深圳市血液中心

血液篩查工作情況匯報深圳市血液中心曾勁峰

1234抗-HTLV血液篩查獻血者不規則抗體的檢測化學發光檢測技術（CLIA）在血液篩查中的應用輸血安全相關科研工作匯報報告內容一、抗-HTLV血液篩查抗-HTLV血液篩查國內外概況人類嗜T淋巴細胞自血病病毒可通過血液途徑傳播，能引起惡性淋巴瘤、成人T淋巴細胞白血病(ATL)等疾病。我國抗-HTLV陽性人群主要分布于福建沿海地區、新疆和廣東地區，陽性率為0.01％~1.0％。為探索深圳地區獻血人群HTLV感染情況，我們于2014年初將其納入到血液篩查檢測項目中。抗-HTLV血液篩查國內外概況廈門已于十年前已經開展了抗－HTLV的檢測。

深圳市血液中心經過認真考慮，決定于2014年開始對深圳地區獻血人群開展抗－HTLV篩查。試劑：萬泰公司提供的抗－HTLV試劑。血液樣本常規酶免檢測HTLV酶免檢測初篩陽性樣本正常發放原樣管雙孔復檢復檢陽性樣本白膜層留樣送檢我中心HTLV檢測開展情況至今檢測數據2014年4月至今，共計檢測近10萬人份，初篩陽性標本共計73例抗-HTLV初篩陽性率：0.7‰

確證陽性2例目前，初篩陽性樣本送中國食品藥品檢定研究院確證實驗HTLV對獻血資格判定的顧慮由于政策法規的限制，HTLV不是法定檢測項目，因此未將HTLV初篩陽性的檢測結果用于獻血資格的控制我國衛生行政主管部門已決定在部分地區推動HTLV的檢測，如何完善相關行業法規及行業標準，值得我們共同討論二、獻血者不規則抗體的檢測國內外現狀1.

目的和意義美國、日本、澳大利亞等國家和我國的香港地區均已將不規則抗體篩查列入獻血者常規檢測。我國衛生行政部門目前尚未要求對獻血者進行抗體篩查。1.2不規則抗體的不良影響不規則抗體是除ABO血型系統抗體以外的所有抗體，是引起眾多臨床問題的主要原因之一。輸血不良反應不規則抗體血型鑒定困難新生兒溶血病疑難配型1.

目的和意義

◆

有利于早期發現和確認具有臨床意義的抗體；◆在配血前鑒定不規則抗體，可以避免由于尋找不到相合的血液而造成患者病情的延誤；◆特別對于交叉配血不合或有輸血史、妊娠史或短期內需要接收多次輸血者，能夠最大限度降低輸血風險。

1.3不規則抗體篩選的重要意義1.

目的和意義2014年8月至今，深圳市血液中心無償獻血者標本17939例符合獻血條件的獻血人群。

2.

技術和方法抗人球蛋白檢測卡，即不規則抗體篩檢卡（江蘇蘇大賽爾）不規則抗篩細胞（長春博德）

2.1樣品來源2.2試劑2.

技術和方法不規則抗篩細胞2.2試劑紅細胞血型抗體篩選格局圖序Rh-hrMNSsKiddDuffyLewisDiegoLutheranKellPXg序結果號DCEceMNSsJkaJkbFyaFybLeaLebDiaDibLuaLubKkKpaKpbP1Xga號鹽水IAT1++--+++++-++-+--+-+-+-++-1

2+-+++++-++++--+++-+-+-+--2

3-+-++++-+-+++-+-+-+-+-+-+3

2.3儀器

2.技術和方法Aigel300全自動血庫系統◆微柱凝膠法：應用微柱凝膠法對17939例獻血者血漿進行不規則抗體篩查,對初篩陽性反應樣品重復檢測2次。仍為陽性反應的送輸血研究所做抗體特異性鑒定實驗。

干擾因素少，操作法簡單、方便、敏感性高；結果易判斷又能較長時間保存；操作具有可證明性，便于管理；④自動化、信息化程度高。2.技術和方法2.4方法3.

檢測數據標本量初檢陽性標本數量復檢陽性標本數量確診陽性標本數量1793934（0.19%）21（0.12%）21（0.12%）單位：例表1獻血人群不規則抗體篩查結果注：21例確診陽性標本中多數為抗－M抗體和冷抗體3.1數據種類3.1陽性標本示例一010740這個標本結果是1+，疑似陽性（確認結果為陰性）.3.檢測數據3.1陽性標本示例二211261這個標本的Ⅲ號篩選細胞為弱陽性（確認結果：冷抗體）3.檢測數據4.橫向合作的目的完善臨床輸血信息化管理系統

加強輸血管理，深圳市血液中心與合作醫院間的Lis系統進行關聯，有效實現了血液信息快速的互換共享。資料齊全與合作醫院的管理系統成功連接數據準確查詢方便統計快捷操作簡單管理規范安全備份4.橫向合作的目的◆評估深圳地區不規則抗體篩查的陽性率◆評估不規則抗體篩查結果對臨床患者交叉配血的影響◆確保受血者輸入獻血者的紅細胞的安全性，最大限度保證紅細胞的存活時間◆評估不規則抗體篩查對輸血安全風險，為電子交叉配血推廣和應用打下基礎合作意義4.橫向合作的目的電子配血，是將信息化技術應用到配血中的一種技術，就是將獻血者的血液信息和患者的血液信息輸入計算機，由計算機系統判斷和傳輸血型鑒定結果、審核血型信息并選擇相容性血液輸注。電子配血-優勢安全性節省人力物力節省時間減少血液浪費電子配血是未來輸血發展的必然趨勢。4.橫向合作的目的三、化學發光檢測技術（CLIA）在血液篩查中的應用在國內進口設備應用廣泛CLIA技術在血液篩查的應用情況（之一）澳大利亞，新西蘭，新加坡，馬來西亞，泰國，韓國，印度尼西亞，香港等國家和地區。以上國家基本都在使用Abbott的Prism化學發光系統。項目涉及：HBsAg，anti-HCV，anti-HIV1/2的血清學檢測。新加坡血液中心的檢測設備CLIA技術在血液篩查的應用情況（之二）日本使用的是自己開發的方法（CLEIAs,CL4800testingsystem,Fujirebio,Tokyo,Japan），檢測項目增加了anti-HBc（定性），anti-HBs（定量）。同時日本還常規檢測anti-HTLV1。CLIA技術在血液篩查的應用情況（之三）其他區域，如美國全部使用化學發光檢測系統用于血液篩查。檢測項目增加了anti-HBc，anti-HTLVI/II，anti-T-Cruzi(抗查格斯)等項目的檢測。而在歐洲，化學發光也被廣泛，如德國，法國等。病毒標志物的檢測糖尿病各類激素水平檢測感染性疾病心血管疾病腫瘤標志物檢測臨床應用廣泛為什么血站實驗室沒有應用?規范要求用于血液篩查的檢測試劑屬于藥品和三類醫療器械監督管理范疇，質量必須符合《中華人民共和國藥品管理法》和《中華人民共和國醫療器械監督管理條例》的有關規定；而一般醫院檢驗科試劑屬于三類醫療器械監督管理目前沒有國產CLIA試劑取得“藥字”號注冊資格。國產設備沒有普及，只有少數進口企業的產品可以應用，且使用成本相對較貴化學發光免疫技術未在國內血站實應用原因法律法規法律、法規評估國產CLIA設備連續工作的穩定性、可靠性；評估國產CLIA試劑的檢測靈敏度，特異性；評估CLIA檢測技術血站實驗室開展檢測的可行性；測試目的-評估內容CLIA試劑:深圳邁瑞公司生產的磁微粒化學發光檢測試劑。比對試劑：為血站現用的HBsAg3.0(Sorin)、HIV(Biorad)、TMA核酸檢測試劑(Grifols)AntiHBc(科華、萬泰、新創)及檢測項目:HIV(Ab/P24

Ag)、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc檢測平臺:全自動化學發光分析儀，血站現有ELISA及核酸檢測平臺檢測原理`材料：試劑及檢測平臺CLIA檢測血樣：2014年4月期間單獨采集的2163樣品(促凝管)考評試劑：CLIA磁微粒化學發光試劑(邁瑞)參考試劑：ELISA-HBsAg3.0(Sorin)、

HIV(Biorad)、AntiHBc(科華、萬泰、新創)TMA核酸檢測試劑(Grifols)樣本測試原則樣本在邁瑞CL2000i化學發光儀上測試HIV、HBsAg、HBeAg、Anti-HBc，測試與血站血篩同步進行重復測樣本挑選原則（重測三次）：考評試劑HBsAg結果與HBV核酸檢測或HBsAg酶免結果不符的樣本；考評試劑HBsAg結果為陽性或HBV核酸檢驗為陽性或HBsAg免疫檢驗結果陽性，而邁瑞HBeAg為陰性的樣本；考評試劑HIV測試結果與HIV核酸檢測或HIV酶免結果不符的樣本CLIA實驗設計

增強型ALP+AMPPD發光體系超順磁性微粒子分離系統

模塊化設計，單機最高240T/H，靈敏度高，精密度高，線性范圍寬一鍵實現試劑在線更換，檢測耗材少全自動化學發光儀CL2000i聯機/拓展圖單機圖CLIA實驗設計樣本結果處理：以三種方法測試中兩次測試一致的結果為CLIA系統最終結果。參考結果判定項目核酸結果ELISA結果參考結果（CLIA）HBsAg陽性陽性陽性陽性陰性陽性陰性陽性陽性陰性陰性陰性HIV陽性陽性陽性陽性陰性陽性陰性陽性陽性陰性陰性陰性Anti-HBc以三家結果AntiHBc(科華、萬泰、新創)均相同為參考結果HBeAg陽性樣本已羅氏和雅培結果為準，陰性樣本即認為陰性工作流程獻血樣本采集樣本離心處理化學發光及血站測試結果對比分析樣本重測與結果分析HIV抗原抗體試劑盒測試結果3例ELISA陽性全部檢出：對比試劑（羅氏+雅培）也為陽性；考察試劑初測23例假陽—后續分析：與采血管等有關；通過優化參數及試劑配方，19例重測全部轉陰，剩余4例假陽。系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數NAT216302163ELISA216032163系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數NAT216302163MR系統2140232163系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數血站結果216032163MR系統2140232163MRHIV化學發光VS血站結果(血站結果為參比)99.07%2140100.00%3MRHIV化學發光VSNAT(NAT為參比試劑)98.94%21400.00%0ELISAVSNAT(NAT為參比試劑)99.86%21600.00%0HBsAg測試結果MR系統與血站結果共有13例樣本結果不符。進行第三方試劑驗證：羅氏HBsAg定量檢測試劑盒與雅培HBsAg定量檢測試劑盒系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數NAT215122153ELISA2144192163系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數ELISA2144192163MR系統215492163系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數NAT215122153MR系統215492163系統陰性樣本陽性樣本總樣本數陰性符合率符合樣本數陽性符合率符合樣本數血站結論2142212163MR系統21549216399.86%21480.00%0MRHBsAg化學發光VS血站參考結果99.95%214142.86%9MRHBsAg化學發光VSNAT99.40%21380.00%0ELISAVSNATMRHBsAg化學發光VSELISA100.00%214447.37%913例結果不符HBsAg樣本驗證結果13例不符樣本，邁瑞系統與羅氏系統完全符合，與雅培有2例不符。2例不符樣本中1例(218#-20140407)深圳血站測試結果與雅培結果一致。1例(30#-20140421)深圳血站結果與雅培、羅氏和邁瑞結果均不一致！HBsAg樣本日期樣本編號核酸結果ELISA血站結論IU/ml結果IU/ml結果IU/ml結果20140415115NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg2014041610NegPOSPOS0.01Neg<0.05Neg0.04Neg2014041692NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041782NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140417116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.03Neg20140417218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.05POS2014041859NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.02Neg2014041887NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042034NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.04Neg20140420218POSNegPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg2014042130NegNegNeg0.48POS0.241POS0.82POS2014042146NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg20140423116NegPOSPOS0.00Neg<0.05Neg0.01Neg注：邁瑞系統cutoff為0.08IU/ml，羅氏為0.057IU/ml，雅培為0.05IU/ml深圳市血站測試結果MR系統測試結果羅氏e411系統測試結果雅培i1000系統測試結果12例參考HBsAg＋測試結果分析樣本日期樣本編號測試結果（IU/mL，CO=0.08IU/mL）ELISA核酸20140416200214203112460.00+-20140417200214303981420.00+-20140417200214304068420.00+-20140418200214203281460.00+-20140418200214203230420.00+-20140418200214005968420.01-+20140419200214203356440.00+-20140419200214101835460.00+-20140421200214203455420.00+-20140421200214101924440.00-+20140422200214101940440.01+-20140424200214304348460.01+-

捕獲一例HIV窗口期背景：捐血者：男，39歲，在我中心第一次獻血2015年3月15采集血樣，16日同時進行ELISA一遍、NAT一遍檢測。HIV檢測試劑為抗體/抗原試劑，TMA核酸檢測試劑；檢測結果：ELISA-/NAT+3月27日（采血12天后）進行第二次抽樣檢測。檢測結果：ELISA+/NAT+HIVELISA檢測漏檢例證HIVELISA檢測漏檢例證樣本采集日期邁瑞HIVAg/Ab(COI)羅氏HIVAg/Ab(COI)羅氏HIVAg(COI)ELISATMA抗HIV硒標方法WB帶型2015031562.5153.9399.980.23進口第四代0.019國產第三代＋－無特異性條帶2015032758.1151.9890.3711.24進口第四代0.22國產第三代＋－無特異性條帶對比測試結果說明:HIV化學發光法檢測窗口期早于ELISA2.CLIA試劑性能與進口CLIA試劑對本例樣品的HIV檢測性能相當行業規范對CLIA方法的政策性完善民族企業的崛起和進步，國產試劑、檢測平臺的發展檢測成本的降低國家對血篩試劑審批制度的改進

期待四、輸血安全相關科研工作匯報專門從事血液病毒核酸檢測的深入研究工作。研究輸血潛在的感染風險，提高中心的科研水平。1.成立核酸研究室1.人才的引進：2013年以來引進多名博士、碩士，提高科研能力2.購置科研設備，建立研究平臺3.建立先進的病毒分子生物學系統分析方法和技術。

聘請英國劍橋大學輸血醫學部JPALLAIN教授（英國兩院院士）為我中心核酸研究團隊客座