第2課時分離以尿素為氮源的微生物(時間：30分鐘滿分：50分)一、選擇題(共8小題，每小題2分，共16分)1．土壤中分解尿素的微生物所需氮源為()A．硝酸B．氨C．尿素D．蛋白胨解析只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素為氮源，缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源使其生長、發育及繁殖受到抑制，所以，能夠選擇出分解尿素的微生物。答案C2．土壤中的細菌能分解尿素，是因為它們能合成一種()A．尿素酶B．脲酶C．蛋白酶D．肽酶解析能夠分解利用尿素的細菌，其細胞內含有脲酶，可以把尿素分解成氨，然后進一步利用。答案B3．產生標準形態菌落的細菌的最初數目和培養基分別是()A．一個細菌、液體培養基 B．許多細菌、液體培養基C．一個細菌、固體培養基 D．許多細菌、固體培養基解析在液體培養基中生活的細菌，無論是一個還是許多，肉眼都是看不見的。在固體培養基上的細菌，當數目較少時也是看不見的。當固體培養基上有許多細菌并且集中在較小范圍內時，肉眼可見。而菌落是一個細菌或幾個細菌的子細胞群體，形成于固體培養基上，有一定的形態結構，所以肉眼可見。同種細菌形成的菌落，形態結構是相同的。如果有許多細菌形成的菌落，就不可能有比較標準的形態，因為這許多細菌第一不可能是同一種細菌，第二不可能在培養基的同一個點上。答案C4．在分離土壤中的分解尿素的細菌實驗中，關于土壤取樣的敘述錯誤的是()A．土壤取樣，應選取肥沃、濕潤的土壤B．先鏟去表層土3cm左右，再取樣C．取樣用的小鐵鏟和信封在使用前不用滅菌D．應在火焰旁稱取土壤解析在土壤中的分解尿素的細菌分離、計數中，必須在含微生物豐富的濕潤、肥沃土壤中取樣，所用小鏟和信封必須滅菌，應取表層土3cm以下的樣土，在裝信封和稀釋以及稱量時必須在酒精燈火焰旁進行。答案C5．平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是()A．接種時再拿起來方便B．在皿底上標記日期等方便C．正著放置容易破碎D．防止皿蓋上的冷凝水落入培養基造成污染解析平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培養基造成污染。答案D6．在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑的目的是()A．篩選出能分解尿素的細菌B．對分離的菌種作進一步鑒定C．作細菌的營養成分D．如指示劑變藍就能準確地認定該菌能分解尿素解析篩選出能分解尿素的細菌用選擇培養基即可，不需要加指示劑。加入指示劑的培養基，目的都是對要分離的菌種作進一步的鑒定。答案B7．想要把土壤中分解尿素的細菌進行分離與計數，下列操作需要在火焰旁進行的是()①土壤取樣②稱取土壤③稀釋土壤溶液④涂布平板⑤微生物的培養A．①②③④⑤ B．②③④⑤C．③④⑤ D．②③④解析對分解尿素的細菌進行分離與計數時，注意在火焰旁稱取土壤，稀釋土壤溶液和接種也都在火焰旁進行。答案D8．在培養基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細菌，這種加入尿素的培養基在功能上屬于()A．選擇培養基 B．固體培養基C．液體培養基 D．半固體培養基答案A二、非選擇題(共4小題，共34分)9．(6分)下表為本實驗中尿素固體培養基的配方，請分析回答下面的問題。成分含量葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g酚紅mg尿素2g水25mL瓊脂糖0.5g(1)在該培養基的配方中，為微生物提供碳源和氮源的分別是________________________________________________________________。(2)按物理性質劃分，該培養基屬于________培養基，理由是培養基中含有________；按功能劃分，該培養基為________培養基和________培養基。(3)該培養基上分離出的細菌一定都是以尿素為氮源的細菌嗎？若不是，如何從中確定以尿素為氮源的細菌？______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。答案(1)葡萄糖、尿素(2)固體瓊脂糖選擇鑒別(3)不一定都是以尿素為氮源的細菌，也有可能含有固氮細菌。因為尿素分解菌能夠將培養基中的尿素分解為氨，造成周圍的培養基呈堿性而使酚紅指示劑變紅，所以菌落周圍有紅色環帶的為尿素分解菌10．(9分)幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內采集樣本并制成菌液后，進行分離培養。實驗基本步驟如下：eq\x(配制培養基)→eq\x(滅菌、倒平板)→eq\x(X)→eq\x(培養)→eq\x(觀察)請回答：(1)在配制培養基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有________，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現________色環帶。(2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是________滅菌。A．高壓蒸汽 B．紫外燈照射C．70%酒精浸泡 D．過濾(3)步驟X表示________。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液________到培養基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得________菌落。(4)在培養時，需將培養皿倒置并放在________中。若不倒置培養，將導致________。(5)臨床上用14C呼氣試驗檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp能將14C標記的________分解為NH3和14CO解析(1)脲酶能特異性地催化尿素水解釋放出NH3和CO2。所以加入尿素作為氮源，加入酚紅指示劑(高pH時呈現紅色)能指示以尿素為氮源的細菌的存在。(2)由于尿素在高溫下會分解，因此對尿素溶液的滅菌要采用玻璃漏斗過濾的方法。(3)本題運用的是涂布分離法，該方法能更容易獲得單菌落，但操作較復雜。(4)在倒平板和培養過程中，會產生水蒸氣，如果正置，那么水蒸氣在皿蓋上凝結成水珠后滴在培養基上，會污染細菌，導致不能分離出單菌落。(5)該題中Hp含有脲酶，能把尿素分解成NH3和CO2。患者通過服用被14C標記的尿素并檢測呼氣中的被14C標記的CO答案(1)脲酶紅(2)D(3)接種涂布單(4)恒溫培養箱無法形成單菌落(5)尿素11．(10分)富集培養是微生物學中最強有力的技術手段之一，主要是指利用不同微生物間生命活動的特點不同，僅適應該條件的微生物生長旺盛，從而使其在群落中的數量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離得到所需的特定微生物。富集條件可根據所需分離的微生物的特點，從物理、化學、生物等綜合多個方面進行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養等許多方面。如圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物的實驗過程。請分析回答下面的問題。(1)本實驗所需要的培養基為________，碳源為________________________________________________________________。(2)實驗原理是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)①→③重復培養的目的是________________________________________________________________。(4)⑤的菌落中大部分是降解____________________的微生物。(5)⑥為________組，⑦為________組，設置⑥的目的是_________________________________________________________________。(6)⑤→⑥采用________________________法，接種到⑥的培養基中，在操作過程中為防止污染應注意的事項是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析本題考查了微生物培養的相關知識。先用含有對羥基苯甲酸為唯一碳源的液體培養基，經過富集培養之后，將其涂布到固體平板培養基中分離培養，然后將單菌落接種到液體培養基中，才能得到純度較高的微生物。答案(1)選擇培養基對羥基苯甲酸(2)利用以對羥基苯甲酸為唯一碳源的選擇培養基，經富集培養，選擇出能降解酚類化合物對羥基苯甲酸的微生物(3)增大分解對羥基苯甲酸微生物的比例(4)對羥基苯甲酸(5)對照實驗說明通過富集培養的確得到了欲分離的目標微生物(6)單菌落挑取接種環在火焰上灼燒滅菌，燒紅的接種環應在空氣中冷卻，同時，打開皿蓋挑取菌落接種到試管中，并塞好棉塞，接種環在火焰上灼燒，殺滅殘留物12．(9分)高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選了能高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖所示。(1)從用途上來說，Ⅰ號培養基屬于________培養基，僅以淀粉作為________源；從物理狀態上來說，Ⅱ號培養基屬于固體培養基，配制時一般加入________作為凝固劑。(2)進行①過程的目的是________；②過程所使用的接種方法是________法。(3)Ⅰ、Ⅱ號培養基配制和滅菌時，滅菌與調pH的先后順序是______________________；一般對配制的培養基采用________法滅菌。(4)部分嗜熱菌在Ⅰ號培養基上生長時可釋放淀粉酶分解培養基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，應挑出透明圈________(填“大”或“小”)的菌落，接種到Ⅱ號培養基上。解析(1)篩選特定微生物的培養基屬于選擇培養