標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 27536-2011 豬流感病毒分離與鑒定方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在提供一套科學(xué)、系統(tǒng)的方法來(lái)從疑似感染豬流感的樣本中分離并鑒定豬流感病毒。該標(biāo)準(zhǔn)適用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室及研究機(jī)構(gòu)對(duì)豬流感病毒的研究工作。

根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，首先明確了樣品采集的要求，包括但不限于鼻拭子、氣管和肺組織等樣本類(lèi)型的選擇，以及如何正確保存這些樣本以確保其在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性。接著，詳細(xì)描述了病毒分離的具體步驟，如使用特定細(xì)胞系（例如MDCK細(xì)胞）進(jìn)行培養(yǎng)，并通過(guò)觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)初步判斷是否存在病毒感染。

對(duì)于已成功分離出的病毒株，該標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定了一系列分子生物學(xué)技術(shù)用于進(jìn)一步確認(rèn)其身份，比如RT-PCR擴(kuò)增特定基因片段、測(cè)序分析以及血凝抑制試驗(yàn)(HI test)等。此外，也提到了利用單克隆抗體進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)(IFAT)或ELISA實(shí)驗(yàn)作為輔助手段之一。


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  • 2011-11-21 頒布
  • 2012-03-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27536—2011

豬流感病毒分離與鑒定方法

Isolationandidentificationofswineinfluenzavirus

2011-11-21發(fā)布2012-03-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T27536—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人喬傳玲楊煥良陳艷辛?xí)怨怅惢m

:、、、、。

Ⅰ

GB/T27536—2011

豬流感病毒分離與鑒定方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬流感病毒分離與鑒定方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種亞型豬流感的病原分離和鑒定

。

2試驗(yàn)材料試劑

、

21剪刀鑷子

.、。

22注射器

.1mL。

23單道及多道微量移液器吸頭

.、。

24日齡雞胚

.9~11SPF。

25犬腎細(xì)胞

.(MDCK)。

26孔培養(yǎng)板

.6。

27培養(yǎng)基

.DMEM。

28緩沖液儲(chǔ)存液

.HEPES(1mol/L)。

29胎牛血清

.。

210胰蛋白酶胰蛋白酶經(jīng)處理

.TPCK-(TPCK)。

211磷酸鹽緩沖液參見(jiàn)附錄中

.0.01mol/LpH7.0~7.4(PBS)(AA.1)。

212磷酸鹽緩沖液參見(jiàn)附錄中

.(pH5.9)(AA.5)。

213生理鹽水參見(jiàn)附錄中

.0.85%(AA.2)。

214阿氏液參見(jiàn)附錄中

.(Alsevers)(AA.3)。

215紅細(xì)胞懸液參見(jiàn)附錄中

.0.5%(AA.4)。

216胎球蛋白參見(jiàn)附錄中

.(AA.6)。

217過(guò)碘酸鹽參見(jiàn)附錄中

.(AA.7)。

218亞砷酸鹽參見(jiàn)附錄中

.(AA.8)。

219硫代巴比妥酸參見(jiàn)附錄中

.(AA.9)。

220無(wú)菌蒸餾水或去離子水

.。

3儀器

31生物安全柜柜內(nèi)負(fù)壓有過(guò)濾器可避免細(xì)胞培養(yǎng)物污染及保護(hù)操作人員安全

.(,HEPA)。

32孵化器

.。

33培養(yǎng)箱

.CO2。

34臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)

.。

35水浴加熱器

.37℃。

36煮沸鍋

.。

37

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