標準解讀

《GB/T 34757-2017 豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法》是一項國家標準，旨在規范豬流行性腹瀉病毒（PEDV）的實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測過程。該標準適用于豬只及相關樣本中PEDV核酸的定性檢測，為動物疫病防控提供了技術支持。

標準首先明確了實驗所需的材料與設備，包括但不限于特定引物和探針序列、RNA提取試劑盒、反轉錄酶以及熒光定量PCR儀等。對于樣品處理，規定了從采集到保存的具體要求，強調了防止交叉污染的重要性，并給出了推薦的保存條件以保證樣本質量。

在操作步驟方面，《GB/T 34757-2017》詳細描述了從樣品準備開始直至結果分析結束的全過程。這包括使用適當的試劑對樣品進行RNA提取；利用特異性引物及探針對目標區域進行擴增；設置合適的循環條件完成PCR反應；最后通過觀察Ct值來判斷是否存在PEDV感染。此外，還提供了陽性對照品的選擇建議及其制備方法，用于驗證整個實驗系統的有效性。

為了確保檢測結果的準確性和可靠性，本標準特別強調了質量控制措施的應用，比如定期校準儀器、使用已知濃度的標準物質作為參考等。同時，也提出了關于實驗數據記錄與報告編制的要求，確保信息完整且易于理解。


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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實施
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T34757—2017

豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法

Porcineepidemicdiarrhea—RT-PCRfordetectingvirusacid

2017-11-01發布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T34757—2017

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由中華人民共和國農業部提出

。

本標準由全國動物衛生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位東北農業大學中國動物衛生與流行病學中心河南牧業經濟學院河南農業

:、、、

大學

。

本標準主要起草人李一經邵衛星魏榮宋建德姜艷平袁麗萍唐麗杰喬薪瑗崔文徐耀輝

:、、、、、、、、、、

吳發興張志孫映雪魏戰勇李曉成

、、、、。

Ⅰ

GB/T34757—2017

豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法

1范圍

本標準規定了豬流行性腹瀉病毒檢測方法的儀器試劑樣品的采集和處理程

RT-PCR、、、RT-PCR

序電泳及結果判定的技術要求

、。

本標準適用于快速檢測豬臨床樣品豬小腸和新鮮糞便或細胞培養物中豬流行性腹瀉病毒核酸

()。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注明日期的引用文件僅注日期的版本適用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

鳥類病毒反轉錄酶

AMV:RNA(avianmyeloblastosisvirus)

堿基對

bp:(basepair)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

脫氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

種脫氧核糖核苷三磷酸混合物

dNTPs:4(deoxyribonucleosidetriphosphates)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(phosphate-bufferedsalinebuffer)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反轉錄聚合酶鏈式反應

RT-PCR:-(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)

酶抑制劑

RRI:RNA(rnaseribonucleaseinhibitor)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

4儀器

41擴增儀

.PCR。

42高速臺式冷凍離心機可控溫至離心速度可達以上

.:4℃、12000r/min。

43組織研磨器或者研缽

.。

44冰箱冰箱和以下超低溫冰箱

.2℃~8℃-70℃。

45核酸電泳儀和水平電泳槽

.。

46微量移液器量程分別和

.0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL100μL~

的移液器并配備與移液器相匹配的吸頭

1000μL,

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