實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌單染與復(fù)染第一頁，共十一頁，2022年，8月28日一、目的要求1．鞏固油鏡的使用方法；2．學(xué)習(xí)微生物涂片、染色基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法；3．學(xué)習(xí)、掌握細(xì)菌的革蘭氏染色法；4．建立“無菌操作”的概念，學(xué)習(xí)其技術(shù)。第二頁，共十一頁，2022年，8月28日二、實(shí)驗(yàn)原理簡(jiǎn)單染色法：是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的方法，常用堿性染料。只能觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：

革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。第三頁，共十一頁，2022年，8月28日革蘭氏染色丹麥C.Gram創(chuàng)立，用于細(xì)菌分類學(xué)研究細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)第四頁，共十一頁，2022年，8月28日G－肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多脂質(zhì)，故用乙醇等有機(jī)溶劑脫色時(shí)融解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色。G＋細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，用脫色劑處理后，肽聚糖層孔徑縮小，通透性降低，故細(xì)菌仍保留初染時(shí)的紫色。第五頁，共十一頁，2022年，8月28日三、實(shí)驗(yàn)材料變形桿菌、表皮葡萄球菌載玻片、接種環(huán)、酒精燈、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。革蘭氏染色液一套第六頁，共十一頁，2022年，8月28日四、實(shí)驗(yàn)步驟1．簡(jiǎn)單染色載玻片——中心加半滴水——無菌操作取菌——涂布于水中使均勻并成薄膜狀——干燥——火焰固定——染色（1~2min）——水洗——干燥——鏡檢2.革蘭氏（Gram）染色涂片——干燥——固定——結(jié)晶紫初染（1~2min）——水洗——碘液媒染1min——水洗——95%酒精脫色（約20－30秒）——立即水洗——番紅復(fù)染約2分鐘——水洗——干燥——鏡檢（混合涂片染色）第七頁，共十一頁，2022年，8月28日第八頁，共十一頁，2022年，8月28日Left:單菌染色結(jié)果(G+或G-)Right:混合菌染色結(jié)果(G+和G-)細(xì)菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)革蘭氏染色結(jié)果及細(xì)菌分類革蘭氏染色陰性第九頁，共十一頁，2022年，8月28日五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果文字記錄所觀察到的革蘭氏染色結(jié)果的差別，判斷是G－/G＋。繪圖描述各菌形態(tài)（可在一個(gè)視野中）。第十頁，共十一頁，2022年，8月28日六、問題與討論1革蘭氏染色涂片為何不宜太濃厚？實(shí)驗(yàn)關(guān)