微生物的實驗室培養ppt第一頁，共八十八頁，2022年，8月28日專題2微生物的培養與應用課題1微生物的實驗室培養第二頁，共八十八頁，2022年，8月28日(一)概念、特點：

個體難以用肉眼觀察的一切微小生物之統稱。微生物包括細菌、病毒、真菌、和少數藻類等。（但有些微生物是肉眼可以看見的，像屬于真菌的蘑菇、靈芝等。）結構都相當簡單,個體多數十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結構.且體內一般不含有葉綠素.不能進行光合作用.第三頁，共八十八頁，2022年，8月28日微生物的類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、結構簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點：第四頁，共八十八頁，2022年，8月28日細菌細菌：單細胞不分枝的原核微生物。細菌細胞微小而透明，通常用適當染料染色后顯微鏡觀察圖1-1常見的三種細菌典型形態A.球菌

B.桿菌C.弧菌第五頁，共八十八頁，2022年，8月28日球菌弧菌桿菌第六頁，共八十八頁，2022年，8月28日細菌細菌第七頁，共八十八頁，2022年，8月28日細菌*細胞壁結構特點：堅韌且有彈性細胞壁有哪些功能？①固定細胞外形；

②保護細胞免受外力的損傷；

③阻攔大分子物質進人細胞；④使細胞具有致病性及對噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細胞壁中含毒素第八頁，共八十八頁，2022年，8月28日芽孢

有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發，形成一個細菌.第九頁，共八十八頁，2022年，8月28日菌落單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據。有鞭毛細菌常形成邊緣不規則的菌落；具有莢膜的菌落表面較透明，邊緣光滑整齊；有芽孢的菌落表面干燥皺褶；有些能產生色素的細菌菌落還顯出鮮艷的顏色。第十頁，共八十八頁，2022年，8月28日幾種菌落及其形態第十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日菌落細菌的菌落特征因種而異第十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日細菌的營養類型根據細菌所利用的能源和碳源的不同，將細菌分為兩大營養類型。自養菌（autotroph）異養菌（heterotroph）腐生菌寄生菌大部分病原菌第十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日放線菌1、結構：單細胞原核分支狀的菌絲（基內菌絲、氣生菌絲）第十四頁，共八十八頁，2022年，8月28日鏈霉素、土霉素、四環素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

微生物中發現了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產生的

應用:第十五頁，共八十八頁，2022年，8月28日第十六頁，共八十八頁，2022年，8月28日第十七頁，共八十八頁，2022年，8月28日如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態結構酵母菌和霉菌青霉第十八頁，共八十八頁，2022年，8月28日生殖腐生生活孢子生殖第十九頁，共八十八頁，2022年，8月28日病毒的結構第二十頁，共八十八頁，2022年，8月28日病毒

第二十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日SARS病毒、禽流感病毒第二十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日朊病毒（蛋白質病毒）第二十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日1.培養基內所含的基本物質(1)水(2)碳源(3)氮源(4)無機鹽（二）培養基第二十四頁，共八十八頁，2022年，8月28日：凡是能為微生物提供所需碳元素的營養物質。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構成細胞物質和一些代謝產物②異養微生物的能源⑴.概念⑵.來源：⑶.作用：1.微生物的碳源第二十五頁，共八十八頁，2022年，8月28日①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養物質。主要用于合成蛋白質、核酸及含N的代謝產物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來源：⑶.作用：3.生長因子⑶.常見的生長因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長不可缺少的微量有機物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第二十六頁，共八十八頁，2022年，8月28日(1)特殊營養物質----?如：培養乳酸桿菌需要在培養基中添加維生素(2)pH值如:培養霉菌需酸性、培養細菌需中性或微堿性(3)氧氣的含量如:培養厭氧微生物時需要提供無氧的條件2.培養基內所需的其他條件練習生長因子第二十七頁，共八十八頁，2022年，8月28日練習1（多項選擇）1、下列細菌中，能利用含碳無機物作碳源的是A光合細菌B根瘤菌C硝化細菌D乳酸菌2、培養大腸桿菌的培養基中，必需含有的碳源和氮源是A糖、有機酸等B二氧化碳、碳酸鹽C蛋白質D無機氮化物3、下列敘述不正確的是A培養基是為微生物的生長繁殖提供營養的基質B液體培養基和固體培養基所含的最基本物質不相同C微生物在固體培養基上生長時，可以形成肉眼可見的單個細菌A.CA.CB.C.第二十八頁，共八十八頁，2022年，8月28日(1)按物理狀態分液體培養基固體培養基3.分類——加入凝固劑（如瓊脂）第二十九頁，共八十八頁，2022年，8月28日固體培養基：菌落，菌苔第三十頁，共八十八頁，2022年，8月28日液體培養基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長第三十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日半固體培養基：無動力有動力(彌散)(是否運動)

第三十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日3.分類(2)按用途分選擇培養基鑒別培養基------選擇菌種------鑒別菌種第三十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日連線下列選擇培養基分離酵母菌、霉菌等真菌：分離金黃色葡萄球菌：分離固氮菌：分離自養型微生物：無氮培養基的培養基不含有機物的培養基高濃度食鹽培養基加入青霉素的培養基第三十四頁，共八十八頁，2022年，8月28日伊紅-美藍培養基金屬光澤深紫色菌落第三十五頁，共八十八頁，2022年，8月28日3.分類(3)按成分分天然培養基合成培養基------成分未知，來源有限------成分已知第三十六頁，共八十八頁，2022年，8月28日血清中含有：①多種蛋白質（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉移蛋白⑦不明成分

人工合成培養基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養基（如血清）。第三十七頁，共八十八頁，2022年，8月28日（三）無菌技術1、獲得純凈培養物的關鍵:2、無菌技術包括的四大方面(參看教材15頁)3、消毒與滅菌(1)消毒：概念：使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物。包括芽孢和孢子嗎？方法:煮沸消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒化學藥劑消毒:酒精、氯氣、石碳酸、煤酚皂溶液等紫外線消毒(不包括芽孢和孢子)防止外來雜菌的入侵第三十八頁，共八十八頁，2022年，8月28日（2）滅菌概念：使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a

灼燒滅菌b

干熱滅菌c

高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具(接種環、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍第三十九頁，共八十八頁，2022年，8月28日干熱滅菌

160－170℃；1－2h能耐高溫的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通常用于培養基的滅菌第四十頁，共八十八頁，2022年，8月28日

請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養細菌用的培養基與培養皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手（4）注射器（5）新鮮牛奶（6）自來水（7）實驗室的空氣思考第四十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日四、實驗操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養基(用于培養細菌)牛肉膏蛋白胨固體培養基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質溶解后，添加自來水，定容至1000mL第四十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日1．計算、稱量2．溶化3．調pH：pH7．6

4．過濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過程中注意不要使培養基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎操作步驟第四十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日8．滅菌:

將50ml培養基用玻棒轉移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內，在160～170℃下滅菌2h。第四十四頁，共八十八頁，2022年，8月28日倒平板技術1.將滅過菌的培養皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234第四十五頁，共八十八頁，2022年，8月28日倒平板技術2.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。1234第四十六頁，共八十八頁，2022年，8月28日倒平板技術12343.用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養基(約10~

20mL)倒入培養皿，左手立即蓋上培養皿的皿蓋。第四十七頁，共八十八頁，2022年，8月28日倒平板技術12344.等待平板冷卻凝固，大約需5~10min。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。第四十八頁，共八十八頁，2022年，8月28日9．倒平板:

待培養基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種.10．無菌檢查：將滅菌的培養基放入37℃的溫室中培養24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。第四十九頁，共八十八頁，2022年，8月28日1.培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？

答：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。問題討論第五十頁，共八十八頁，2022年，8月28日2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。第五十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。第五十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。第五十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日二、實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養基計算－稱量－溶化－滅菌－倒平板（二）純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法（三）將接種后的培養基和一個未接種的培養基放入37℃恒溫箱中培養12h和24h后，觀察并記錄定容—調PH

第五十四頁，共八十八頁，2022年，8月28日三、課題延伸：菌種的保藏1、斜面保藏（臨時保存）2、甘油保藏（長期保存）練習第五十五頁，共八十八頁，2022年，8月28日倒平板第五十六頁，共八十八頁，2022年，8月28日1.培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？問題討論

答：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。第五十七頁，共八十八頁，2022年，8月28日3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。第五十八頁，共八十八頁，2022年，8月28日第四課時第五十九頁，共八十八頁，2022年，8月28日1、平板劃線法第六十頁，共八十八頁，2022年，8月28日問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。第六十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日2.在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第六十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日2.稀釋涂布平板法:(1)系列稀釋操作:第六十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日問題討論

涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？

應從操作的各個細節保證“無菌”。例如，酒精燈與培養皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。第六十四頁，共八十八頁，2022年，8月28日涂布平板操作討論:涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？提示：應從操作的各個細節保證“無菌”。例如，酒精燈與培養皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。第六十五頁，共八十八頁，2022年，8月28日返回菌落：單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體，叫做菌落。不同的細菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的重要依據。第六十六頁，共八十八頁，2022年，8月28日(2)碳源可作為碳源的物質有:含碳無機物:

、

、

、

含碳有機物：蛋白質脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同異養型微生物的碳源為自養型微生物的碳源為碳酸鹽碳酸氫鹽二氧化碳糖類（主要）含碳有機物（有機碳）含碳無機物（無機碳）第六十七頁，共八十八頁，2022年，8月28日(3)氮源可作為氮源的物質有:含氮無機物：、、、含氮有機物：蛋白胨牛肉膏尿素返回固氮微生物所利用的氮源是氮氣氨氣硝酸鹽氨鹽氮氣第六十八頁，共八十八頁，2022年，8月28日思考:1)無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？

2)消毒和滅菌有何不同？3)為什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?4)請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。①培養細菌用的培養基與培養皿②玻棒、試管、燒瓶和吸管③實驗操作者的雙手消毒滅菌條件溫和強烈作用范圍物體表面或內部一部分,不包括芽孢和孢子物體內外所有微生物,包括芽孢和孢子無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。滅菌滅菌消毒營養成分不被破壞第六十九頁，共八十八頁，2022年，8月28日?思考1溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

答:②加瓊脂的目的是什么?答:可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑第七十頁，共八十八頁，2022年，8月28日思考2在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養基的錐形瓶的目的是什么？答:

②培養皿能否用高壓蒸汽滅菌？答:?在滅菌時能避免水蒸汽凝結時浸濕棉塞,在取出培養基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因為培養皿要保持干燥,應該用干熱滅菌.第七十一頁，共八十八頁，2022年，8月28日練習2:1.獲得純凈培養物的關鍵是A將用于微生物培養的器皿.接種用具和培養基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環境條件下培養D防止外來雜菌的入侵2.下列操作與無菌技術無關的是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈的火焰旁完成3.外科手術器械和罐頭食品的處理,要以能夠殺死什么為標準A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢DCD第七十二頁，共八十八頁，2022年，8月28日4.某學校打算開辟一塊食用菌栽培基地,以豐富學生的勞動技術課內容,首先對食用菌實驗室進行清掃和消毒處理,準備食用菌栽培所需的各種原料和用具,然后從菌種站購來各種食用菌菌種.請回答以下問題:

(1)對買回來的菌進行擴大培養,首先制備試管培養基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養基所需的原料

。其中提供氮源的主要

是

；提供能源的主要物質是

；瓊脂的作用是

，它不提供營養。(2)微生物在生長過程中對各種成分所需量不同,故制備培養基時各成分要有合適的

,在燒杯加入瓊脂后要不停地

,防止

.牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂牛肉膏蛋白胨凝固劑比例攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂第七十三頁，共八十八頁，2022年，8月28日(3)將配制好的培養基轉移到錐形瓶中,加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入中滅菌,壓力為

,溫度為

,時間

,滅菌完畢拔掉電源,待鍋內壓力

,將試管取出.

(4)使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意,先向鍋內倒入

,把鍋內水加熱煮沸并將基中原有冷空氣徹底排除后將鍋密閉.(5)從一支試管向另一支試管接種時注意,接種環要在酒精燈

焰滅菌.并且待接種環

后沾取菌種,試管口不能離開酒精燈火焰附近,將接種的試管放入

℃冰箱中保藏.高壓滅菌鍋100KPa121℃自