/反應管結構現在是17頁\一共有27頁\編輯于星期六COBAS

TaqMan/COBASTaqMan48分析儀簡介檢測通量可達4*24測試獨立的24孔熱循環儀TaqMan48有2個模塊，TaqMan96有4個模塊最多可同時進行4個不同的分析檢測操作簡單，核酸擴增和檢測全部自動完成實時定量PCR檢測技術，卓越的檢測性能，靈敏度高和特異性好，動態范圍寬現在是18頁\一共有27頁\編輯于星期六HBV-DNA定量測試用于藥品FDA注冊試驗通用名商品名

FDA批準日期關鍵的HBV-DNA測試Interferonalfa-2bα-2b干擾素

INTRON?A1991N/ALamivudine拉米夫定EPIVIR-HBV?1998雜交研究解決方案

1Adefovirdipivoxil阿德福韋酯HEPSERA?2002AmplicorMonitor2Entecavir恩替卡韋BARACLUDE?2005CobasAmplicor3Peginterferonalfa-2a聚乙二醇干擾素α-2aPEGASYS?2005CobasAmplicor4Telbivudine替比夫定TYZEKA?2006CobasAmplicor5Tenofovir替諾福韋VIREAD(HIV)Phase3CobasTaqMan6

INTRON?A(Interferonalfa-2b)[packageinsert].Schering-PloughCorp.Kenilworth,NJ2.EPIVIR-HBV?(Lamivudine)[packageinsert]GlaxoSmithKline,ResearchTrianglepark,NC3.HEPSERA?(Adefovirdipivoxil)[packageinsert]GileadSciences.FosterCity,CA4.Pegasys(Peginterferonalfa-2a)[packageinsert].Hoffmann-LaRocheInc.Nutley,NJ5.TYZEKA?(Telbivudine)[PackageInsert].NovartisPharmaceuticalsCorp.EHanover,NJ6.MarcellinPetal.HepDART2007MeetingAbstract63,Dec9-132007,Lahaina,HI現在是19頁\一共有27頁\編輯于星期六國外發表的文獻Evaluationofinitialvirologicalresponsetoadefoviranddevelopmentofadefovir-resistantmutationsinpatientswithchronichepatitisB.Gallegoetal.,JournalofViralHepatitis,2008,15,392–398Evaluationofanautomated,highlysensitive,real-timePCR-basedassay(COBASAmpliprepTM/COBASTaqManTM)forquantificationofHCVRNA.ChristophSarrazinaetal.,JournalofClinicalVirology,2008,43,162–168COBASAmpliPrep-COBASTaqManHepatitisBVirus(HBV)Test:aNovelAutomatedReal-TimePCRAssayforQuantificationofHBVDNAinPlasma.TizianoAlliceetal.,JournalofClinicalMicrobiology,Mar.2007,p.828–834EvaluationoftheCOBASAmpliPrep-totalnucleicacidsolation-COBASTaqManhepatitisBvirus(HBV)quantitativetestandcomparisontotheVERSANTHBVDNA3.0assay.RonsinCetal.,JournalofClinicalMicrobiology2006vol.44(no.4)ComparisonoftheCOBASTaqManTMHBVTestWiththeCOBASAmplicorMonitorTMTestforMeasurementofHepatitisBVirusDNAinSerum.SimonSiu-ManSumetal.,JournalofMedicalVirology2005,77:486–490HepatitisBvirus(HBV)genotypedeterminationbytheCOBASAmpliPrep/COBASTaqManHBVTest,v2.0inserumandplasmamatrices.GoedelSetal.,JournalofClinicalVirology2009Jul;45(3):232-6ComparisonofVersantHBVDNA3.0andCOBASAmpliPrep-COBASTaqManassaysforhepatitisBDNAquantitation:Possibleclinicalimplications.GARBUGLIAA.R.etal.,Journalofvirologicalmethods2007,vol.146,no1-2,pp.274-280PerformanceoftheCobasAmpliPrep/CobasTaqManReal-TimePCRAssayforHepatitisBVirusDNAQuantification.Ste′phaneChevaliezetal.,JournalofClinical,May2008,p.1716–1723……現在是20頁\一共有27頁\編輯于星期六HBV的定量檢測性能指標國產HBV試劑CAP/CTMHBV靈敏度(LOD)500IU/mL？12IU/mL檢測范圍104～5×107IU/mL54-1.1×108IU/mL定量方法外標法定量內標法定量其它對部分發生HBV病毒突變的病人無法準確檢測涵蓋亞型:A-G加強pre-core突變檢測注：國產試劑1IU/mL=1copy/mL現在是21頁\一共有27頁\編輯于星期六HCV的定量檢測性能指標國產HCV試劑CAP/CTMHCV靈敏度(LOD)500IU/mL？15IU/mL檢測范圍104～5×107IU/mL43–6.9×107IU/mL定量方法外標法定量內標法定量其它未知1-6型(能區分0.5log濃度變化)現在是22頁\一共有2