實(shí)驗(yàn)一、人工授精器械的認(rèn)識與假陰道的安裝一、目的和要求1．熟悉人工授精所用的摘精和輸精器械，了解其用途及使用方法。2．練習(xí)安裝假陰道。二、材料和儀器設(shè)備〔一〕摘精器材牛羊豬馬的摘精用假陰道，牛羊電刺激摘精棒，豬手握法摘精用的橡膠手套〔二〕輸精器材牛羊豬馬輸精器，陰道開張器，額燈和手電筒〔三〕輔助器材高壓滅菌器，酒精燈，長柄鉗，鑷子，玻璃棒，棒狀溫度計(jì)〔四〕藥品滅菌凡士林，75％和95％酒精棉球，滑石粉，來蘇兒，洗衣粉三、方法和步驟先由老師講解人工授精器材的構(gòu)造、各局部名稱和用途，并作假陰道安裝的示范。然后學(xué)生分組觀察并作假陰道的安裝練習(xí)。〔一〕人工授精器材的認(rèn)識1．假陰道為長筒狀，由外殼、內(nèi)胎和集精杯〔管〕三個(gè)主要局部組成。其粗細(xì)和長短因畜種而異，不同國家不同時(shí)期的設(shè)計(jì)形式也不盡相同。〔1〕外殼牛、羊和豬的假陰道外殼一般為硬橡膠或塑料制成的圓筒，中部裝有可吹氣、注水和排水的開關(guān)。豬用假陰道那么在此處連接一個(gè)可向假陰道內(nèi)打氣的雙鏈球，以調(diào)劑壓力。馬的假陰道的外殼由鍍鋅鐵皮或金屬制成，分頭、頸和體三局部。筒體的中部裝有把柄，其側(cè)面有吹氣和注水、排水孔，并有封閉塞或橡膠帶。〔2〕內(nèi)胎由優(yōu)質(zhì)橡膠制成的膠筒，目前有些國家將其內(nèi)胎面制成粗糙面，以增強(qiáng)摘精時(shí)對陰莖的刺激，利于摘精。〔3〕集精杯〔管〕牛、羊用雙層的棕色集精杯〔蘇式〕或有刻度的離心管〔美式〕。馬用黑色橡皮杯〔蘇式〕。豬用棕色有刻度的廣口瓶。當(dāng)用手握法對公豬進(jìn)行摘精時(shí)，只需備一只乳膠手套和收集精液的容器即可。集精杯〔管〕可借橡皮圈直接固定于假陰道的一端或借橡膠漏斗與假陰道連接。2．輸精器蘇式牛、羊輸精器為一長頸玻璃注射器。目前常用的為金屬或塑料制成的輸精管，其后連接一個(gè)橡皮球。冷凍細(xì)管精液輸精那么使用金屬制成的輸精槍。對牛羊等家畜的輸精需借助陰道開張器和額燈或手電筒照明進(jìn)行。開張器的種類和大小因畜種而異。〔二〕假陰道的準(zhǔn)備1．假陰道外殼及內(nèi)胎的檢查〔1〕檢查假陰道外殼兩端是否光滑，外殼有否裂隙或開焊之處〔特別是馬用外殼〕。〔2〕檢查內(nèi)胎是否漏水。可將內(nèi)胎注滿水，用兩手握緊兩端，并扭轉(zhuǎn)內(nèi)胎施以壓力，觀察胎壁有無破損漏水之處，如發(fā)現(xiàn)應(yīng)及時(shí)修補(bǔ)或更換。公豬的手握法摘精用的乳膠手套在用前也應(yīng)檢查。2．摘精器材的清洗〔1〕外殼、內(nèi)胎、集精杯〔管〕等用具用后可用熱的洗衣粉水清洗。內(nèi)胎的油污必須洗凈。〔2〕以清水沖凈洗衣粉，待自然枯燥后即可使用。3．內(nèi)胎的安裝將內(nèi)胎放入外殼，內(nèi)胎露出外殼兩端的局部長短應(yīng)相等。而后將其翻轉(zhuǎn)在外殼外，內(nèi)胎應(yīng)平整，不應(yīng)扭曲，再以橡皮圈加以固定。4．消毒先以長柄鉗夾取75%的酒精棉球擦拭內(nèi)胎和集精杯，再以95%的酒精棉球充分擦拭。摘精前，最好用稀釋液沖洗1~2次。5．集精杯〔管〕的的安裝牛、羊、豬的集精杯〔管〕可借助特制的保定套或橡皮漏斗與假陰道連接。6．注水通過注水孔向假陰道內(nèi)、外壁之間注入50~55℃溫水，使其能在摘精時(shí)保持38~42℃，注水總量約為內(nèi)、外壁間容積的1/3~7．涂潤滑劑用消毒好的玻璃棒，取滅菌凡士林少許，均勻的涂于內(nèi)胎的外表，涂抹深度為假陰道長度的1/2左右，潤滑劑不宜過多、過厚，以免混入精液中，降低精液品質(zhì)。當(dāng)用手握法給公豬摘精時(shí)不須使用潤滑劑。8．調(diào)劑假陰道內(nèi)腔的壓力從注氣孔吹入或打入〔豬〕空氣，根據(jù)不同家畜和個(gè)體的要求調(diào)整內(nèi)腔壓力。9．假陰道內(nèi)腔溫度的測量把消毒的溫度計(jì)插入假陰道內(nèi)腔，待溫度不變時(shí)再讀數(shù)，一般40℃10．用一塊褶成四折的消毒紗布蓋住假陰道入口，以防灰塵落入，即可準(zhǔn)備摘精。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告試述公牛假陰道的組成及安裝時(shí)的考前須知。實(shí)驗(yàn)二、雞的摘精一、目的和要求通過實(shí)習(xí)，初步掌握公雞的按摩摘精操作技術(shù)。二、材料和器械〔一〕材料公雞5只〔二〕用具剪毛剪，集精杯，顯微鏡，紗布，保溫瓶三、方法和步驟(一)公雞的按摩摘精1.一般由兩人操作，保定員用雙手各保定住公雞的一條腿，使其自然分開，拇指扣住翅膀，使公雞尾部朝向摘精員，呈自然交配姿勢。2.摘精員左手拇指為一方，其他四指為另一方，從雞翼根部沿體軀兩側(cè)滑動(dòng)，推至尾脂區(qū)，如此反復(fù)按摩數(shù)次，那么引起公雞性欲。3.摘精員的右手中指與無名指之間夾著集精杯，杯口朝內(nèi)或朝外。4.按摩數(shù)次后，立刻以左手掌將尾羽撥向背部，同時(shí)右手掌緊貼公雞腹部柔軟處，拇指與食指分開，于恥骨下緣抖動(dòng)觸摩假設(shè)干次，當(dāng)泄殖腔外翻露出退化交配器時(shí)，左手拇指與食指立刻捏住泄殖腔上緣，輕輕壓擠，公雞立刻射精，右手迅速用集精杯接取精液。5.摘集到的精液置于水溫25~30℃四、實(shí)習(xí)報(bào)告簡述雞的摘精技術(shù)操作要領(lǐng)。五、實(shí)習(xí)提示1.實(shí)習(xí)之前，教師帶著局部學(xué)生對實(shí)習(xí)用種公雞進(jìn)行調(diào)教訓(xùn)練，按摩摘精。實(shí)驗(yàn)三、兔子的胚胎移植一、目的和要求通過實(shí)驗(yàn)了解促卵泡素，孕馬血清促性腺激素，人絨毛膜促性腺激素的作用。了解卵子的正常和反常形態(tài)結(jié)構(gòu)，認(rèn)識受精卵和未受精卵之區(qū)別，初步掌握沖卵和檢卵技術(shù)，為掌握胚胎移植技術(shù)奠定根底。二、材料和器械〔一〕動(dòng)物5只供體母兔〔二〕器具玻璃注射器，兔用手術(shù)臺，創(chuàng)巾，止血紗布，藥棉，縫合針和線，移卵管，實(shí)體顯微鏡〔三〕藥品75％酒精，0.9％NaCl，碘酒，沖卵液，麻醉藥三、內(nèi)容和步驟〔一〕供體兔超數(shù)排卵處理1．FSH處理組先用碘酒棉球消毒母兔頸部皮膚，每只每次頸部皮下注射FSH10~15IU或0.15mg，連續(xù)注射6次，每次相隔10~14h，總量為0.9mg/只，最后一次注射FSH后，從耳靜脈注射〔先用酒精棉球消毒耳朵邊緣〕hCG75IU，隨即放入公兔籠內(nèi)，觀察是否配種。一般來說，超排處理后，母兔陰部表現(xiàn)出發(fā)情病癥，能成功地配種。2．PMSG處理組母兔頸部皮膚消毒同上。于皮下一次注射PMSG150IU。之后48~72h，同上述方法注射同量的hCG，隨即放入公兔籠內(nèi)。3．對照組頸部皮下注射生理鹽水，其他處理同上。〔二〕手術(shù)沖胚方法供體注射hCG，并與公兔交配后24h、36h或48h進(jìn)行沖胚。1．耳靜脈注射10ml空氣處死供體母兔。如做活體手術(shù)，那么用麻醉藥麻醉后再按外科手術(shù)要求翻開腹腔。2．將把母兔背朝下放固定于兔手術(shù)臺上。3．在母兔腹部最后兩對乳頭的腹中線部剪毛，用沾滿肥皂水的紗布清洗局部，再用剃須刀刮毛，先后分別用碘酒和酒精棉球由內(nèi)向外進(jìn)行消毒，然后蓋上創(chuàng)巾并固定好。4．用手術(shù)刀在腹中線處皮膚切開2~3cm長的術(shù)口，再在腹壁肌白線上切一小口，用中指墊著以手術(shù)剪擴(kuò)大術(shù)口。活體沖卵時(shí)，要注意止血，隨時(shí)用溫生理鹽水保溫術(shù)口。5．翻開腹腔后，沿著子宮輕輕引出輸卵管及卵巢。與卵巢下脂肪組織處，以長夾夾住以固定卵巢。仔細(xì)觀察卵巢的變化，記錄排卵點(diǎn)〔卵巢排完卵后的小紅點(diǎn)〕。6．先在卵巢附近找到輸卵管的傘，從傘部插入沖卵管并用手指或夾子固定，另一端接外表皿。另一個(gè)人用10ml注射器配制9號針頭吸一管沖卵液〔可用生理鹽水代替〕。從子宮向輸卵管方向，與子宮角末端和輸卵管交界的無血管處插入針頭，使針頭伸入輸卵管內(nèi)并用手指固定。然后慢慢地推動(dòng)注射器，將沖卵液注入輸卵管，使沖卵液由傘部收集到外表皿內(nèi)。一般每次5ml即可。注意沖卵液不得流失。〔三〕胚胎移植1．受體的選擇選擇與共同發(fā)情時(shí)間一致〔發(fā)情時(shí)間相差不易超過一天〕的受體〔自然發(fā)情或超排處理誘發(fā)發(fā)情〕。2．保定、麻醉、開腹手術(shù)參照供體處理方法。3．胚胎分裝先向輸卵管內(nèi)吸進(jìn)少量PBS，接著吸入一點(diǎn)空氣，然后再將胚胎連同少量PBS吸入，接著再吸入一點(diǎn)空氣和PBS，在移卵管尖端保存一段空隙，這樣就可防止胚胎喪失。4．移植部位將胚胎移入排卵側(cè)的生殖道內(nèi)。凡從供體輸卵管內(nèi)得到的胚胎應(yīng)移植到受體輸卵管內(nèi)。從輸卵管的傘部插入移卵管2~3cm深，輕輕地注入胚胎，最后慢慢地抽出移卵管。一般一側(cè)輸卵管可移植5~10枚胚胎。如從供體子宮收集的胚胎也應(yīng)移植到受體母兔相應(yīng)得部位。5．縫合按外科手術(shù)要求分別縫合肌層和皮膚，并進(jìn)行消毒。注意手術(shù)后供體和受體的護(hù)理。四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1.簡述實(shí)驗(yàn)過程和結(jié)果，根據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)四、小鼠輸精管結(jié)扎手術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^實(shí)驗(yàn)掌握輸精管結(jié)扎方法，了解此項(xiàng)技術(shù)的各個(gè)環(huán)節(jié)，為在科研和生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用打下根底。實(shí)驗(yàn)材料與器械雄性昆明系6-8周齡以上的小鼠假設(shè)干只實(shí)驗(yàn)藥品及器械(乙醚、70%的酒精、青霉素、滅菌的手術(shù)器械等〕實(shí)驗(yàn)步驟和方法1.麻醉稱重〔乙醚麻醉〕；2.腹部用70%酒精消毒；3.剪毛；4.切開皮膚及肌肉層；5.用鑷子夾住體壁，使其離開腸管；6.找到睪丸的白色脂肪墊，把一側(cè)睪丸從陰囊推向腹腔，用鑷子夾取脂肪團(tuán)取出睪丸；7.結(jié)扎輸精管；8.結(jié)扎完后輕輕夾住脂肪團(tuán)，使睪丸送回腹腔，另一側(cè)同理；9.縫合，外科手術(shù)縫合刀口，并灑上適量的抗生素；10.術(shù)后護(hù)理，術(shù)后對公鼠認(rèn)真護(hù)理，2周后才能使用。在術(shù)前和術(shù)后保持正常的溫度，特別是在術(shù)后散熱嚴(yán)重因而可用100w的可調(diào)燈加溫到達(dá)保溫的目的。四、實(shí)習(xí)報(bào)告簡述小鼠輸精管結(jié)扎技術(shù)操作要領(lǐng)。實(shí)驗(yàn)五、牛精液品質(zhì)的肉眼檢查及精子活率評定一、目的和要求熟悉肉眼檢查精液品質(zhì)的方法；掌握評定精子活力的方法及評判指標(biāo)。二、材料和儀器〔一〕精液牛、羊、豬或兔等任一種動(dòng)物的精液〔二〕器械顯微鏡，顯微鏡保溫箱〔或顯微鏡恒溫臺〕，載玻片，蓋玻片，搪瓷盤，溫度計(jì)，滴管，擦鏡紙，紗布，有刻度試管，計(jì)數(shù)器三、內(nèi)容和方法〔一〕精液的肉眼檢查1.射精量將摘得的精液倒入有刻度試管或集精杯中，測其容量。各種家畜的射精量請參考教材。如果精液量過多或過少時(shí)，分析其原因。2.色澤和氣味家畜的精液通常乳白色或灰白色，因畜種的不同而又濃淡的區(qū)別。馬、豬的精液稀薄，呈灰白色；牛、羊的精液濃密，呈乳白色。家畜精液無味或略有腥味。3.云霧狀的觀察取原精液一滴于在載玻片上不加蓋玻片，用低倍鏡觀察精液滴的邊緣局部。可見牛羊的敬業(yè)翻騰滾動(dòng)的云霧狀態(tài)；豬馬的精液無此現(xiàn)象。〔二〕評定精子的活率摘精后立刻在25℃左右的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行評定精子的活率，最好在37℃保溫箱內(nèi)或加熱的載物臺上進(jìn)行。在評定精子活率的同時(shí)也可以測定精子的密度。用玻璃棒蘸取一滴原精液或經(jīng)稀釋的精液〔馬、豬精液的精子密度低，不須稀釋；而牛、羊精液的密度大，須用0.9%氯化鈉溶液稀釋，其溫度須與精液密度相近〕滴在潔凈的載玻片上，蓋上潔凈的蓋玻片，其間充滿精液，不存留氣泡。也可滴在蓋玻片上翻放于凹玻片的凹窩上。置于顯微鏡下，放大250精子活動(dòng)有三種類型：直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)和原地?cái)[動(dòng)。評判精子活率是根據(jù)直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)的多少而定。目前評定精子活率等級的方法有兩種：十級制——在顯微鏡視野中估算直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子所占全部精子的百分?jǐn)?shù)。直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子為10