HIV抗體篩查試驗山西醫科大學第二醫院檢驗科郭先鋒

HIV抗體檢測的目的和要點目的診斷血液篩查監測要點根據目的選擇檢測方法及檢測策略!嚴格遵守實驗室SOP篩查試驗陽性—需做確證試驗篩查試驗陰性—不應做確認試驗篩查及確證試驗均應做好咨詢工作HIV抗體篩查試驗試劑儲存溫度效期樣品血清血漿全血方法

酶聯免疫吸附試驗（ELISA化學發光或免疫熒光實驗快速檢測(RT)及其它檢測試驗

明膠顆粒凝集試驗（PA）免疫滲濾試驗免疫層析試驗免疫膠體金法（硒）免疫膠體金法陰性質控區（C）出現紅色反應線陽性質控區（C）出現紅色反應線檢測區（T）出現紅色反應線無效質控區（C）未出現紅色反應線HIV抗體篩查試驗HIV抗體篩查試驗

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）方法類型

雙抗原夾心法測抗體雙抗體夾心法測抗原捕獲法測抗體間接法測抗體競爭法測抗原\抗體用于檢測HIV抗體的ELISA法第一代：使用HIV全病毒裂解物為抗原，應用間接法原理檢測HIV抗體。如日本富士公司生產的HIV-PA試劑。第二代：使用在細菌或真菌中表達的人工重組或化學合成多肽HIV抗原，應用間接法原理檢測HIV抗體。基因重組通常易于在培養基中生產大量同源性抗原，產品為單一目的基因而非多樣性抗原混合，特異性高于第一代試劑。用于檢測HIV抗體的ELISA法第三代：使用合成多肽HIV抗原（少數用重組抗原），應用雙抗原夾心法原理檢測HIV抗體。由于標記HIV抗原可同時檢測血清中HIV-1IgG、IgM、IgA抗體，此類試劑的敏感性和特異性均優于標記抗人免疫球蛋白的間接法。高純度的HIV-1/-2型抗原待檢抗體酶標記的HIV-1/-2型抗原用于檢測HIV抗體的ELISA法第四代此類試劑在第三代試劑盒基礎上，將針對P24抗原的抗體與HIV-1抗原一起包被固相載體，可同時檢測HIV-1IgG、IgM、IgA抗體和P24抗原。增加了敏感性和特異性檢測HIV抗體的ELISA試劑試劑種類必須使用經國家食品藥品監督管理局注冊批準，批批檢合格的HIV抗體檢測試劑使用在有效期內且保存條件符合要求的試劑存放試劑的冰箱溫度2-8℃，使用前要放置室溫平衡檢測HIV抗體的ELISA試劑完整的ELISA試劑盒包含以下各組分

已包被抗原或抗體的固相載體酶標記的抗原或抗體

酶的底物

陰性對照品和陽性對照品定性測定

標本（和結合物）的稀釋液

洗滌液

酶反應終止液ELISA檢測試劑固相載體

固相載體材質

聚苯乙烯

固相載體形狀

微量滴定板

檢測HIV抗體的ELISA試劑結合物（酶標記的抗體或抗原）辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)底物

四甲基聯苯胺(TMB)反應后顯藍色，終止后呈黃色，最適吸收波長為450nm

檢測HIV抗體的ELISA試劑洗滌液常用含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水終止液HRP常用強酸，最常見2mol/L硫酸

ELISA試驗

標本的采取和保存加樣孵育洗滌顯色與終止酶標儀測定標本的采取和保存

避免溶血紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色

避免污染血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應保存一周內2～8℃一周以上-20℃標本送檢信息姓名外螺旋蓋（帶膠墊）血清管

√×接收樣本時，必須填寫樣本接收記錄單建立樣本的唯一性編碼

登記有關信息受檢者姓名、性別、年齡、職業、送檢單位、人群類別、檢驗結果、送檢日期、報告日期

樣本的接收樣本的接收認真核對樣本與送檢單提供的信息是否相符、樣本有無破損和滲漏。如發現滲漏的，立即將尚存的樣本移出，對樣本管及包裝進行消毒，同時報告主管領導和有關專家檢查樣本的物理性狀。并做好記錄。如果樣本不符合試驗的要求，應將樣本安全廢棄，同時立即通知送樣人樣本的接收實驗室工作人員在打開樣本容器時，須小心，防止內容物崩濺。樣本處理時，須穿戴防護衣，在生物安全柜中操作，同時應戴一次性口罩、防護眼鏡，防止皮膚、粘膜污染。用后的包裝要進行消毒檢測方法必須按照試劑盒說明書（sop）中規定的要求進行操作包括進行檢測的實驗條件如陽性對照和陰性對照的設置、試劑、標本加樣量、孵育時間、反應溫度、洗滌程序和次數等

標本質量

冷凍樣品實驗前需解凍并混勻，血清或血漿樣品如溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況，可能會對試驗產生影響

加樣

移液器(包括單頭和多頭移液器)是實驗室中重要的基本器具，一年至少校準一次準確加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡，加入后及時放入孵箱檢測方法檢測方法

孵育孵育的溫度要控制好，時間要掌握好，嚴格按照說明書操作注意封板，避免蒸發反應板不宜疊放，反應板至水面下的1/3處，以保證各板的溫度都能迅速平衡，保證溫度的均一性檢測方法

洗滌各種試劑盒的洗液不要混用。按要求稀釋，洗液如果結晶應待其融解后配制檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現象按孔的大小調節好洗液的量孔內液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內形成氣泡檢測方法

顯色與終止顯色劑不用過期顯色劑加終止液時應避免產生氣泡。如產生較多氣泡，則會導致假陽性酶標儀測定每天（每次）核對酶標儀濾光片波長查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現象每周清潔儀器表面，保護光學零件，不沾灰塵每月洗滌時檢查各孔是否與相應的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規定要求，這是保證各孔洗滌均衡一致的前提℃℃℃ELISA洗板機與酶標儀(推薦方法)結果報告分析結果及發出檢測報告前，應在試劑盒和外部質控品結果滿足要求的前提下，對樣品進行分析，試劑盒及外部質控品不合格，樣品需要重新檢測，復核人對檢測結果進行仔細復核并對結果提出結論，簽發人對試驗結論進行審核、分析、總結、簽字

結